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Entwicklungsplattform für Phagendisplay-Antikörper

Basierend auf der umfassenden Plattformsystemkonstruktion der Antikörperplattform kann Alpha Lifetech technische Dienste von der Antikörperherstellung über die Antikörperreinigung bis hin zur Antikörpersequenzierung usw. anbieten.

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Entwicklungsplattform für Phagendisplay-Antikörper


Alpha Lifetech bietet dank seiner umfassenden Projekterfahrung in der Antikörperforschung maßgeschneiderte monoklonale und polyklonale Antikörper für verschiedene Spezies sowie den Aufbau von Antikörperbibliotheken und Screening-Services. Alpha Lifetech bietet seinen Kunden qualitätsgesicherte Antikörper- und rekombinante Antikörperprodukte sowie entsprechende Dienstleistungen zur Herstellung effizienter, hochspezifischer und stabiler Antikörper. Durch die Nutzung umfassender Antikörperplattformen und Antikörper-Engineering bieten wir Dienstleistungen für die vor- und nachgelagerte Phase der Antikörperproduktion an, darunter technische Dienstleistungen wie Antikörperherstellung, -reinigung, -sequenzierung und -validierung.

Alpha Lifetech verfügt über eine ausgereifte Plattform zur Antikörperentdeckung und bietet seinen Kunden eine Reihe von Dienstleistungen, darunter Tierimmunität, Aufbau und Screening von Phagendisplay-Antikörperbibliotheken, Antikörpersequenzierung, Antikörperexpression, Antikörperreinigung, Antikörpervalidierung und Antikörpermarkierung basierend auf Hybridomtechnologie, Einzel-B-Zelltechnologie, Phagendisplay-Technologie und mehr. Alpha Lifetech verfügt über eine Standardproduktionslinie und kann neben Dienstleistungen zur Antikörperherstellung auch unterstützende Dienstleistungen wie Antikörperhumanisierung, Antikörperaffinitätsreifung, ADC-Medikamentendesign und -entwicklung sowie nachfolgendes CAR-T-Sequenzdesign anbieten. Gleichzeitig hat Alpha Lifetech eine Antikörperbibliothek basierend auf M13-, T4- und T7-Phagendisplay-Technologieplattformen mit einer Speicherkapazität von bis zu 10^8-10^9 aufgebaut. Die Positivrate, Insertionsrate und Diversität der Bibliothek können alle über 90 % erreichen.

Phagendisplay-Technologie

Die Produktion monoklonaler Antikörper wurde zunächst mithilfe der Hybridom-monoklonalen Antikörper-Technologie zur Herstellung von Maus-Hybridom-monoklonalen Antikörpern vorbereitet. Durch die Fusion von Milzzellen immunisierter Mäuse mit Myelomzellen von Menschen oder Mäusen entstehen Hybridomzellen, die spezifische Hybridom-monoklonale Antikörper sezernieren. Durch humanisierte Modifikation von Maus-monoklonalen Antikörpern und gentechnische Modifikation der Antikörper, um ihnen eine konstante humane Immunglobulinregion zu verleihen, kann ihre Immunogenität reduziert werden. Die Entwicklung monoklonaler Antikörper findet breite Anwendung in biomedizinischen und klinischen Anwendungen.

Alpha Lifetech bietet umfassende Antikörper-Engineering-Dienstleistungen aus einer Hand – vom Entwurf präklinischer Forschungsprotokolle über die Entdeckung von Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten (ADCs) bis hin zur Validierung im Tierversuch. Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADCs) können Chemotherapeutika an Krebszellen abgeben. Nach der Bindung an spezifische Zielmoleküle auf Krebszellen setzen ADCs zytotoxische Wirkstoffe in die Krebszellen frei. Alpha Lifetech bietet seinen Kunden zudem umfassende Dienstleistungen zur Affinitätsreifung von Antikörpern. Mittels fortschrittlicher Mutationsoptimierung und Hochdurchsatz-Phagendisplay-Screening-Technologie werden zunächst Antikörper mit einer bestimmten Affinität gescreent und anschließend durch Aminosäuremutationen verschiedene Varianten erzeugt. Anschließend werden hochaffine Antikörper mittels Screening-Techniken evaluiert und gescreent. Nach mehreren Optimierungs- und Strukturanalyse-Runden wurden schließlich Antikörper mit höherer Affinität und stärkerer Spezifität erhalten.

Alpha Lifetech kann verschiedene Arten von Antikörper-Phagendisplay-Bibliotheken erstellen, darunter Immunbibliotheken, native Bibliotheken, semisynthetische Bibliotheken und synthetische Bibliotheken. Dank der hohen Kapazität der Antikörperbibliotheken können hochspezifische Antikörper gewonnen werden. Es stehen verschiedene Phagemidvektoren wie pMECS, pComb3X und pCANTAB 5E sowie Stämme wie TG1 E. coli, XL1 Blue und ER2738 zur Verfügung. Neben einer Bibliothekskapazität von bis zu 10^9 ist auch die Zielfragment-Insertionsrate der Bibliothek hoch, was optimale Bedingungen für ein kundenorientiertes Antikörperscreening schafft. Abbildung 1 zeigt das Flussdiagramm des Antikörperherstellungsservice von Alpha Lifetech auf Basis der Phagendisplay-Technologie.

