Aptamer-udviklingsplatform

Aptamerer er enkeltstrengede oligonukleotider (DNA, RNA eller XNA) med egenskaben høj affinitet og høj specificitet, der specifikt binder sig til målmolekyler som antistoffer, og de anvendes i vid udstrækning til udvikling af biosensorer, diagnose og terapi.

Aptamerplatformen leveret af Alpha Lifetech omfatter to kategorier: en aptamersynteseplatform, som primært involverer SELEX aptamerbibliotekssyntesetjeneste og aptamer (DNA, RNA eller XNA) udviklingstjeneste, og en aptamerscreeningsplatform, der inkluderer screeningstjenester baseret på SELEX-teknologi til proteiner, peptider, celler, små molekyler, metalioner og andre målmolekyler, samt downstream aptameroptimering og identifikationsanalysetjenester.

Aptamer synteseplatform

SELEX aptamerbibliotekssyntesetjeneste

SELEX aptamerbibliotekssyntesetjeneste involverer primært konstruktion af et bibliotek indeholdende et stort antal tilfældige enkeltstrengede oligonukleotidsekvenser ved in vitro kemisk syntese i henhold til målmolekylerne. Bibliotekskonstruktion er udgangspunktet for SELEX-teknologien, som leverer et stort antal kandidatsekvenser til den efterfølgende screeningsproces ved at konstruere enorme tilfældige biblioteker og øger muligheden for at screene aptamerer med høj affinitet.

Bibliotekssyntese er hovedsageligt opdelt i følgende trin:

Trin	Teknologidetaljer
Identificer målmolekyler	Identificer de målmolekyler, der skal screenes for aptamerer, som kan være proteiner, nukleinsyrer, småmolekylære stoffer, metalioner osv.
Design af tilfældig sekvens	Tilfældig sekvenslængde, basesammensætning og andre parametre blev designet i henhold til målmolekylernes karakteristika og screeningskrav. Typisk er tilfældige sekvenser mellem ti og hundredvis af baser i længden.
Syntese af faste sekvenser	Oligonukleotidfragmenter med fikserede sekvenser (såsom PCR-primersekvenser) i begge ender designes og syntetiseres, som vil blive brugt i den efterfølgende amplifikations- og screeningsproces.

Det syntetiserede bibliotek skal stadig bearbejdes yderligere for kvalitetskontrol. Bibliotekets koncentration blev bestemt for at sikre dets anvendelighed i den efterfølgende screeningsproces. Diversiteten og nøjagtigheden af tilfældige sekvenser i biblioteket blev verificeret ved hjælp af sekventering og andre metoder for at sikre, at bibliotekets kvalitet opfyldte screeningskravene.

Gennem ovenstående trin kan et SELEX aptamerbibliotek af høj kvalitet og meget forskelligartet syntetiseres, hvilket kan give rigelige kandidatsekvenser til den efterfølgende screeningsproces.

Aptamerudviklingstjenester (DNA, RNA eller XNA)

Aptamerer refererer normalt til nukleinsyreaptamerer. Nukleinsyreaptamerer omfatter DNA-aptamerer, RNA-aptamerer og XNA-aptamerer, som er kemisk modificerede nukleinsyreaptamerer. SELEX-teknikken anvendes i vid udstrækning til udvikling af aptamerer. Den grundlæggende arbejdsgang for aptamerudviklingstjenester omfatter bibliotekskonstruktion, targetbinding, isolering og oprensning, amplifikation, flere screeningsrunder og sekvensidentifikation. I mange år har vi fokuseret på bibliotekskonstruktion og har stor erfaring med aptamerudvikling. Vi er forpligtet til at give kunderne bedre service.

SELEX-teknologiproces

SELEX-processen består af flere runder, som hver består af følgende nøgletrin:

Bibliotek og målbinding

Det konstruerede nukleinsyrebibliotek blandes med specifikke målmolekyler (såsom proteiner, småmolekyleforbindelser osv.), således at nukleinsyresekvenserne i biblioteket har mulighed for at binde sig til målmolekylerne.

Isolering af ubundne molekyler

Nukleinsyresekvenser, der ikke er bundet til målmolekylet, separeres fra blandingen ved hjælp af specifikke metoder såsom affinitetskromatografi, magnetisk perleseparation osv.

Amplifikation af bindende molekyler

Nukleinsyresekvensen bundet til et målmolekyle amplificeres, normalt ved hjælp af polymerasekædereaktionsteknologi (PCR). I den efterfølgende screeningsfase vil de amplificerede sekvenser blive brugt som startbibliotek.

Figur 1: SELEX-screeningsproces

Aptamer-screeningsplatform

Aptamer-screeningstjeneste

Alpha Lifetech tilbyder en bred vifte af specialiserede aptamer-screeningstjenester, der anvender forskellige SELEX-metoder til forskellige typer af dine molekyler:

Måltyper	Tekniske detaljer
Protein Aptamer Screening af SELEX	Hovedformålet med screening af protein-aptamerer er at screene aptamerer, der specifikt kan binde sig til målproteinmolekyler. Disse aptamerer er enklere at syntetisere, mere stabile og mindre modtagelige for miljøfaktorer.
Peptid-aptamerscreening af SELEX	Peptid-aptamerer er en klasse af korte peptidsekvenser med høj specificitet og affinitet, som specifikt kan binde sig til målstoffer og udviser et bredt anvendelsespotentiale inden for det biomedicinske område. Gennem en specifik screeningsproces screenes peptid-aptamerer, der specifikt kan binde sig til målmolekyler, fra et stort antal tilfældige peptidsekvensbiblioteker.
Cellespecifik aptamerscreening (Cell-SELEX)	Målceller eller specifikke molekyler på celleoverfladen fremstilles som mål. Mål kan være hele celler, receptorer på cellemembranen, proteiner eller andre små molekyler.
Screening af småmolekyle-aptamerer ved hjælp af Capture SELEX	Capture SELEX er en in vitro-screeningsteknik til screening af småmolekylære aptamerer, som er en variant af SELEX. Capture SELEX er særligt velegnet til aptamer-screening af småmolekylære mål, som typisk har færre funktionelle grupper og er vanskelige at immobilisere direkte på fastfasebærere.
SELEX-tjenester baseret på levende dyr	Screening med levende dyr er en eksperimentel teknik, der er meget udbredt inden for biovidenskab, medicin og bioteknologi, og som bruger levende dyr som eksperimentelle modeller til at screene og evaluere specifikke molekyler, lægemidler, terapeutiske midler eller biologiske processer. Tjenesterne er designet til at simulere det fysiologiske miljø i menneskekroppen for mere præcist at forudsige og evaluere effektiviteten og sikkerheden af eksperimentelle resultater i menneskekroppen.

Aptamer-optimeringstjeneste

Hydrofiliciteten, det høje affinitetstab under produktionen og den hurtige udskillelse af aptamerer begrænser deres anvendelse. I øjeblikket er en række optimeringsmetoder blevet undersøgt for at forbedre aptamerers ydeevne.

Vi har også en række forskellige måder at optimere aptamer på, bestående af trunkering, modifikationer, konjugering til den passende gruppe (thiol, carboxy, amin, fluorofor osv.).

Aptamer karakteriseringsanalysetjeneste

Aptamerkarakteriseringsanalyse henviser til den professionelle service til evaluering af ydeevne, strukturopløsning og funktionel verifikation af den opnåede aptamer for at sikre, at aptameren opfylder de specifikke bindingsevne-, stabilitets- og specificitetskrav. Det omfatter primært affinitets- og specificitetsanalyse, stabilitetsevaluering og verifikation af biologisk funktion.