scFv-Antikörper-Entdeckungsdienst

Alpha Lifetech Inc.ist stolz darauf, umfassende Dienstleistungen zur Erstellung von scFv-Bibliotheken anzubieten, um den vielfältigen Bedürfnissen von Wissenschaftlern weltweit gerecht zu werden. Unser Ziel ist es, die Anforderungen unserer Kunden zu verstehen und zu erfüllen sowie bei allen anstehenden und sich entwickelnden Problemen in der Forschungsarbeit zu unterstützen.

Was ist scFv – ein Einzelketten-Variablenfragment-Antikörper?

Ein Einzelketten-Antikörper besteht aus einem variablen leichten (VL) und schweren (VH) Antikörperfragment, die durch einen flexiblen Peptidlinker verbunden sind. Er lässt sich leicht in funktionsfähiger Form auf der Oberfläche von Phagen exprimieren und wird daher üblicherweise als Einzelketten-Variables Fragment (scFv) bezeichnet. Das scFv-Fragment ist die kleinste Einheit eines Immunglobulinmoleküls (mit Ausnahme von Nanobodies) und spielt eine Rolle bei der Antigenbindung. Durch Protein-Engineering lassen sich die Eigenschaften des scFv (Einzelketten-Variables Fragment) verbessern, beispielsweise durch Erhöhung der Affinität und Veränderung der Spezifität. Bei Alpha Lifetech Inc. werden scFv-Antikörper hauptsächlich aus Hybridomzellen, Milzzellen immunisierter Mäuse und B-Lymphozyten von Menschen hergestellt. Zunächst wird Gesamt-RNA oder mRNA aus Hybridomzellen, Milzzellen, Lymphozyten und Knochenmarkzellen isoliert und anschließend in cDNA umgeschrieben, die als Vorlage für die Antikörpergenamplifikation (PCR) dient.

scFv-Antikörperentwicklung – Phagen-Display-Technologie

Die Diversität einer Bibliothek wird durch die Anzahl unabhängiger Klone bestimmt. Um eine große scFv-Antikörperbibliothek herzustellen, nutzen unsere Wissenschaftler unsere firmeneigene zweistufige Strategie. Im ersten Schritt des beschriebenen Verfahrens werden primäre Repertoires aus PCR-Produkten, die die VH-, Vκ- und Vλ-Domänen kodieren, erstellt. Dies ergibt typische mittelgroße Bibliotheken (1–100 Millionen Klone). Im zweiten Schritt werden VH- (oder VL-)Fragmente durch Verdau von aus den primären Repertoires gereinigter Plasmid-DNA isoliert und in den Akzeptor-Phagemidvektor kloniert, der die VL- (oder VH-)Repertoires enthält. Diese Innovation erhöht die Größe der Bibliotheken drastisch (10⁶).¹⁰-10¹²Klone).

Groß angelegtes und hocheffizientes Screening von scFv-Antikörpern

Für die großtechnische Herstellung von scFv ist es offensichtlich, dass die Wahl des Expressionssystems einen signifikanten Einfluss auf das Prozessdesign, die Downstream-Prozessstrategien und die Prozesskosten hat. Die Wahl des Herstellungsverfahrens hängt von der Relevanz posttranslationaler Modifikationen, dem Zeitplan für die klinische Entwicklung und der Wirtschaftlichkeit ab, die wiederum maßgeblich vom jeweiligen Expressionssystem abhängen. Es gibt kein universelles Expressionssystem, das hohe Produktexpressionsniveaus für eine breite Palette verschiedener Antikörper oder Proteine ​​gewährleistet.