Platform til udvikling af fagdisplayantistoffer

Alpha Lifetech, med sin omfattende projekterfaring inden for antistofopdagelse, kan tilbyde skræddersyede monoklonale og polyklonale antistoftjenester til flere arter, samt konstruktion og screening af antistofbiblioteker. Alpha Lifetech kan tilbyde kunder kvalitetssikrede antistof- og rekombinante antistofprodukter samt tilsvarende tjenester til fremstilling af effektive, yderst specifikke og stabile antistoffer. Ved at anvende omfattende antistofplatforme og antistofteknik leverer vi tjenester, der dækker både opstrøms og nedstrøms antistofproduktion, herunder tekniske tjenester såsom antistofforberedelse, oprensning, antistofsekventering og validering.

Alpha Lifetech har en moden platform til antistofopdagelse, der tilbyder kunderne en række tjenester, herunder dyreimmunitet, konstruktion og screening af phage display-antistofbiblioteker, antistofsekventering, antistofekspression, antistofoprensning, antistofvalidering og antistofmærkning baseret på hybridomteknologi, enkelt-B-celleteknologi, phage display-teknologi og mere. Alpha Lifetech har en standard produktionslinje, og ud over antistofforberedelsestjenester kan der også leveres supporttjenester såsom antistofhumanisering, antistofaffinitetsmodning, ADC-lægemiddeldesign og -udvikling samt efterfølgende CAR-T-sekvensdesign. Samtidig har Alpha Lifetech konstrueret et antistofbibliotek baseret på M13-, T4- og T7-phage display-teknologiplatforme med en lagerkapacitet på op til 10^8-10^9. Den positive rate, insertion rate og diversitet af biblioteket kan alle nå over 90%.

Fagdisplayteknologi

Produktion af monoklonale antistoffer blev oprindeligt fremstillet ved hjælp af hybridoma-monoklonal-antistofteknologi til at producere musehybridom-monoklonalt antistof. Specifikt, ved at fusionere miltceller fra immuniserede mus med myelomceller fra mennesker eller mus, dannes hybridomceller, som udskiller specifikke hybridom-monoklonale antistof-antistoffer. Ved humaniseret modifikation af muse-monoklonale antistoffer og genteknologisk modifikation af antistofferne for at give dem en konstant human immunoglobulin-region, kan deres immunogenicitet reduceres. Monoklonal-antistof-teknologi anvendes i vid udstrækning i biomedicinske og kliniske anvendelser.

Alpha Lifetech kan tilbyde komplette antistoftekniske tjenester, lige fra design af præklinisk forskningsprotokol til opdagelse af antistof-lægemiddelkonjugater (ADC'er) og validering hos dyr. Antistof-lægemiddelkonjugater (ADC'er) kan levere kemoterapimedicin til kræftceller. Efter binding til specifikke mål udtrykt på kræftceller frigiver ADC cytotoksiske lægemidler i kræftcellerne. Alpha Lifetech kan også tilbyde kunder omfattende tjenester til modning af antistofaffinitet. Med avanceret mutationsoptimering og højkapacitets phage display screeningsteknologi screenes antistoffer med en bestemt affinitet først, og derefter introduceres aminosyremutationer for at generere forskellige varianter. Derefter blev antistoffer med høj affinitet evalueret og screenet ved hjælp af screeningsteknikker. Efter flere runder med optimering og strukturel analyse blev der i sidste ende opnået antistoffer med højere affinitet og stærkere specificitet.

Alpha Lifetech kan konstruere forskellige typer af antistof-fagdisplaybiblioteker, herunder immunbiblioteker, native biblioteker, semisyntetiske biblioteker og syntetiske biblioteker. Baseret på antistofbibliotekernes høje kapacitet kan der opnås meget specifikke antistoffer. Flere fagemidvektorer såsom pMECS, pComb3X og pCANTAB 5E kan leveres, såvel som stammer såsom TG1 E. coli, XL1 Blue og ER2738. Ud over en bibliotekskapacitet på op til 10^9 er bibliotekets insertionshastighed for målfragmenter også høj, hvilket skaber tilstrækkelige betingelser for screening af antistoffer, der tilfredsstiller kunderne. Flowchartet for Alpha Lifetechs antistofforberedelsesservice baseret på fagdisplayteknologi er vist i figur 1.

