Plattform zur Konstruktion von Phagen-Display-Peptidbibliotheken

Alpha Lifetech verfügt über verschiedene Technologien zur Erstellung von Peptidbibliotheken. Wir bieten hauptsächlich die Erstellung von T7- und M13-Peptidbibliotheken an, abgestimmt auf den Phagentyp. Darüber hinaus erstellen wir Peptidbibliotheken mit linearer Schleife (L7 und L12), angepasst an die Sequenzlänge der Peptidmoleküle. Wir bieten auch kundenspezifische Peptidbibliotheks- und Peptidsynthese-Dienstleistungen an.

Die Phagen-Display-Technologie ist eine Technik, um funktionelle exogene Peptide auf die Oberfläche des Phagenkapsids zu bringen. Dabei bleiben die Struktur und Funktion des exogenen Proteins oder Peptids erhalten, ohne die Infektionsfähigkeit des rekombinanten Phagen gegenüber der Wirtszelle zu beeinträchtigen. Jedes Phagenpartikel kann nur ein zufällig ausgewähltes exogenes Peptid auf seiner Oberfläche präsentieren. Die Gesamtheit aller Phagen, die unterschiedliche Peptide präsentieren, bildet eine Phagen-Display-Peptidbibliothek. Solche Bibliotheken sind leistungsstarke Werkzeuge für die Expression mehrerer maßgeschneiderter Peptide und das spezifische Peptid-Screening und finden breite Anwendung in der Antigen-Epitop-Analyse, im Wirkstoff-Screening und in der Impfstoffentwicklung.

Einführung in die Konstruktion von Peptidbibliotheken

Die Konstruktion von Peptidbibliotheken dient der Amplifikation von Peptidbibliotheken durch Ligation von Peptid-DNA-Sequenzen in verschiedenen Formaten an die entsprechenden Phagenhüllproteinsequenzen. Anschließend wird die Phagen-Reassemblierung genutzt, um das Zielpeptid auf die Phagenoberfläche zu platzieren. Die auf Phagen-Display-Technologie basierende Peptidbibliothekskonstruktion zählt zur Kategorie der Biosynthese innerhalb der Peptidsynthese. Auf dem Markt sind Flüssigphasen- und Festphasen-Peptidsyntheseverfahren verfügbar. Alpha Lifetech bietet derzeit verschiedene Technologien zur Peptidbibliothekskonstruktion an und kann vorgefertigte sowie randomisierte Peptidbibliotheken entsprechend der Sequenzlänge der Peptidmoleküle bereitstellen. Dazu gehören Bibliotheken mit 7, 12, 15, zyklischen 7 und 12 Peptiden. Darüber hinaus können Peptidbibliotheken auch kundenspezifisch für verschiedene Typen und Anwendungen synthetisiert werden.

Anwendung der Peptidbibliothekskonstruktion und des Screenings

Randomisierte Peptidbibliotheken, die mittels Phagen-Display-Technologie erstellt werden, ermöglichen den funktionellen Zugang zu Peptiden und stellen eine physikalische Verbindung zwischen Phänotyp (präsentiertes Peptid) und Genotyp (kodierte DNA) her. Diese Bibliotheken eignen sich für Screening-Verfahren, die gebundene von ungebundenen Klonen durch Affinitätsreinigung trennen. Phagen-Display-Peptidbibliotheken können verwendet werden für (i) die Charakterisierung von zellulären Immunepitopen, (ii) das Screening von rezeptor- oder protein-gebundenen bioaktiven Peptiden, Peptiden, die an nicht-protein-Zielstrukturen binden, zell- oder organspezifischen Peptiden usw. sowie (iii) die Entwicklung von Peptid-vermittelten Wirkstofftransportsystemen.

Phagen-Display-Peptidbibliothek-Prozess

Abb. 1 Plattform zur Erstellung einer Phagen-Display-Peptidbibliothek

Arbeitsablauf zur Erstellung von Phagen-Display-Peptidbibliotheken

Verfahren	Serviceinhalte	Zeitleiste
1. Nukleotidsequenzsynthese	Zufällige Synthese von Nukleotidsequenzen mit vom Kunden vorgegebener Länge	2-3 Wochen
2. Polymerisation und Verdauung	Polymerisation und Verdauung der synthetisierten DNA-Sequenz	1 Tag
3. Bau von Elektrokonversionsbibliotheken	Es wurden ER2738-Wirtsbakterien konstruiert und anschließend E. coli mit dem gut konstruierten rekombinanten Plasmid transformiert.	1 Woche
4. Bestimmung der Größe und Diversität von Peptidbibliotheken	Bestimmung der Peptidbibliotheksgröße durch Koloniezählung und der Peptidbibliotheksdiversität durch Sequenzierung	2-3 Tage
5. Konstruktion einer Phagen-Display-Peptidbibliothek	Durch Infektion der Phagenverpackungspeptidbibliothek	1 Woche