Beth yw Peirianneg Gwrthgyrff?

Gyda chymorth peirianneg gwrthgyrff, mae wedi bod yn bosibl addasu maint moleciwlaidd, ffarmacocineteg, imiwnogenigrwydd, affinedd rhwymo, penodolrwydd a swyddogaeth effeithydd gwrthgyrff. Ar ôl syntheseiddio gwrthgyrff, mae rhwymo penodol gwrthgyrff yn eu gwneud yn werthfawr iawn mewn diagnosis a thriniaeth glinigol. Trwy beirianneg gwrthgyrff, gallant ddiwallu anghenion datblygiad cynnar cyffuriau a diagnostig.

Pwrpas peirianneg gwrthgyrff yw dylunio a chynhyrchu swyddogaethau sefydlog a phenodol iawn na all gwrthgyrff naturiol eu cyflawni, gan osod y sylfaen ar gyfer cynhyrchu gwrthgyrff therapiwtig.

Gall Alpha Lifetech, gyda'i phrofiad helaeth o brosiectau mewn peirianneg gwrthgyrff, ddarparu gwasanaethau gwrthgyrff monoclonal a polyclonal wedi'u teilwra ar gyfer sawl rhywogaeth, yn ogystal â gwasanaethau adeiladu a sgrinio llyfrgelloedd gwrthgyrff arddangos ffag. Gall Alpha Lifetech ddarparu gwrthgyrff biodebyg o ansawdd a chynhyrchion protein ailgyfunol i gwsmeriaid, yn ogystal â gwasanaethau cyfatebol, i gynhyrchu gwrthgyrff effeithlon, penodol iawn, a sefydlog. Trwy ddefnyddio gwrthgyrff cynhwysfawr, llwyfannau protein a systemau arddangos ffag, rydym yn darparu gwasanaethau sy'n cwmpasu'r broses o gynhyrchu gwrthgyrff i fyny ac i lawr, gan gynnwys gwasanaethau technegol fel dynoleiddio gwrthgyrff, puro gwrthgyrff, dilyniannu gwrthgyrff, a dilysu gwrthgyrff.

Mae cam arloesol peirianneg gwrthgyrff yn gysylltiedig â dau dechnoleg:

--Technoleg DNA ailgyfunol

--Technoleg hybridoma

Mae datblygiad cyflym peirianneg gwrthgyrff yn gysylltiedig â thri thechnoleg bwysig:

--Technoleg clonio genynnau ac adwaith cadwyn polymerase

--Mynegiant protein: Cynhyrchir proteinau ailgyfunol gan systemau mynegiant fel burum, firysau siâp gwialen, a phlanhigion

--Dylunio strwythurol â chymorth cyfrifiadur

Cafodd y genhedlaeth gyntaf o wrthgyrff eu dynoleiddio ar gyfer cynhyrchu gwrthgyrff chimerig, lle cysylltwyd rhanbarth amrywiol gwrthgyrff monoclonal llygoden â rhanbarth cyson moleciwlau IgG dynol. Trawsblannwyd rhanbarth rhwymo antigen (CDR) gwrthgorff monoclonal llygoden yr ail genhedlaeth i IgG dynol. Ac eithrio'r rhanbarth CDR, mae pob gwrthgorff arall bron yn wrthgyrff dynol, a gwnaed ymdrechion i osgoi ysgogi ymatebion gwrthgorff llygoden ddynol (HAMA) wrth ddefnyddio gwrthgyrff clôn llygoden ar gyfer triniaeth ddynol.