Fig. 1. Procesdiagram til fremstilling af monoklonale antistoffer baseret på fagdisplayteknologi.

Arbejdsgang til produktion af fagdisplayantistoffer

Trin	Serviceindhold	Tidslinje
Trin 1: Dyreimmunisering	(1) Dyreimmunisering 4 gange, boosterimmunisering 1 dosis, i alt 5 doser immuniseret. (2) Negativ serumprøve før immunisering blev indsamlet, og ELISA blev udført på den fjerde dosis for at detektere serumtiter. (3) Hvis serumantistoftiteren for den fjerde dosis opfylder kravene, vil der blive administreret én yderligere immuniseringsdosis 7 dage før blodprøvetagning. Hvis den ikke opfylder kravene, vil rutinemæssig immunisering fortsætte. (4) Kvalificeret potens, blodprøvetagning og separation af monocytter	10 uger
Trin 2: cDNA-forberedelse	(1) PBMC Total RNA-ekstraktion (RNA-ekstraktionskit) (2) Højfidelitets RT-PCR-præparation af cDNA (revers transkriptionskit)	1 dag
Trin 3: Konstruktion af antistofbibliotek	(1) Ved brug af cDNA som skabelon blev generne amplificeret ved to runder PCR. (2) Fagkonstruktion og -transformation: gensplejsningsfagmidvektor, elektroporationstransformation af TG1-værtsbakterier, konstruktion af antistofbibliotek. (3) Identifikation: Udvælg tilfældigt 24 kloner, PCR-identifikation positiv rate + insertion rate. (4) Assisteret fagpræparation: M13-fagamplifikation + oprensning. (5) Redning af fagdisplaybibliotek	3-4 uger
Trin 4: Screening af antistofbibliotek (3 runder)	(1) Standard 3-runde screening (fastfasescreening): trykscreening for at fjerne uspecifikke antistoffer i videst muligt omfang. (2) Enkeltklonamplifikation, selekteret med bakteriofag + IPTG-induceret ekspression + ELISA-detektion af positive kloner. (3) Alle positive kloner blev udvalgt til gensekventering.	4-5 uger

Fordel ved fagdisplayteknologi

Alpha Lifetech har stor erfaring inden for antistofudvikling. Gennem årene har Alpha Lifetech etableret en omfattende platform for antistofudvikling.

Supporttjenester

Vi kan tilbyde forskellige tjenester til konstruktion af dyrebaserede immunbiblioteker og screening af naturlige antistofbiblioteker efter kundens behov.

Flere mål

Der findes flere tjenester til opdagelse af målantistoffer: proteiner, peptider, små molekyler, vira, membranproteiner, mRNA osv.

Flere vektorer

Personlig bibliotekskonstruktionsservice. Vi kan tilbyde forskellige bakteriofagvektorer, herunder PMECS, pComb3X og pCANTAB 5E, og modificere dem efter kundens behov.

Moden platform

Lagerkapaciteten kan nå 10 ^ 8-10 ^ 9, indsættelsesraterne er alle over 90%, og affiniteten af antistoffer opnået gennem screening er generelt på nM pM-niveauet.

Relateret SERVICE

Flere strategier for udvikling af antistoffer

Monoklonal antistofudviklingstjeneste

Hybridoma-teknologiplatform

Enkelt B-celle sorteringsplatform

Platform til udvikling af fagdisplayantistoffer

udvikling af monoklonale antistoffer - Alpha Lifetech

Monoklonal antistofudviklingstjeneste

Vi kan tilbyde udviklingstjenester til monoklonale antistoffer af høj kvalitet, høj renhed og meget specifikke, herunder produktion af monoklonale antistoffer mod mus og monoklonale antistoffer mod kaniner.

Hybridoma-teknologiplatform

Herunder immuniseringsprogram, antistofforberedelsestjenester, antistofoprensning, antistof-high-throughput-sekventering, antistofvalidering osv.

Enkelt B-celle sorteringsplatform

Alpha Lifetech har fordele i screeningstid og opnåelse af antistoffer af høj kvalitet. Det kan tilbyde antigendesign, syntese og modifikation, dyreimmunitet, screening af enkelt B-celleberigelse og enkeltcellesekventering.