Monoklonale Antikörper (mAbs) gelten als Pioniere der Antikörpertherapie. Über 100 monoklonale Antikörper sind für die Behandlung von Krebs und Infektionskrankheiten zugelassen und werden auf dem eigenen Markt für Arzneimittelentwicklung eingesetzt. Sie beweisen ihren einzigartigen therapeutischen Wert. Die Einzel-B-Zell-Antikörpertechnologie, eine neue Generation der Antikörperentwicklungstechnologie, ermöglicht die effiziente und schnelle Isolierung von Antikörpern aus einzelnen B-Zellen und stellt nach Hybridom- und Phagen-Display einen Durchbruch in der Antikörperproduktion dar. Die Einzel-B-Zell-Sortierung kann zur Antikörpergenerierung gegen verschiedene Spezies wie Kaninchen, Mäuse, Kamele, Schafe und Hühner eingesetzt werden. Die Einzel-B-Zell-Technologie zeichnet sich durch hohe Spezifität, hohe Aktivität und hohe Affinität aus. Basierend auf der Einzel-B-Zell-Sortierungsplattform bietet Alpha Lifetech Vorteile hinsichtlich Screening-Zeit und Gewinnung hochwertiger Antikörper. Das Unternehmen bietet Antigen-Design, -Synthese und -Modifizierung, Tierimmunologie, Einzel-B-Zell-Anreicherung, Einzelzellsequenzierung, Hochdurchsatz-Screening, Expression und Aufreinigung sowie umfassende technische Dienstleistungen wie die funktionelle Verifizierung, um den vielfältigen Kundenbedürfnissen gerecht zu werden.

Wählen Sie für die Immunstimulation das geeignete Antigen für die Versuchstiere (z. B. Mäuse, Kaninchen usw.) aus, damit diese spezifische Antikörper gegen das Antigen produzieren können.

Die Immunisierung von Tieren ist der erste Schritt der Antikörperbildung. Sie beruht auf dem körpereigenen humoralen Immunantwortmechanismus: Durch die kontinuierliche Stimulation mit Antigenen entwickeln Tiere eine starke Immunantwort und bilden anschließend spezifische Antikörper gegen spezifische Antigene.

B-Zellen wurden aus dem peripheren Blut, der Milz oder den Lymphknoten immuner Tiere isoliert. Diese B-Zellen wurden immunologisch stimuliert, um Antikörper gegen spezifische Antigene zu produzieren.

Durch physikalische oder chemische Methoden (wie Dichtegradientenzentrifugation, Magnetkügelchentrennung usw.) werden B-Zellen angereichert, Verunreinigungen entfernt, die Reinheit der B-Zellen verbessert und die Effizienz der nachfolgenden Trennung gesteigert.

Durch Fluoreszenzaktivierte Zellsortierung (FACS), Magnetische Zellseparation (MACS), Mikrofluidische Zellsortierung (MCS) oder andere Hochdurchsatz-Screening-Techniken können in Kombination mit antigenspezifischer Markierung einzelne B-Zellen aus angereicherten B-Zellen isoliert werden, um gezielte Antikörper zu erzeugen.

Wird eine einzelne B-Zelle aus einer gemischten B-Zellpopulation isoliert, müssen ihre Antikörpergene mittels Einzelzellsequenzierung sequenziert und analysiert werden, um die DNA-Sequenzinformationen der variablen Regionen der schweren (VH) und leichten (VL) Kette zu erhalten. Die Einzelzellsequenzierung umfasst im Wesentlichen drei Schritte: die Isolierung der Einzelzelle, die intrazelluläre Nukleinsäureamplifikation und die Sequenzanalyse. Das Prinzip der Einzelzellsequenzierung besteht darin, die geringen Mengen an DNA oder RNA des gesamten Genoms isolierter Einzelzellen zu amplifizieren, um ein vollständiges Genom oder Transkriptom mit hoher Abdeckung für die Hochdurchsatzsequenzierung zu erhalten.

Durch Hochdurchsatz-Screening lassen sich Antikörpergensequenzen von Tausenden von B-Zellen gleichzeitig gewinnen, was die Antikörperentwicklung erheblich beschleunigt. Diese Sequenzinformationen können anschließend für die Erstellung und das Screening von Antikörperbibliotheken verwendet werden.

Abb. 2 Schematische Darstellung der Einzelzell-B-Zell-Erfassung, der Bibliothekskonstruktion, des Hochdurchsatz-Screenings und der Sequenzierung.(Referenzquelle: Die massiv parallele Sequenzierung von B-Zell-Rezeptoren einzelner Zellen ermöglicht die schnelle Entdeckung verschiedener antigenreaktiver Antikörper..)

(1) Rekombinantes Protein: ≥ 2,5 mg, Proteinreinheit > 85 %, Molekulargewicht > 10 kDa, Konzentration des löslichen Proteins zwischen 0,5 und 5 mg/ml. Falls eine Antigen-Affinitätsreinigung erforderlich ist, werden zusätzlich 10 mg rekombinantes Protein benötigt.

(2) Polypeptide und kleine Moleküle: Freies Peptid ≥10 mg, Peptidreinheit >90 %, nicht weniger als 10 Aminosäuren, Kopplung an KLH/BSA/OVA oder andere Trägerproteine; Kleine Moleküle erfordern eine vorherige Strukturbewertung.