 

I adeiladu llyfrgell arddangos ffag, y cam cyntaf yw cael y genynnau sy'n amgodio gwrthgyrff, y gellir eu hynysu o gelloedd B anifeiliaid wedi'u himiwneiddio (adeiladu llyfrgell imiwnedd), eu tynnu'n uniongyrchol o anifeiliaid heb eu himiwneiddio (adeiladu llyfrgell naturiol), neu hyd yn oed eu cydosod in vitro gyda darnau genynnau gwrthgyrff (adeiladu llyfrgell synthetig). Yna, caiff y genynnau eu mwyhau gan PCR, eu mewnosod mewn plasmidau, a'u mynegi mewn systemau gwesteiwr addas (mynegiant burum (fel arfer Pichia pastoris), mynegiant procariotig (fel arfer E. coli), mynegiant celloedd mamaliaid, mynegiant celloedd planhigion, a mynegiant celloedd pryfed wedi'u heintio â firysau siâp gwialen). Y mwyaf cyffredin yw'r system mynegiant E. coli, sy'n integreiddio dilyniant gwrthgorff amgodio penodol ar y ffag ac yn amgodio un o broteinau cragen y ffag (pIII neu pVIII). Mae cyfuno genynnau bacterioffagau, ac yn cael eu harddangos ar wyneb y system. Craidd y dechnoleg hon yw adeiladu llyfrgell arddangos ffag, sydd â'r fantais dros lyfrgelloedd naturiol gan y gall gael rhwymiad penodol. Wedi hynny, caiff gwrthgyrff â phenodoldeb antigen eu sgrinio trwy broses ddethol fiolegol, caiff antigenau targed eu trwsio, caiff ffagau heb eu rhwymo eu golchi i ffwrdd dro ar ôl tro, a chaiff ffagau wedi'u rhwymo eu golchi i ffwrdd i'w cyfoethogi ymhellach. Ar ôl tair rownd neu fwy o ailadrodd, caiff gwrthgyrff â phenodoldeb uchel ac affinedd uchel eu hynysu.

Ffig 3: Adeiladu a Sgrinio Llyfrgell Gwrthgyrff

Gellir defnyddio technoleg DNA ailgyfunol i gynhyrchu darnau gwrthgyrff. Dim ond gan broteas gastrig y gellir hydrolysu gwrthgyrff Fab i ddechrau i gynhyrchu darnau (Fab')2, ac yna cânt eu treulio gan papain i gynhyrchu darnau Fab unigol. Mae'r darn Fv yn cynnwys VH a VL, sydd â sefydlogrwydd gwael oherwydd absenoldeb bondiau disulfide. Felly, mae VH a VL wedi'u cysylltu â'i gilydd trwy peptid byr o 15-20 asid amino i ffurfio gwrthgorff darn amrywiol cadwyn sengl (scFv) gyda phwysau moleciwlaidd o tua 25KDa.

Mae astudiaeth o strwythur gwrthgyrff mewn Camelidae (Camel, Liama, ac Alpaca) wedi egluro mai dim ond cadwyni trwm sydd gan wrthgyrff a dim cadwyni ysgafn, felly fe'u gelwir yn wrthgyrff cadwyn drwm (hcAb). Gelwir parth amrywiol gwrthgyrff cadwyn drwm yn wrthgyrff parth sengl neu nanogyrff neu VHH, gyda maint o 12-15 kDa. Fel monomerau, nid oes ganddynt fondiau disulfide ac maent yn sefydlog iawn, gydag affinedd uchel iawn ar gyfer antigenau.

Ffig 5: Gwrthgorff Cadwyn Drwm a VHH/Nanobody

Mae mynegiant rhydd celloedd yn defnyddio mynegiant DNA naturiol neu synthetig i gyflawni synthesis protein in vitro, gan ddefnyddio'r system mynegiant E. coli fel arfer. Mae'n cynhyrchu proteinau'n gyflym ac yn osgoi'r baich metabolaidd a cytotocsig ar gelloedd wrth gynhyrchu symiau mawr o broteinau ailgyfunol in vivo. Gall hefyd gynhyrchu proteinau sy'n anodd eu syntheseiddio, fel y rhai sy'n anodd eu haddasu ar ôl cyfieithu neu syntheseiddio proteinau pilen.