Hybridoma-Technologieplattform

Alpha Lifetech verfügt über umfangreiche Erfahrung auf dem Gebiet der Antikörperentwicklung. Im Laufe der Jahre hat Alpha Lifetech eine umfassende Plattform für die Antikörperentwicklung aufgebaut (einschließlich der Entwicklung monoklonaler Antikörper, polyklonaler Antikörper, rekombinanter monoklonaler Antikörper sowie anderer Dienstleistungen im Bereich der Antikörperherstellung und -entwicklung).

Alpha Lifetech bietet seinen Kunden qualitätsgesicherte Antikörper und rekombinante Antikörperprodukte sowie Dienstleistungen an. Die hergestellten Antikörper zeichnen sich durch hohe Spezifität und gute Stabilität aus. Mithilfe verschiedener Geräte und Anlagen zur Antikörperreinigung können wir Antikörper aus unterschiedlichen Quellen wie monoklonalen Antikörpern von Kaninchen, Schaf, Huhn und Maus sowie Protein-A/G-Affinitätsreinigung und Antikörperseparation anbieten.

Basierend auf verschiedenen Antikörperpräparationstechniken, wie beispielsweise der Hybridomzelltechnologie, bietet Alpha Lifetech maßgeschneiderte Dienstleistungen für monoklonale und polyklonale Antikörper verschiedener Spezies. Darüber hinaus deckt das Leistungsspektrum von Hochdurchsatzsequenzierung über Antikörperpräparation und -reinigung bis hin zur Antikörpervalidierung ab. Die Wahl der Reinigungsmethode richtet sich nach den spezifischen Anforderungen des Kunden. Mit umfassenden Plattformsystemen, wie beispielsweise der Antikörperentwicklungs- und der Proteinplattform, bietet Alpha Lifetech Upstream- und Downstream-Services für die Antikörperproduktion an, darunter Antikörperreinigung, Hochdurchsatzsequenzierung, Antikörpervalidierung und weitere technische Dienstleistungen.

Hybridom-Technologie

Die Hybridom-Technologie ermöglicht die Herstellung monoklonaler Antikörper. Durch die Fusion von Milzzellen immunisierter Mäuse mit Myelomzellen von Menschen oder Mäusen entstehen Hybridomzellen, die spezifische Antikörper sezernieren. Die so gewonnenen, aus Mäusen stammenden monoklonalen Antikörper finden Anwendung in der wissenschaftlichen Forschung, beispielsweise in ELISA, Radioimmunoassay, Immunhistochemie, Durchflusszytometrie und Proteinreinigung. Zu den Proben für monoklonale Antikörper zählen Aszitesflüssigkeit und Hybridom-Überstand. Die Aszitesflüssigkeit wird als Probe bezeichnet, die durch Injektion von Hybridomzellen in die Bauchhöhle von Tieren und Nutzung des physiologischen Milieus der Bauchhöhle zur Antikörperproduktion gewonnen wird. In die Bauchhöhle injizierte Hybridomzellen können sich vermehren und monoklonale Antikörper sezernieren, die sich in der Aszitesflüssigkeit anreichern. Aufgrund möglicher Verunreinigungen (tierische Proteine, Hormone etc.) ist eine Reinigung dieser Antikörper erforderlich. Aufgrund der Sekretionsfunktion von B-Lymphozyten werden monoklonale Antikörper bei der Kultivierung von Hybridomzellen häufig in das Kulturmedium abgegeben. Die Flüssigkeit, die monoklonale Antikörper im Kulturmedium enthält, wird als Hybridom-Überstand bezeichnet. Die Reinheit der monoklonalen Antikörper im Überstand ist relativ hoch, jedoch ist für die Herstellung im großen Maßstab eine weitere Aufreinigung erforderlich, da sie durch In-vitro-Kultur gewonnen werden.

Die Antikörperreinigung ermöglicht die Isolierung hochreiner Antikörper aus Komplexen. Gängige Methoden zur Antikörperreinigung sind derzeit die Affinitätsreinigung und die Antikörpertrennung und -reinigung. Zu den wichtigsten Methoden zählen die Protein-A/G-Reinigung, Ionenaustauschchromatographie, Gelfiltration, Präzipitation und hydrophobe Interaktionschromatographie. Die Protein-A/G-Affinitätsreinigung ist dabei in verschiedenen Anwendungsbereichen der Antikörperreinigung weit verbreitet. Der Prozess der Herstellung monoklonaler Antikörper mittels Hybridom-Technologie durch Alpha Lifetech ist in Abbildung 1 dargestellt.

Abb. 1 Prozessdiagramm zur Herstellung monoklonaler Antikörper auf Basis der Hybridom-Technologie.

Antikörper-Wirkstoff-Konjugat- und Hybridom-Technologie

Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADCs) sind neuartige biologische Wirkstoffe, die Antikörper chemisch mit zytotoxischen Medikamenten verbinden. Sie kombinieren die spezifische Erkennungsfähigkeit von Antikörpern mit der starken zytotoxischen Wirkung von Medikamenten und transportieren diese präzise über die Antikörper in die Tumorzellen, wodurch eine gezielte Behandlung ermöglicht wird. Der Antikörperanteil in ADCs wird häufig mittels Hybridom-Technologie oder anderen Antikörperproduktionsverfahren, wie z. B. gentechnisch veränderten Antikörpern, hergestellt. Die Hybridom-Technologie liefert hochwertige Antikörper-Rohmaterialien für ADCs. ADCs und monoklonale Antikörper, die mittels Hybridom-Technologie hergestellt werden, spielen eine wichtige Rolle in Bereichen wie der Krebstherapie. Sie können einzeln oder in Kombination eingesetzt werden, um die therapeutische Wirksamkeit zu steigern.

