Phage Display Antibody Development Platform

Alpha Lifetech kan med sin omfattende projekterfaring inden for antistofopdagelse levere skræddersyede monoklonale og polyklonale antistoftjenester til flere arter, såvel som antistofbibliotekskonstruktion og -screeningstjenester. Alpha Lifetech kan give kunderne kvalitetssikrede antistof- og rekombinante antistofprodukter samt tilsvarende tjenester til at fremstille effektive, meget specifikke og stabile antistoffer. Ved at bruge omfattende antistofplatforme og antistofteknologi leverer vi tjenester, der dækker opstrøms og nedstrøms for antistofproduktion, herunder tekniske tjenester såsom antistofpræparation, oprensning, antistofsekventering og validering.

Alpha Lifetech har en moden antistofopdagelsesplatform, der giver kunderne en række tjenester, herunder dyreimmunitet, fagdisplay-antistofbibliotekskonstruktion og -screening, antistofsekventering, antistofekspression, antistofoprensning, antistofvalidering og antistofmærkning baseret på hybridomteknologi, enkelt B-celleteknologi, fagdisplayteknologi og mere. Alpha Lifetech har en standardproduktionslinje, og ud over antistofpræparationstjenester kan understøttende tjenester såsom antistofhumanisering, antistofaffinitetsmodning, ADC-lægemiddeldesign og -udvikling og CAR-T efterfølgende sekvensdesign også leveres. Samtidig har Alpha Lifetech konstrueret et antistofbibliotek baseret på M13, T4 og T7 fagdisplayteknologiplatforme med en lagerkapacitet på op til 10^8-10^9. Bibliotekets positive rate, indsættelsesrate og diversitet kan alle nå op på over 90 %.

Phage display teknologi

Produktion af monoklonale antistoffer blev oprindeligt fremstillet under anvendelse af hybridom monoklonalt antistofteknologi til fremstilling af musehybridoma monoklonalt antistof. Specifikt, ved at fusionere miltceller fra immuniserede mus med myelomceller fra mennesker eller mus, dannes hybridomceller, som udskiller specifikke hybridoma monoklonale antistoffer. Ved humaniseret modifikation af muse monoklonale antistoffer og gensplejsning modifikation af antistofferne for at give dem en konstant human immunoglobulinregion, kan deres immunogenicitet reduceres. Monoklonal antistofteknik er meget udbredt i biomedicinske og kliniske anvendelser.

Alpha Lifetech kan levere one-stop antistofingeniørtjenester fra design af præklinisk forskningsprotokol til opdagelse af antistoflægemiddelkonjugater (ADC'er) og dyrevalidering. Antistoflægemiddelkonjugater (ADC'er) kan levere kemoterapilægemidler til kræftceller. Efter binding til specifikke mål udtrykt på kræftceller, frigiver ADC cytotoksiske lægemidler til kræftceller. Alpha Lifetech kan også give kunderne omfattende antistofaffinitetsmodningstjenester. Med avanceret mutationsoptimering og high-throughput fagdisplayscreeningsteknologi screenes antistoffer med en vis affinitet først, og derefter introduceres aminosyremutationer for at generere forskellige varianter. Efterfølgende blev højaffinitetsantistoffer evalueret og screenet ved anvendelse af screeningsteknikker. Efter flere runder med optimering og strukturel analyse blev antistoffer med højere affinitet og stærkere specificitet til sidst opnået.

Alpha Lifetech kan konstruere forskellige typer antistoffag-displaybiblioteker, herunder immunbiblioteker, native biblioteker, semisyntetiske biblioteker og syntetiske biblioteker. Baseret på antistofbibliotekernes høje kapacitet kan der opnås meget specifikke antistoffer. Multiple fagmidvektorer såsom pMECS, pComb3X og pCANTAB 5E kan tilvejebringes, såvel som stammer såsom TG1 E. coli, XL1 Blue og ER2738. Ud over en bibliotekskapacitet på op til 10^9 er bibliotekets målfragmentindsættelseshastighed også høj, hvilket skaber tilstrækkelige betingelser for screening af antistoffer, der tilfredsstiller kunderne. Rutediagrammet for Alpha Lifetechs antistofpræparationsservice baseret på fagdisplayteknologi er vist i figur 1.

