Aufbau stabiler Zelllinien

Alpha Lifetech engagiert sich seit vielen Jahren intensiv in der Entwicklung von Prozessen zur Herstellung stabiler Zelllinien. Das Unternehmen hat eine ausgereifte Plattform für die Herstellung stabiler Zelllinien mit über 300 verschiedenen Tumorzell- und Primärzelltypen aufgebaut. Diese Plattform ermöglicht die Gewinnung stabiler Zelllinien, spart Zeit bei der wissenschaftlichen Forschung und Projektentwicklung und erleichtert die anschließende Produktion. Darüber hinaus bietet Alpha Lifetech seinen Kunden Dienstleistungen wie Stammentwicklung, Stamm-Screening, Stammkonstruktion, die Produktion rekombinanter Proteine und Antikörper an und schafft so die Grundlage für die Forschung an neuen Medikamenten.

Alpha Lifetech verfügt über eine Plattform für lentivirusinfizierte Zellen, die eine Anpassung des experimentellen Prozesses für verschiedene Arten von stabilen Transmutationsstämmen ermöglicht. Wir nutzten die Gen-Knockout-Technologie zur Erstellung von CRISPR/Cas9-Knockout-Zelllinien. Genüberexpression und Gen-Silencing-Techniken dienten der Stabilisierung der Transmutationsstämme. Die ortsspezifische Integration von Genen vervollständigt die Dienstleistungen zur Erstellung von Vertex-Integrationszelllinien.

Einführung in die Konstruktion stabiler Zelllinien

Eine stabile Zelllinie ist eine Zelllinie, die Fremdgene in das Genom der Wirtszelle integriert, sodass diese Fremdgene über einen längeren Zeitraum stabil exprimiert werden können. Das Prinzip besteht darin, das Fremdgen in einen Vektor mit einer bestimmten Resistenz zu klonieren, Wirtszellen zu transfizieren, das Fremdgen in das Wirtschromosom zu integrieren und anschließend die im Vektor enthaltenen Resistenzgene zu selektieren, um stabile Zelllinien mit hoher Expression des Zielproteins oder stabiler Genstilllegung zu erhalten, die den Anforderungen des jeweiligen Experiments entsprechen.

Alpha Lifetech verfügt über eine unabhängige Lagerwerkstatt, das perfekte System zur Zellgefrierung und -lagerung sowie über 300 verschiedene Tumorzell- und Primärzelltypen zur Auswahl, die speziell für Ihre wissenschaftliche Forschung entwickelt wurden.

Prozess zur Herstellung stabiler Zelllinien

Methode zur Herstellung stabiler Zelllinien

Zu den Methoden zur Herstellung stabiler Zelllinien gehören lentivirusvermittelte, transposonvermittelte, CRISPR/Cas9-vermittelte und Plasmid-Screening-Verfahren.

Die lentivirale Transkription ist eine der gängigsten Methoden zur Erzeugung stabiler Zelllinien. Dieser Ansatz hat den Vorteil, dass er nahezu alle Zelltypen infiziert und genetisches Material in das Genom der Wirtszelle integriert, um eine stabile Expression über einen langen Zeitraum zu gewährleisten. Allerdings weist dieses System gewisse Einschränkungen auf, und Lentiviren besitzen eine begrenzte Verpackungskapazität, weshalb es sich nicht für die Transkription von Genen mit langen Transkriptionsregionen eignet.

Im Vergleich zur lentiviralen Transfektion unterliegt die Transposon-vermittelte Transfektion keiner Beschränkung der Gengröße, und durch die kontinuierliche Optimierung der Technologie konnte die Effizienz der Transposon-Insertion um ein Vielfaches verbessert werden. Der Nachteil besteht darin, dass bestimmte Einschränkungen hinsichtlich primärer Zellen und schwer zu transfizierender Zellen bestehen.

Die CRISPR/Cas9-vermittelte Methode umfasst das Knockout und das Knockin von Genen. Beim Knockout wird die DNA-Doppelstrangbrüche eingeführt, was zum Funktionsverlust des Zielgens führt. Beim Knockin werden fremde DNA-Fragmente in spezifische Gene eingefügt, um defekte Gene zu reparieren oder neue, funktionelle Gene einzuführen.

