Beth yw Peirianneg Gwrthgyrff?

Gyda chymorth peirianneg gwrthgyrff, bu'n bosibl addasu maint moleciwlaidd, ffarmacocineteg, imiwnogenedd, affinedd rhwymol, penodoldeb a swyddogaeth effeithydd gwrthgyrff. Ar ôl syntheseiddio gwrthgyrff, mae rhwymiad penodol gwrthgyrff yn eu gwneud yn hynod werthfawr mewn diagnosis a thriniaeth glinigol. Trwy beirianneg gwrthgyrff, gallant ddiwallu anghenion datblygiad cynnar cyffuriau a diagnostig.

Pwrpas peirianneg gwrthgyrff yw dylunio a chynhyrchu swyddogaethau hynod benodol, sefydlog na all gwrthgyrff naturiol eu cyflawni, gan osod y sylfaen ar gyfer cynhyrchu gwrthgyrff therapiwtig.

Gall Alpha Lifetech, gyda'i brofiad prosiect helaeth mewn peirianneg gwrthgyrff, ddarparu gwasanaethau gwrthgyrff monoclonaidd a pholyclonaidd wedi'u teilwra ar gyfer rhywogaethau lluosog, yn ogystal â gwasanaethau adeiladu a sgrinio llyfrgell gwrthgyrff arddangos phage. Gall Alpha Lifetech ddarparu gwrthgyrff bio-debyg o ansawdd a chynhyrchion protein ailgyfunol i gwsmeriaid, yn ogystal â gwasanaethau cyfatebol, i gynhyrchu gwrthgyrff effeithlon, penodol iawn a sefydlog. Trwy ddefnyddio llwyfannau gwrthgyrff, protein a systemau arddangos ffag cynhwysfawr, rydym yn darparu gwasanaethau sy'n cwmpasu cynhyrchu gwrthgyrff i fyny'r afon ac i lawr yr afon, gan gynnwys gwasanaethau technegol fel dyneiddio gwrthgyrff, puro gwrthgyrff, dilyniannu gwrthgyrff, a dilysu gwrthgyrff.

Mae cam arloesol peirianneg gwrthgyrff yn gysylltiedig â dwy dechnoleg:

--Technoleg DNA ailgyfunol

--Technoleg hybridoma

Mae datblygiad cyflym peirianneg gwrthgyrff yn gysylltiedig â thair technoleg bwysig:

--Technoleg clonio genynnau ac adwaith cadwyn polymeras

-- Mynegiant protein: Mae proteinau ailgyfunol yn cael eu cynhyrchu gan systemau mynegiant fel burum, firysau siâp gwialen, a phlanhigion

-- Dyluniad strwythurol gyda chymorth cyfrifiadur

Cafodd y genhedlaeth gyntaf o wrthgyrff eu dyneiddio ar gyfer cynhyrchu gwrthgyrff cimerig, lle roedd rhanbarth amrywiol gwrthgyrff monoclonaidd llygoden yn gysylltiedig â rhanbarth cyson moleciwlau IgG dynol. Trawsblannwyd rhanbarth rhwymo antigen (CDR) gwrthgorff monoclonaidd llygoden ail genhedlaeth i IgG dynol. Ac eithrio'r rhanbarth CDR, mae pob gwrthgyrff arall bron yn wrthgyrff dynol, a gwnaed ymdrechion i osgoi ysgogi ymatebion gwrthgyrff gwrth-lygoden dynol (HAMA) wrth ddefnyddio gwrthgyrff clôn llygoden ar gyfer triniaeth ddynol.

