Vývojová platforma Aptamer

Aptamery jsou jednovláknové oligonukleotidy (DNA, RNA nebo XNA) s vysokou afinitou a vysokou specificitou, které se specificky vážou na cílové molekuly, jako jsou protilátky, a jsou široce používány pro vývoj biosenzorů, diagnostiku a terapeutika.

Platforma aptamerů poskytovaná společností Alpha Lifetech zahrnuje dvě kategorie: platformu pro syntézu aptamerů, která zahrnuje zejména službu syntézy knihovny aptamerů SELEX a vývojovou službu aptamerů (DNA, RNA nebo XNA), a platformu pro screening aptamerů včetně služeb screeningu založených na technologii SELEX pro proteiny, peptidy, buňky, malé molekuly, kovové ionty a další cílové molekuly, jakož i služby optimalizace a identifikace aptamerů.

Platforma pro syntézu aptamerů

Služba syntézy knihovny aptamerů SELEX

Služba syntézy knihovny aptamerů SELEX zahrnuje hlavně konstrukci knihovny obsahující velký počet náhodných jednořetězcových oligonukleotidových sekvencí chemickou syntézou in vitro podle cílových molekul. Konstrukce knihovny je výchozím bodem technologie SELEX, která poskytuje velké množství kandidátních sekvencí pro následný screeningový proces konstrukcí obrovských náhodných knihoven a zvyšuje možnost screeningu vysokoafinitních aptamerů.

Syntéza knihovny se dělí hlavně do následujících kroků:

Kroky	Podrobnosti o technologii
Identifikujte cílové molekuly	Identifikujte cílové molekuly, které je třeba testovat na aptamery, což mohou být proteiny, nukleové kyseliny, malé molekuly, kovové ionty atd.
Návrh náhodné sekvence	Délka náhodné sekvence, složení bází a další parametry byly navrženy podle charakteristik cílových molekul a požadavků na screening. Náhodné sekvence mají obvykle délku mezi desítkami a stovkami bází.
Syntéza pevných sekvencí	Jsou navrženy a syntetizovány oligonukleotidové fragmenty s fixními sekvencemi (jako jsou sekvence PCR primerů) na obou koncích, které budou použity v následném procesu amplifikace a screeningu.

Syntetizovaná knihovna musí být ještě dále zpracována pro kontrolu kvality. Koncentrace knihovny byla určena k zajištění její použitelnosti v následném screeningovém procesu. Diverzita a přesnost náhodných sekvencí v knihovně byla ověřena sekvenováním a dalšími metodami, aby se zajistilo, že kvalita knihovny splňuje požadavky na screening.

Prostřednictvím výše uvedených kroků lze syntetizovat vysoce kvalitní a vysoce různorodou knihovnu aptamerů SELEX, která může poskytnout hojné kandidátní sekvence pro následný proces screeningu.

Služby vývoje aptamerů (DNA, RNA nebo XNA)

Aptamery obvykle označují aptamery nukleové kyseliny. Aptamery nukleové kyseliny zahrnují DNA aptamery, RNA aptamery a XNA aptamery, což jsou chemicky modifikované aptamery nukleové kyseliny. Technika SELEX je široce používána pro vývoj aptamerů. Základní pracovní postup služeb vývoje aptamerů zahrnuje konstrukci knihovny, vazbu cíle, izolaci a purifikaci, amplifikaci, více kol screeningu a identifikaci sekvence. Po mnoho let se zaměřujeme na výstavbu knihoven a bohaté zkušenosti s vývojem aptamerů. Zavázali jsme se poskytovat zákazníkům lepší služby.

Proces technologie SELEX

Proces SELEX se skládá z několika kol, z nichž každé se skládá z následujících klíčových kroků:

Knihovna a cílová vazba

Konstruovaná knihovna nukleových kyselin je smíchána se specifickými cílovými molekulami (jako jsou proteiny, sloučeniny s malými molekulami atd.), takže sekvence nukleových kyselin v knihovně mají příležitost vázat se na cílové molekuly.

Izolace nenavázaných molekul

Sekvence nukleových kyselin, které nejsou navázány na cílovou molekulu, jsou ze směsi separovány specifickými metodami, jako je afinitní chromatografie, separace magnetickými kuličkami atd.

Amplifikace vazebných molekul

Sekvence nukleové kyseliny navázaná na cílovou molekulu je amplifikována, obvykle pomocí technologie polymerázové řetězové reakce (PCR). Pro následující fázi screeningu budou amplifikované sekvence použity jako výchozí knihovna.

Obr. 1: Proces screeningu SELEX

Aptamer Screening Platform

Služba screeningu aptamerů

Alpha Lifetech nabízí širokou škálu specializovaných služeb screeningu aptamerů, které využívají různé metodiky SELEX pro různé typy vašich molekul:

Cílové typy	Technické detaily
Proteinový aptamerový screening společností SELEX	Hlavním účelem screeningu proteinových aptamerů je screening aptamerů, které se mohou specificky vázat na molekuly cílového proteinu. Tyto aptamery se jednodušeji syntetizují, jsou stabilnější a méně náchylné k faktorům prostředí.
Screening peptidových aptamerů od SELEX	Peptidové aptamery jsou třídou krátkých peptidových sekvencí s vysokou specificitou a afinitou, které se mohou specificky vázat na cílové látky a vykazují široký rozsah aplikačního potenciálu v biomedicínské oblasti. Prostřednictvím specifického screeningového procesu jsou peptidové aptamery, které se mohou specificky vázat na cílové molekuly, testovány z velkého počtu knihoven náhodných peptidových sekvencí.
Buněčně specifický screening aptamerů (Cell-SELEX)	Cílové buňky nebo specifické molekuly na buněčném povrchu jsou připraveny jako cíle. Cíle mohou být celé buňky, receptory na buněčné membráně, proteiny nebo jiné malé molekuly.
Screening aptamerů malých molekul pomocí Capture SELEX	Capture SELEX je in vitro screeningová technika pro screening aptamerů s malou molekulou, což je varianta SELEX. Capture SELEX je zvláště vhodný pro skríning aptamerů malých molekulových cílů, které mají typicky méně funkčních skupin a je obtížné je imobilizovat přímo na nosiče pevné fáze.
Služby SELEX založené na živých zvířatech	Screeningová služba na živých zvířatech je experimentální technika široce používaná v oblasti biovědy, medicíny a biotechnologie, která využívá živá zvířata jako experimentální modely pro screening a hodnocení specifických molekul, medikamentů, léčiv nebo biologických procesů. Služby jsou navrženy tak, aby simulovaly fyziologické prostředí v lidském těle, aby bylo možné přesněji předpovídat a vyhodnocovat účinnost a bezpečnost experimentálních výsledků v lidském těle.

Služba optimalizace aptamerů

Hydrofilita, vysoká ztráta afinity během produkce a rychlé vylučování aptamerů omezují jejich aplikaci. V současné době byla prozkoumána řada optimalizačních metod pro zvýšení výkonu aptamerů.

Máme také různé způsoby, jak optimalizovat aptamer sestávající ze zkrácení, modifikací, konjugace na vhodnou skupinu (thiol, karboxy, amin, fluorofor atd.).

Služba analýzy charakterizace aptameru

Služba analýzy charakterizace aptameru se týká profesionální služby rozlišení struktury hodnocení výkonu a funkčního ověření získaného aptameru, aby se zajistilo, že aptamer splňuje požadavky na specifickou vazebnou schopnost, stabilitu a specificitu. Zahrnuje především analýzu afinity a specificity, hodnocení stability a ověření biologické funkce.