Das Plasmid-Screening ist die einfachste Methode zur Zelllinienkonstruktion. Dabei muss lediglich das Zielplasmid erfolgreich in die Zelle transfiziert und die entsprechende Resistenz in einem Langzeit-Screening genutzt werden. Dadurch besteht eine gewisse Wahrscheinlichkeit, stabile Zelllinien zu erhalten.

Methoden zur Herstellung verschiedener stabiler Zelllinien

Mediationsmethode	Lentivirus-System	Transposon-System	CRISP/Cas9-vermittelt	Plasmid-Screening
Trägerkapazität	5 KB	10 KB	5 KB	10 KB
Vermittelte Effizienz	Hoch	Normal	Normal	Niedrig
Zeitleiste	1-2 Wochen	3-4 Wochen	3-4 Wochen	4-6 Wochen
Vorteil	Schnell und effizient	Sicherheit und Stabilität	Festpunktintegration	Geringere Kosten
Mangel	Biosicherheitsrisiko	Expressionshäufigkeit Normal	Die Transduktion von CAS9 ist schwierig und kostspielig.	Geringer Wirkungsgrad und Instabilität

Technische Schwierigkeiten bei der Herstellung stabiler Zelllinien

Vor der Skalierung des Prozesses wird ein kleiner Bioreaktor eingesetzt, um Parameter wie Gaszusammensetzung, Kulturflüssigkeitssystem und minimalen hydrodynamischen Stress für die Zellen zu bestimmen und so die Skalierbarkeit der Kultur zu gewährleisten. Selbst bei optimaler Bestimmung der Prozessparameter ist die Umgebung in großen Bioreaktoren des Herstellers jedoch ungleichmäßig, was zu Fehlern führen kann. Alpha Lifetech verfügt über langjährige Erfahrung in der Skalierung von Zellkulturprozessen. Dadurch lassen sich Fehler weitgehend vermeiden, Risiken reduzieren und die Erfolgsquote deutlich steigern. Gleichzeitig gewährleistet Alpha Lifetech die Konsistenz der verwendeten Rohstoffe und Medienchargen und minimiert so die Fehlerquote bei der Skalierung des Zellkulturprozesses.

Alpha Lifetech verfügt über eine umfassende Plattform zur Entwicklung stabiler Zelllinienprozesse, um die Stabilität der Zelllinien während der Produktion zu gewährleisten. Wir bieten Ihnen außerdem maßgeschneiderte Dienstleistungen an, die Ihren Bedürfnissen entsprechen.

Inhalte der Dienstleistung zum Aufbau stabiler Zelllinien

Inhalt	Zeitleiste
Die Zelllinie HEK293 wurde vom Kunden bereitgestellt.	3-5 Monate
Konstruktion des sgRNA-Cas9-Plasmids (mit dem Screening-Gen G418).
Die sgRNA-Cas9 und die Reparatur-DNA-Vorlage wurden gemeinsam in die HEK293-Zelllinie transferiert.
Screening monoklonaler Zelllinien (GFP-Gen) Knock-in-positiver Klon).
Lieferung: Vektor, GFP-Gen-Knock-in-Stamm, Sequenzierungsergebnisse, alle Rohdaten, Laborbericht

Zellen können zurückverfolgt werden

Die Zellen werden von professionellen Organisationen wie der ATCC bezogen und können den Nachweis erbringen, dass sie Ihre Registrierungsanforderungen erfüllen.

Produktionsvorteil

Alpha Lifetech verfügt über langjährige Erfahrung in der Erfüllung vielfältiger Entwicklungsbedürfnisse; Wir haben eine Vielzahl von Zellen, eine unabhängige Lagerwerkstatt, perfekte Zellgefrierung und ein Lagerverwaltungssystem.

Projektqualitätskontrolle

Jedes Projekt durchläuft strenge Qualitätskontrollprozesse, um sicherzustellen, dass die Kunden Zelllinien erhalten, die hohen Standards entsprechen.

Technischer Vorteil

Neben Ingenieuren mit umfassender Erfahrung im Bereich der Zelltechnik verfügen wir über fortschrittliche evolutionäre Algorithmen zur Verbesserung der Reaktorbedingungen und zur Modifizierung der Prozessparameter.

Bei Fragen können Sie sich jederzeit gerne an uns wenden.

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