 

Er mwyn adeiladu llyfrgell arddangos phage, y cam cyntaf yw cael y genynnau sy'n amgodio gwrthgyrff, y gellir eu hynysu o gelloedd B anifeiliaid wedi'u himiwneiddio (adeiladu llyfrgell imiwnedd), wedi'u tynnu'n uniongyrchol o anifeiliaid nad ydynt wedi'u himiwneiddio (adeiladu llyfrgell naturiol), neu hyd yn oed eu cydosod yn vitro â darnau genynnau gwrthgyrff (adeiladu llyfrgell synthetig). Yna, caiff y genynnau eu chwyddo gan PCR, eu mewnosod i mewn i plasmidau, a'u mynegi mewn systemau cynnal addas (mynegiant burum (fel arfer Pichia pastoris), mynegiant procaryotig (E. coli fel arfer), mynegiant celloedd mamalaidd, mynegiant celloedd planhigion, a mynegiant celloedd pryfed sydd wedi'u heintio â firysau siâp gwialen). Y mwyaf cyffredin yw'r system mynegiant E. coli, sy'n integreiddio dilyniant gwrthgorff amgodio penodol i'r phage ac yn amgodio un o'r proteinau plisgyn phage (pIII neu pVIII). Mae ymasiad genyn o, Ac arddangos ar wyneb bacteriophages. Craidd y dechnoleg hon yw adeiladu llyfrgell arddangos phage, sydd â'r fantais dros lyfrgelloedd naturiol gan y gall fod â rhwymiad penodol. Yn dilyn hynny, mae gwrthgyrff â phenodoldeb antigen yn cael eu sgrinio trwy broses ddethol fiolegol, mae antigenau targed yn sefydlog, mae ffagau heb eu rhwymo yn cael eu golchi i ffwrdd dro ar ôl tro, ac mae ffagau rhwym yn cael eu golchi i ffwrdd i'w cyfoethogi ymhellach. Ar ôl tair rownd neu fwy o ailadrodd, mae penodolrwydd uchel a gwrthgyrff affinedd uchel yn cael eu hynysu.

Ffig 3: Adeiladu a Sgrinio Llyfrgell Gwrthgyrff

Gellir defnyddio technoleg DNA ailgyfunol i gynhyrchu darnau gwrthgyrff. I ddechrau dim ond trwy broteas gastrig y gellir hydrolyzed gwrthgyrff Fab i gynhyrchu (Fab ') 2 ddarn, sydd wedyn yn cael eu treulio gan papain i gynhyrchu darnau unigol o Fab. Mae'r darn Fv yn cynnwys VH a VL, sydd â sefydlogrwydd gwael oherwydd absenoldeb bondiau disulfide. Felly, mae VH a VL wedi'u cysylltu â'i gilydd trwy peptid byr o 15-20 asid amino i ffurfio gwrthgorff darn amrywiol cadwyn sengl (scFv) gyda phwysau moleciwlaidd o tua 25KDa.

Mae astudiaeth o strwythur gwrthgyrff yn Camelidae (Camel, LIama, ac Alpaca) wedi egluro mai dim ond cadwyni trwm a dim cadwyni ysgafn sydd gan wrthgyrff, felly fe'u gelwir yn wrthgyrff cadwyn trwm (hcAb). Gelwir parth amrywiol gwrthgyrff cadwyn trwm yn wrthgyrff parth sengl neu nanogyrff neu VHH, gyda maint o 12-15 kDa. Fel monomerau, nid oes ganddynt fondiau disulfide ac maent yn sefydlog iawn, gyda chysylltiad uchel iawn ag antigenau.

Ffig 5: Gwrthgorff Cadwyn Drwm a VHH/ Nanobody

Mae mynegiant rhydd o gelloedd yn defnyddio mynegiant DNA naturiol neu synthetig i gyflawni synthesis protein in vitro, gan ddefnyddio'r system mynegiant E. coli yn nodweddiadol. Mae'n cynhyrchu proteinau yn gyflym ac yn osgoi'r baich metabolig a sytotocsig ar gelloedd wrth gynhyrchu symiau mawr o broteinau ailgyfunol in vivo. Gall hefyd gynhyrchu proteinau sy'n anodd eu syntheseiddio, fel y rhai sy'n anodd eu haddasu ar ôl cyfieithu neu syntheseiddio proteinau pilen.