Úvod do syntetizovaných knihoven protilátek

Syntetizovaná knihovna protilátek, známá také jako De novo knihovna, je syntetická metoda, která využívá techniky, jako je syntéza DNA nebo fágový displej, k návrhu a syntéze kompletních variabilních oblastí protilátek, včetně oblastí základní struktury a CDR, bez spoléhání se na knihovny naivních protilátek.

Knihovna polosyntetických protilátek vzniká kombinací přirozeně se vyskytujících knihoven protilátek se syntetickou diverzitou. Obvykle zahrnuje syntézu DNA oligonukleotidů za účelem vytvoření sady různých komplementaritu určujících oblastí (CDR), které jsou poté kombinovány s konstantní protilátkovou strukturou odvozenou z přírodních zdrojů, jako jsou lidské nebo zvířecí B buňky. Syntetizovaná CDR vnáší do knihovny diverzitu, což vede k protilátkám cíleným na širokou škálu epitopů. Knihovna polosyntetických protilátek představuje kompromis mezi přirozenou diverzitou imunitního systému a kontrolovanou diverzitou dosaženou syntetickými metodami.

Rozdíl mezi naivními a syntetickými knihovnami protilátek závisí na zdroji imunoglobulinových genů. Rozdíl mezi polosyntetizovanou a syntetizovanou knihovnou protilátek spočívá v tom, že první z nich se skládá z části segmentů naivních protilátek, jako je lehký nebo těžký řetězec, a pouze jeden z nich je syntetizován in vitro, zatímco syntetizovaná knihovna je zcela odvozena z umělé syntézy pomocí PCR in vitro.

Alpha Lifetech může poskytnout

Alpha Lifetech Inc.Můžeme nabídnout knihovnu částečně syntetizovaných/syntetizovaných protilátek ze zvířat a lidí založenou na naší profesionální platformě pro objevování protilátek. Díky dlouholetým zkušenostem s genetickou modifikací a konstrukcí knihoven lze sestavit syntetizované knihovny, které jsou schopny produkovat syntetické protilátky s afinitou a specificitou přesahující schopnost přirozených protilátek.Alpha LifetechOdborníci s hrdostí oznamují, že můžeme zaručit vysokou úspěšnost při konstrukci knihovny protilátek obsahující 10^8 – 10^10 nezávislých klonů.

Alpha Lifetech Inc.s hrdostí nabízí komplexní služby v oblasti konstrukce knihoven protilátek, které splňují rozmanité potřeby výzkumníků z celého světa, včetně knihoven protilátek scFv, Fab a VHH a knihoven na míru. Naším cílem je porozumět požadavkům různých zákazníků a uspokojit je a pomoci s jakýmikoli nadcházejícími a nově vznikajícími problémy ve výzkumné práci.

Proces výstavby syntetizovaných protilátek

Design
Fáze návrhu zahrnuje výběr protilátkových rámců a oblastí určujících komplementaritu (CDR) na základě existujících sekvencí protilátek nebo strukturních dat. Syntetické protilátky CDR mohou být také navrženy tak, aby zaváděly specifické funkce nebo zesilovaly vazebné vlastnosti.

Syntéza
Syntetická DNA kódující navržené sekvence protilátek, včetně rámcových oblastí i CDR, se syntetizuje chemickými nebo enzymatickými metodami.

Shromáždění
Syntetizované fragmenty DNA jsou sestaveny do expresních vektorů protilátek pomocí technik, jako je PCR, ligace nebo Gibsonova sestava. Tyto vektory pak mohou být zavedeny do expresních systémů, jako jsou bakteriální, kvasinkové nebo savčí buňky, pro produkci protilátek.

Screening a výběr
Konstruované knihovny protilátek jsou screenovány a selektovány na protilátky s požadovanými vlastnostmi za použití vysoce výkonných screeningových metod. To může zahrnovat techniky, jako je fágový displej, kvasinkový displej nebo ribozomový displej, v závislosti na formátu knihovny a aplikaci.

Výstavba syntetizovaných protilátek v knihovnách

Alpha Lifetech Inc.poskytuje zákazníkům komplexní služby v oblasti návrhu a syntézy knihoven protilátek ligací repertoárů V-genů těžkého a lehkého řetězce do fágového vektoru za použití systému specifické rekombinace Cre-lox za účelem vytvoření repertoáru Fab zobrazených na fágu, který zahrnuje 6,5 × 10^10 klonů. Knihovna poskytla protilátky proti řadě antigenů, některé s nanomolární afinitou. Generování knihovny lidských protilátek je založeno na technologii fágového displeje M13 (znázorněno na obrázku níže).