Gwasanaeth Dadansoddi Nodweddu Aptamer

Mae Alpha Lifetech wedi bod yn darparu gwasanaethau sy'n gysylltiedig ag aptamerau ers blynyddoedd lawer, ac ar hyn o bryd gall ddarparu cynlluniau datblygu aptamerau cynhwysfawr megis synthesis aptamerau, sgrinio SELEX, dilyniannu trwybwn uchel, ac optimeiddio a nodweddu aptamerau. Yn seiliedig ar fanteision dull SELEX ar gyfer sgrinio aptamerau, mae Alpha Lifetech wedi ehangu mwy o ddulliau ar gyfer sgrinio aptamerau.

Cyflwyniad i Ddadansoddi Nodweddu Aptamerau

Dilysu perthnasedd

Gwiriwyd yr affinedd aptamer wedi'i optimeiddio gan dechnegau perthnasol yr assay rhwymo aptamer. Mae enghreifftiau'n cynnwys Calorimetreg Titrad Isothermol (ITC), Cytometreg Llif (FCM), a Chyseiniant Plasmon Arwyneb (SPR), Microfluideg, ac ati. Fel arfer, mynegir affinedd aptamer gan y cysonyn daduniad (KD), maint ffisegol a ddefnyddir i fesur graddfa'r daduniad moleciwlaidd mewn adwaith gwrthdroadwy. Po leiaf yw'r gwerth KD, y mwyaf sefydlog yw'r cymhlyg, hynny yw, y cryfaf yw'r affinedd; i'r gwrthwyneb, po fwyaf yw'r gwerth KD, y mwyaf ansefydlog yw'r cymhlyg a'r wannaf yw'r affinedd. Y cam hwn yw'r allwedd i nodi perfformiad yr aptamer, gan sicrhau aeddfedu affinedd yr aptamer a'i fod yn gallu rhwymo i'r moleciwl targed gydag affinedd a detholusrwydd uchel mewn cymwysiadau ymarferol.

Ffig.1 Proses aeddfedu affinedd aptamer. Ffynhonnell gyfeirio:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Dilysu swyddogaeth

Yn ogystal â gwirio affinedd, mae angen gwirio swyddogaeth yr aptamer. Mae hyn yn cynnwys gwirio sefydlogrwydd, manylder a rhyngweithiadau'r aptamer â moleciwlau eraill mewn amgylchedd penodol. Bydd canlyniadau'r gwirio swyddogaethol yn effeithio'n uniongyrchol ar werth aptamerau mewn ymchwil wyddonol a chymwysiadau diwydiannol.

Dilysu Penodol

Arbrawf cystadleuol: Caiff gallu'r aptamer i rwymo i darged penodol ei werthuso ym mhresenoldeb targedau tebyg eraill. Os gall yr aptamer rwymo'n benodol i'r moleciwl targed heb ymyrraeth gan foleciwlau eraill, mae'n dangos bod ganddo benodolrwydd uchel.

Arbrawf croes-adwaith: Mae'r aptamer wedi'i rwymo i gyfres o dargedau cysylltiedig neu anghysylltiedig i weld a yw'n rhwymo i darged penodol yn unig, er mwyn gwirio ei benodolrwydd.

Gwirio sefydlogrwydd

Arbrawf diraddio niwcleas: Cafodd yr aptamerau eu hamlygu i wahanol grynodiadau o niwcleasau a gwelwyd eu diraddio. Drwy gymharu graddfa'r diraddio ar wahanol adegau, gellir gwerthuso gallu gwrth-ddiraddio niwcleas yr aptamer.

Arbrawf sefydlogrwydd tymheredd ac amser: Gosodwyd yr aptamer o dan amodau tymheredd ac amser gwahanol i arsylwi ei sefydlogrwydd strwythurol a swyddogaethol. Mae hyn yn helpu i bennu'r amodau storio a defnyddio gorau posibl ar gyfer aptamerau.

Adnabod gweithgaredd biolegol

Fel arfer, dewisir y dull priodol yn ôl nod cymhwysiad penodol yr aptamer asid niwclëig.

(1) Profi lefel foleciwlaidd: Defnyddio technegau bioleg foleciwlaidd, fel electrofforesis gel, Western blot, ac ati, i ganfod y cyfadeiladau a ffurfiwyd ar ôl i'r aptamer gyfuno â'r moleciwl targed, neu ganfod y newidiadau yn lefel mynegiant y moleciwl targed a achosir gan yr aptamer.

(2) Profi lefel celloedd: Drwy ddefnyddio technoleg diwylliant celloedd, caiff aptamers eu magu gyda chelloedd targed i arsylwi newidiadau biolegol fel morffoleg celloedd, amlhau ac apoptosis, a gwerthuso gweithgaredd biolegol aptamers.

(3) Profi modelau anifeiliaid: Mewn modelau anifeiliaid priodol, rhoddir aptamers asid niwclëig trwy bigiad neu weinyddu cyffuriau, ac arsylwir dangosyddion ffisiolegol a newidiadau patholegol anifeiliaid i werthuso gweithgaredd biolegol a diogelwch yr aptamers in vivo.