Phagendisplay-Alpha Lifetech
Abb. 1 Prozessdiagramm zur Herstellung monoklonaler Antikörper auf Basis der Phagendisplay-Technologie.

Arbeitsablauf bei der Herstellung von Phagendisplay-Antikörpern

Schritte Leistungsinhalt Zeitleiste
Schritt 1: Immunisierung des Tieres
(1) Das Tier wurde 4-mal immunisiert, anschließend wurde eine Auffrischungsimpfung mit einer Dosis durchgeführt, sodass insgesamt 5 Dosen immunisiert wurden.
(2) Vor der Immunisierung wurde ein negatives Serum gesammelt und bei der vierten Dosis wurde ein ELISA durchgeführt, um den Serumtiter zu bestimmen.
(3) Entspricht der Serum-Antikörpertiter der vierten Dosis den Anforderungen, wird 7 Tage vor der Blutentnahme eine weitere Immunisierungsdosis verabreicht. Andernfalls wird die Routineimpfung fortgesetzt.
(4) Qualifizierte Potenzierung, Blutentnahme und Trennung von Monozyten
10 Wochen
Schritt 2: cDNA-Vorbereitung
(1) PBMC-Gesamt-RNA-Extraktion (RNA-Extraktionskit)
(2) Hochpräzise RT-PCR-Präparation von cDNA (Reverse-Transkription-Kit)
1 Tag
Schritt 3: Aufbau der Antikörperbibliothek
(1) Unter Verwendung von cDNA als Vorlage wurden Gene durch zwei PCR-Runden amplifiziert.
(2) Phagenkonstruktion und -transformation: Genspleiß-Phagemidvektor, Elektroporationstransformation von TG1-Wirtsbakterien, Konstruktion einer Antikörperbibliothek.
(3) Identifizierung: 24 Klone werden nach dem Zufallsprinzip ausgewählt, PCR-Identifizierungs-Positivrate + Insertionsrate.
(4) Unterstützte Phagenpräparation: M13-Phagenamplifikation + Reinigung.
(5) Rettung der Phagendisplay-Bibliothek
3-4 Wochen
Schritt 4: Screening der Antikörperbibliothek (3 Runden)
(1) Standardmäßiges 3-Runden-Screening (Festphasenscreening): Druckscreening zur größtmöglichen Entfernung unspezifischer Antikörper.
(2) Einzelklonamplifikation ausgewählter Bakteriophagen + IPTG-induzierte Expression + ELISA-Nachweis positiver Klone.
(3) Alle positiven Klone wurden für die Gensequenzierung ausgewählt.
4-5 Wochen

Vorteile der Phagendisplay-Technologie

Alpha Lifetech verfügt über umfangreiche Erfahrung auf dem Gebiet der Antikörperentwicklung. Im Laufe der Jahre hat Alpha Lifetech eine umfassende Plattform für die Antikörperentwicklung aufgebaut.

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Support-Dienste

Wir können je nach Kundenbedarf verschiedene Dienstleistungen zum Aufbau tierbasierter Immunbibliotheken und Screening-Dienste für natürliche Antikörperbibliotheken anbieten.

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Mehrere Ziele

Es stehen Dienste zur Entdeckung mehrerer Zielantikörper zur Verfügung: Proteine, Peptide, kleine Moleküle, Viren, Membranproteine, mRNA usw.

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Mehrere Vektoren

Personalisierter Bibliotheksaufbauservice. Wir können verschiedene Bakteriophagenvektoren bereitstellen, darunter PMECS, pComb3X und pCANTAB 5E, und diese entsprechend den Kundenanforderungen modifizieren

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Ausgereifte Plattform

Die Speicherkapazität kann 10 ^ 8-10 ^ 9 erreichen, die Insertionsraten liegen alle über 90% und die Affinität der durch Screening erhaltenen Antikörper liegt im Allgemeinen im nM-pM-Bereich

Zugehöriger SERVICE

Strategien zur Entwicklung mehrerer Antikörper

Entwicklung monoklonaler Antikörper – Alpha Lifetech

Entwicklungsdienst für monoklonale Antikörper

Wir bieten qualitativ hochwertige, hochreine und hochspezifische Dienstleistungen im Bereich der Entwicklung monoklonaler Antikörper an, darunter die Produktion monoklonaler Maus- und Kaninchen-Antikörper.

Hybridomzellen-Alpha Lifetech

Hybridoma-Technologieplattform

Einschließlich Immunisierungsprogramm, Antikörpervorbereitungsdienste, Antikörperreinigung, Antikörper-Hochdurchsatzsequenzierung, Antikörpervalidierung usw.

B-Zell-Screening-Alpha Lifetech

Plattform zur Sortierung einzelner B-Zellen

Alpha Lifetech bietet Vorteile hinsichtlich der Screeningzeit und der Gewinnung hochwertiger Antikörper. Das Unternehmen bietet Antigendesign, -synthese und -modifikation, Tierimmunität, Einzel-B-Zell-Anreicherungsscreening und Einzelzellsequenzierung an.

Phagendisplay-Alpha Lifetech

Entwicklungsplattform für Phagendisplay-Antikörper

Alpha Lifetech kann technische Dienste zur Entwicklung von Phagendisplay-Antikörpern anbieten, von der Antikörperherstellung über die Antikörperreinigung bis hin zur Antikörpersequenzierung usw.

Bei Fragen können Sie uns jederzeit gerne kontaktieren.

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