Fig. 1 Procesdiagram til fremstilling af monoklonale antistoffer baseret på fagdisplayteknologi.

Phage Display Antistof Produktion Workflow

Trin	Tjenesteindhold	Tidslinje
Trin 1: Dyreimmunisering	(1) Dyreimmunisering 4 gange, boosterimmunisering 1 dosis, i alt 5 doser immuniseret. (2) Negativt serum før immunisering blev opsamlet, og ELISA blev udført på den fjerde dosis for at påvise serumtiter. (3) Hvis serumantistoftiteren for den fjerde dosis opfylder kravene, vil der blive givet en yderligere dosis immunisering 7 dage før blodprøvetagning. Hvis det ikke opfylder kravene, vil rutinemæssig immunisering fortsætte. (4) Kvalificeret styrke, blodopsamling og adskillelse af monocytter	10 uger
Trin 2: cDNA-forberedelse	(1) PBMC Total RNA-ekstraktion (RNA-ekstraktionssæt) (2) High fidelity RT-PCR-præparation af cDNA (revers transcription kit)	1 dag
Trin 3: Konstruktion af antistofbibliotek	(1) Ved anvendelse af cDNA som skabelon blev gener amplificeret ved to omgange PCR. (2) Fagkonstruktion og -transformation: gensplejsningsfagmidvektor, elektroporationstransformation af TG1-værtsbakterier, konstruktion af antistofbibliotek. (3) Identifikation: Vælg tilfældigt 24 kloner, PCR-identifikation positiv hastighed+indsættelseshastighed. (4) Assisteret fagpræparation: M13-fagamplifikation+oprensning. (5) Genopretning af fagdisplaybibliotek	3-4 uger
Trin 4: Antistofbiblioteksscreening (3 runder)	(1) Standard 3-runder screening (fastfase screening): trykscreening for at fjerne uspecifikke antistoffer i størst muligt omfang. (2) Enkelt klon amplifikationsbakteriofag selekteret+IPTG-induceret ekspression+ELISA-detektion af positive kloner. (3) Alle positive kloner blev udvalgt til gensekventering.	4-5 uger

Fordel ved fagdisplayteknologi

Alpha Lifetech har stor erfaring inden for antistofudvikling. Alpha Lifetech har gennem årene etableret en omfattende antistofudviklingsplatform.

Supporttjenester

Vi kan levere forskellige dyrebaserede immunbibliotekskonstruktionstjenester og naturlige antistofbiblioteksscreeningstjenester i henhold til kundernes behov

Flere mål

Flere målantistofopdagelsestjenester er tilgængelige: proteiner, peptider, små molekyler, vira, membranproteiner, mRNA osv.

Flere vektorer

Personlig bibliotekskonstruktionsservice, vi kan levere forskellige bakteriofagvektorer, herunder PMECS, pComb3X og pCANTAB 5E, og modificere dem i henhold til kundernes behov

Moden platform

Opbevaringskapacitet kan nå 10 ^ 8-10 ^ 9, insertionshastigheder er alle over 90 %, og affiniteten af antistoffer opnået gennem screening er generelt på nM pM-niveauet

Relateret SERVICE

Flere antistofudviklingsstrategier

Monoklonal antistofudviklingstjeneste

Hybridoma teknologiplatform

Single B Cell Sorteringsplatform

Phage Display Antibody Development Platform

monoklonalt antistofudvikling-Alpha Lifetech

Monoklonal antistofudviklingstjeneste

Vi kan levere højkvalitets, høj renhed og meget specifikke monoklonale antistofudviklingstjenester, herunder produktion af muse monoklonale antistoffer og kanin monoklonale antistoffer

Hybridoma teknologiplatform

Inklusive immuniseringsprogram, antistofpræparationstjenester, antistofoprensning, antistof-high throughput-sekventering, antistofvalidering osv.

Single B Cell Sorteringsplatform

Alpha Lifetech har fordele med hensyn til screeningstid og opnåelse af antistoffer af høj kvalitet. Det kan give antigendesign, syntese og modifikation, dyreimmunitet, enkelt B-celle berigelse screening, enkelt celle sekventering.