Monoklonale Antikörper, die mittels Hybridom-Technologie hergestellt werden, zeichnen sich durch hohe Spezifität aus, binden und erkennen spezifische Antigene präzise und lassen sich in großem Maßstab produzieren. Durch Hybridom-Sequenzierung können Antikörpergene aus Hybridomzellen extrahiert und sequenziert werden, um die entsprechenden Sequenzen zu erhalten. Dies ist vorteilhaft für die nachfolgende Antikörperexpression. Monoklonale Antikörper, die mittels Hybridom-Technologie hergestellt werden, können zum Nachweis spezifischer Krankheitsmarker wie Tumormarker, Virusantigene usw. eingesetzt werden und leisten somit einen wichtigen Beitrag zur Früherkennung von Krankheiten. Darüber hinaus können sie in Experimenten wie Immunoblotting und Immunhistochemie zur Untersuchung von Proteinexpression, -lokalisation, -struktur und -funktion verwendet werden.

Hybridom-Technologie, Antikörperproduktion, Service-Workflow

Schritte	Serviceinhalte	Zeitleiste
Schritt 1: Tierimmunisierung	(1) Tier 4-mal immunisiert, Auffrischungsimpfung 1 Dosis, insgesamt 5 Dosen immunisiert. (2) Vor der Immunisierung wurde negatives Serum gesammelt und nach der vierten Dosis ein ELISA zur Bestimmung des Serumtiters durchgeführt. (3) Erfüllt der Serumantikörpertiter nach der vierten Dosis die Anforderungen, wird 7 Tage vor der Blutentnahme eine weitere Impfdosis verabreicht. Erfüllt er die Anforderungen nicht, wird die routinemäßige Immunisierung fortgesetzt. (4) Qualifizierte Potenz, Milzzellen werden zur Zellfusion isoliert.	10-12 Wochen
Schritt 2: Fusion und Screening	(1) Fusion: Nach der Immunisierung wurden Milzzellen der Maus gesammelt und mit Myelomzellen fusioniert. (2) Proliferation und Screening: Die erhaltenen Hybridomzellen wurden einer Proliferation und einem ELISA-Screening unterzogen, um hocheffiziente Klone zu erhalten.	6 Wochen
Schritt 3: Subklonen	15-25 positive Mutterzellen werden mittels begrenzter Verdünnungsmethode subkloniert, und schließlich werden 10-15 positive Klone bestimmt.	3-4 Wochen
Schritt 4: Aszitesgewinnung und Antikörperreinigung	(1) Aszitesproduktion: Für die Aszitesproduktion in Mäusen werden 10-15 Hybridomstämme verwendet (wenn eine große Anzahl von Hybridomstämmen erhalten wird, werden diese in zellulärer Form versandt). (2) Aszites-Identifizierung: Aszites-ELISA-Nachweis, Potenzbestimmung (Protein/Virus > 10⁵, niedermolekulare Substanzen/Peptide > 10⁴) zur nachfolgenden Aufreinigung (3) Reinigung von Protein A/G: Reinigung von Aszites	3-4 Wochen
Schritt 5: Lieferung	(1) Stellen Sie 3-5 monoklonale Antikörper-Hybridomstämme bereit. (2) Jede Hybridomzelle liefert 1 mg gereinigten Antikörper (Aszitesreinigung). (3) Versuchsablaufbericht	1 Woche

Vorteile der Hybridom-Technologie

Alpha Lifetech verfügt über umfangreiche Erfahrung im Bereich der Antikörperentwicklung. Im Laufe der Jahre hat Alpha Lifetech eine umfassende Plattform für die Antikörperentwicklung aufgebaut.

Mehrere Arten

Die Immunität kann verschiedenen Tieren verliehen werden, darunter beispielsweise Mäusen, Kaninchen, Schafen usw.

Mehrere Ziele

Auf Basis der Hybridom-Technologie stehen Dienstleistungen zur Entdeckung von Antikörpern für verschiedene Zielmoleküle zur Verfügung: Proteine, Peptide, kleine Moleküle, Viren, Membranproteine, mRNA usw.

Rückverfolgbarkeitsaufzeichnungen

Qualitätskontrollstandards (Immunpotenz, PBMC-Qualitätskontrolle, Bibliotheksqualitätskontrolle und Screening-Validierung), englische Versuchsberichte, Original-Versuchsaufzeichnungen

Personalisiertes Programm

Individuelle, maßgeschneiderte Programmgestaltung, die den Forschungsprojektanforderungen verschiedener Kunden gerecht wird

Strategien zur Entwicklung mehrerer Antikörper

Dienstleistungen zur Entwicklung monoklonaler Antikörper

Hybridoma-Technologieplattform

Plattform zur Sortierung einzelner B-Zellen

Phagen-Display-Antikörper-Entwicklungsplattform

Entwicklung monoklonaler Antikörper – Alpha Lifetech

Dienstleistungen zur Entwicklung monoklonaler Antikörper

Wir bieten Ihnen Dienstleistungen zur Entwicklung hochwertiger, hochreiner und hochspezifischer monoklonaler Antikörper an, einschließlich der Herstellung von monoklonalen Maus- und Kaninchenantikörpern.