Dienstleistungen zur Entwicklung monoklonaler Antikörper

Alpha Lifetech Inc.kann Epitopvorhersage, Peptidsynthese, Proteinexpression, polyklonale oder monoklonale Antikörperproduktion sowie Antikörperreinigung aus Zellkulturen, Aszitesflüssigkeit oder Vollserum anbieten.

Alpha Lifetech Inc.Wir verfügen über langjährige Erfahrung in der Bereitstellung verschiedener stabiler Zelllinien, darunter Hybridomzellen, Genom-Editierungs-Zelllinien, Knockdown-Zelllinien und Überexpressions-Zelllinien. Wir sind bestrebt, jedem Kunden fortschrittliche, maßgeschneiderte Zelllinienlösungen anzubieten. Unsere Dienstleistungen sind bewährt und genießen hohes Vertrauen.

Strategie zur Antikörperentwicklung

1. Antigendesign und -präparation
Diese Antigene können Proteine, Peptide oder andere Moleküle sein. Die Entwicklung von Immunogenen erfordert einen umfassenden Ansatz, der Kenntnisse über Antigenstruktur, Immunologie und Verabreichungssysteme integriert. Alpha Lifetech verfügt über eine Technologie zur Antigenentwicklung, mit der Immunogene für Kunden mit Bedarf entwickelt werden können.
Alpha Lifetech bietet seinen Kunden eine Auswahl an rekombinanten Proteinprodukten. Wir verfügen über verschiedene Proteinexpressionssysteme, darunter E. coli, Hefe, Baculovirus-Insektenzellen und Säugetierzellen, um die für Ihre Forschung benötigten rekombinanten Proteine ​​herzustellen.

2. Tierimpfung
Alpha Lifetech kann seinen Kunden Immunogene liefern, und es stehen Ihnen immunisierte Tiere wie Mäuse, Kaninchen, Schafe, Alpakas, Meerschweinchen, Hamster usw. zur Auswahl.

3. Methoden zur Herstellung monoklonaler Antikörper

●Mab-Produktion mittels Hybridom-Technologie
Hybridome sind Hybridzellen, die durch die Fusion zweier Zelltypen entstehen: einer Maus-Myelomzelllinie und Plasmazellen (B-Lymphozyten). Die heterozygoten Zellen können in vitro kontinuierlich Antikörper gegen das gewünschte Antigen produzieren. Die Herstellung einer Hybridomzelllinie umfasst drei Schritte: Antigendesign (Haptene, niedermolekulare Substanzen und Peptide), Immunisierung von Tieren, Zellfusion und positive Klonauswahl. Mithilfe einzigartiger Immunisierungsmethoden erzielen wir außergewöhnlich hohe Zellfusionsraten (1–10 Hybridome pro tausend B-Zellen) und hohe Antikörpertiter. Dies maximiert unsere Erfolgsquote in nachfolgenden Analysen, darunter biochemisches Screening, zellbasierte In-vitro-Assays und Tierstudien.

●Herstellung monoklonaler Antikörper mittels Phagen-Display-Technologie
Phagen-Display bietet eine weitere Methode zur Herstellung monoklonaler Antikörper. B-Lymphozyten werden aus Tierblut isoliert und ihre mRNA extrahiert. Mittels PCR wird diese mRNA in cDNA umgeschrieben, welche alle VH- und VL-Segmente amplifiziert. Diese Segmente werden dann, typischerweise als Einzelketten-Variablenfragmente (scFv), zusammen mit dem PIII-Protein eines Bakteriophagen in einen Vektor kloniert. Anschließend wird dieses Konstrukt verwendet, um E. coli zu infizieren. Durch Inokulation mit einem Helferphagen entsteht so eine Bibliothek mit etwa 10^10 Zellen. E. coli kann dann den Bakteriophagen, der die VH- und VL-Segmente trägt, als Teil seines Hüllproteins sezernieren. Anschließend können spezifische VH- und VL-Segmente, die das gewünschte Antigen binden, selektiert und zur erneuten Inokulation von E. coli mit dem Bakteriophagen verwendet werden. Zellen, die das Plasmid enthalten, werden dann isoliert und sequenziert.

4. Fusionsscreening

●Zellfusion und Selektion
Die gewonnenen B-Zellen werden anschließend mit Myelomzellen fusioniert, Krebszellen, die sich in Zellkultur unbegrenzt vermehren können. Die Fusion wird typischerweise durch eine Technik wie die Polyethylenglykol (PEG)-Fusion erreicht.
Nach der Fusion werden die Hybridomzellen in einem Selektionsmedium kultiviert, das nur das Überleben der Hybridome ermöglicht. Das Medium enthält üblicherweise Aminopterin, welches das Wachstum nicht fusionierter Myelomzellen verhindert.

●Screening und Clonging
Die so entstandenen Hybridomzellen werden auf die Produktion von Antikörpern gegen das Zielantigen untersucht. Dies geschieht typischerweise mittels Techniken wie dem Enzymimmunoassay (ELISA), Western Blot, Immunpräzipitation und Durchflusszytometrie.

Sobald die Antikörper produzierenden Hybridomzellen identifiziert sind, werden sie kloniert, um eine Population identischer Zellen zu erzeugen. Dadurch wird sichergestellt, dass der von jeder Hybridomzelle produzierte Antikörper identisch ist.

5. Funktionsprüfung der Antikörper
Alpha Lifetech bietet funktionelle Validierung von Antikörpern an, beispielsweise mittels Western Blot, Immunhistochemie oder funktionellen Assays, um monoklonale Antikörper zu charakterisieren und die Spezifität, Affinität und Funktionalität der Antikörper zu bestätigen.

6. Antikörperoptimierung
Reinigung von Antikörpern aus Kulturüberstand mittels Techniken wie Protein-A- oder Protein-G-Affinitätschromatographie; Alpha Lifetech bietet auch Methoden zur Antikörpermodifizierung an, um die Antikörperaffinität zu verbessern.

7. Antikörperproduktion
Alpha Lifetech kann Kandidaten-Antikörper für Hochdurchsatz-Screening-Anwendungen und die Produktion im großen Maßstab evaluieren.