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Phagen-Display-Antikörper-Entwicklungsplattform

Auf der Grundlage des umfassenden Plattformsystems für Antikörperplattformen kann Alpha Lifetech technische Dienstleistungen von der Antikörperpräparation über die Antikörperreinigung bis hin zur Antikörpersequenzierung usw. anbieten.

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Phagen-Display-Antikörper-Entwicklungsplattform


Alpha Lifetech bietet mit seiner umfassenden Projekterfahrung in der Antikörperentwicklung maßgeschneiderte monoklonale und polyklonale Antikörper für verschiedene Spezies sowie Antikörperbibliotheks- und Screening-Services. Wir liefern unseren Kunden qualitätsgesicherte Antikörper und rekombinante Antikörper sowie die dazugehörigen Dienstleistungen zur Herstellung effizienter, hochspezifischer und stabiler Antikörper. Durch den Einsatz umfassender Antikörperplattformen und Antikörper-Engineering decken wir die gesamte Wertschöpfungskette der Antikörperproduktion ab, einschließlich technischer Services wie Antikörperpräparation, -reinigung, -sequenzierung und -validierung.

Alpha Lifetech verfügt über eine ausgereifte Plattform zur Antikörperentwicklung und bietet seinen Kunden ein breites Spektrum an Dienstleistungen, darunter Tierimmunologie, Aufbau und Screening von Antikörperbibliotheken mittels Phagen-Display, Antikörpersequenzierung, Antikörperexpression, Antikörperreinigung, Antikörpervalidierung und Antikörpermarkierung auf Basis von Hybridom-, Einzelzell-B-Zell- und Phagen-Display-Technologie. Alpha Lifetech betreibt eine standardisierte Produktionslinie und bietet neben der Antikörperpräparation auch unterstützende Dienstleistungen wie Antikörperhumanisierung, Affinitätsreifung, ADC-Wirkstoffdesign und -entwicklung sowie die Sequenzierung von CAR-T-Zellen an. Darüber hinaus hat Alpha Lifetech eine Antikörperbibliothek auf Basis der Phagen-Display-Plattformen M13, T4 und T7 mit einer Speicherkapazität von bis zu 10⁸–10⁹ Antikörpern aufgebaut. Positivitätsrate, Insertionsrate und Diversität der Bibliothek erreichen jeweils über 90 %.

Phagen-Display-Technologie

Die Herstellung monoklonaler Antikörper erfolgte zunächst mittels Hybridom-Technologie zur Gewinnung von Maus-Hybridom-Antikörpern. Dabei werden Milzzellen immunisierter Mäuse mit Myelomzellen von Mensch oder Maus fusioniert, wodurch Hybridomzellen entstehen, die spezifische Hybridom-Antikörper sezernieren. Durch humanisierte Modifikation von Maus-Antikörpern und gentechnische Veränderung der Antikörper, um ihnen eine konstante humane Immunglobulinregion zu verleihen, lässt sich ihre Immunogenität reduzieren. Die Entwicklung monoklonaler Antikörper findet breite Anwendung in der Biomedizin und Klinik.

Alpha Lifetech bietet umfassende Dienstleistungen im Bereich Antikörper-Engineering – von der Entwicklung präklinischer Forschungsprotokolle über die Entdeckung von Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten (ADCs) bis hin zur Validierung im Tierversuch. ADCs transportieren Chemotherapeutika gezielt zu Krebszellen. Nach der Bindung an spezifische Zielstrukturen auf den Krebszellen setzen die ADCs zytotoxische Wirkstoffe frei. Alpha Lifetech bietet seinen Kunden zudem umfassende Dienstleistungen zur Optimierung der Antikörperaffinität. Mithilfe fortschrittlicher Mutationsoptimierung und Hochdurchsatz-Phagen-Display-Screening-Technologie werden zunächst Antikörper mit einer bestimmten Affinität identifiziert. Anschließend werden Aminosäuremutationen eingeführt, um diverse Varianten zu generieren. Hochaffine Antikörper werden dann mittels Screening-Techniken evaluiert und weiter untersucht. Nach mehreren Optimierungsrunden und Strukturanalysen werden schließlich Antikörper mit höherer Affinität und stärkerer Spezifität gewonnen.

Alpha Lifetech kann verschiedene Arten von Antikörper-Phagen-Display-Bibliotheken erstellen, darunter Immunbibliotheken, native Bibliotheken, halbsynthetische Bibliotheken und synthetische Bibliotheken. Dank der hohen Kapazität der Antikörperbibliotheken lassen sich hochspezifische Antikörper gewinnen. Es stehen verschiedene Phagemidvektoren wie pMECS, pComb3X und pCANTAB 5E sowie Stämme wie TG1 E. coli, XL1 Blue und ER2738 zur Verfügung. Neben einer Bibliothekskapazität von bis zu 10⁹ ist auch die Insertionsrate der Zielfragmente hoch, wodurch optimale Bedingungen für das Screening von Antikörpern geschaffen werden, die die Kundenanforderungen erfüllen. Das Flussdiagramm des Antikörperpräparationsdienstes von Alpha Lifetech auf Basis der Phagen-Display-Technologie ist in Abbildung 1 dargestellt.

Phagen-Display-Alpha Lifetech
Abb. 1 Prozessdiagramm zur Herstellung monoklonaler Antikörper auf Basis der Phagen-Display-Technologie.

Produktionsablauf für Phagen-Display-Antikörper

Schritte Serviceinhalte Zeitleiste
Schritt 1: Tierimmunisierung
(1) Tier 4-mal immunisiert, Auffrischungsimpfung 1 Dosis, insgesamt 5 Dosen immunisiert.
(2) Vor der Immunisierung wurde negatives Serum gesammelt und nach der vierten Dosis ein ELISA zur Bestimmung des Serumtiters durchgeführt.
(3) Erfüllt der Serumantikörpertiter nach der vierten Dosis die Anforderungen, wird 7 Tage vor der Blutentnahme eine weitere Impfdosis verabreicht. Erfüllt er die Anforderungen nicht, wird die routinemäßige Immunisierung fortgesetzt.
(4) Qualifizierte Potenz, Blutentnahme und Trennung von Monozyten
10 Wochen
Schritt 2: cDNA-Herstellung
(1) Extraktion der Gesamt-RNA aus PBMC (RNA-Extraktionskit)
(2) Hochpräzise RT-PCR-Präparation von cDNA (Reverse-Transkriptionskit)
1 Tag
Schritt 3: Aufbau der Antikörperbibliothek
(1) Unter Verwendung von cDNA als Vorlage wurden die Gene durch zwei PCR-Runden amplifiziert.
(2) Phagenkonstruktion und -transformation: Gen-Splicing-Phagemidvektor, Elektroporationstransformation von TG1-Wirtsbakterien, Konstruktion einer Antikörperbibliothek.
(3) Identifizierung: Zufällige Auswahl von 24 Klonen, PCR-Identifizierungs-Positivrate + Insertionsrate.
(4) Assistierte Phagenpräparation: M13-Phagenamplifikation und -reinigung.
(5) Rettung der Phagen-Display-Bibliothek
3-4 Wochen
Schritt 4: Screening der Antikörperbibliothek (3 Runden)
(1) Standardmäßiges 3-Runden-Screening (Festphasen-Screening): Druck-Screening zur größtmöglichen Entfernung unspezifischer Antikörper.
(2) Amplifikation eines einzelnen Klons durch Bakteriophagen-Selektion + IPTG-induzierte Expression + ELISA-Nachweis positiver Klone.
(3) Alle positiven Klone wurden für die Gensequenzierung ausgewählt.
4-5 Wochen

Vorteile der Phagen-Display-Technologie

Alpha Lifetech verfügt über umfangreiche Erfahrung im Bereich der Antikörperentwicklung. Im Laufe der Jahre hat Alpha Lifetech eine umfassende Plattform für die Antikörperentwicklung aufgebaut.

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Unterstützungsdienste

Wir bieten verschiedene Dienstleistungen zur Erstellung tierbasierter Immunbibliotheken und zum Screening natürlicher Antikörperbibliotheken an, die auf die Kundenbedürfnisse zugeschnitten sind.

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Mehrere Ziele

Es werden Dienstleistungen zur Entdeckung von Antikörpern für verschiedene Zielmoleküle angeboten: Proteine, Peptide, kleine Moleküle, Viren, Membranproteine, mRNA usw.

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Mehrere Vektoren

Wir bieten einen personalisierten Bibliotheksaufbauservice an und können verschiedene Bakteriophagenvektoren wie PMECS, pComb3X und pCANTAB 5E bereitstellen und diese nach Kundenwunsch modifizieren.

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Ausgereifte Plattform

Die Speicherkapazität kann 10⁸–10⁹ erreichen, die Insertionsraten liegen alle über 90 % und die Affinität der durch Screening gewonnenen Antikörper liegt im Allgemeinen im nM-pM-Bereich.

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Alpha Lifetech bietet Vorteile hinsichtlich Screening-Zeit und Gewinnung hochwertiger Antikörper. Das Unternehmen bietet Antigen-Design, -Synthese und -Modifikation, Tierimmunologie, Einzelzell-B-Zell-Anreicherung und Einzelzellsequenzierung an.

Phagen-Display-Alpha Lifetech

Phagen-Display-Antikörper-Entwicklungsplattform

Alpha Lifetech bietet technische Dienstleistungen für die Entwicklung von Phagen-Display-Antikörpern an, von der Antikörperpräparation über die Antikörperreinigung bis hin zur Antikörpersequenzierung usw.

Bei Fragen können Sie sich jederzeit gerne an uns wenden.

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