Einführung in synthetisierte Antikörperbibliotheken

Eine synthetisierte Antikörperbibliothek, auch De-novo-Bibliothek genannt, ist eine synthetische Methode, die Techniken wie die DNA-Synthese oder das Phagen-Display nutzt, um vollständige variable Antikörperregionen, einschließlich Gerüstregionen und CDRs, zu entwerfen und zu synthetisieren, ohne auf naive Antikörperbibliotheken zurückzugreifen.

Eine halbsynthetische Antikörperbibliothek entsteht durch die Kombination natürlich vorkommender Antikörperbibliotheken mit synthetischer Diversität. Dazu werden in der Regel DNA-Oligonukleotide synthetisiert, um verschiedene komplementäre Determinierungsregionen (CDRs) zu erzeugen. Diese werden anschließend mit einem konstanten Antikörpergerüst kombiniert, das aus natürlichen Quellen wie humanen oder tierischen B-Zellen gewonnen wird. Die synthetisierten CDRs bringen Diversität in die Bibliothek ein, wodurch Antikörper entstehen, die ein breites Spektrum an Epitopen erkennen. Die halbsynthetische Antikörperbibliothek stellt somit einen Kompromiss zwischen der natürlichen Diversität des Immunsystems und der durch synthetische Methoden erzielbaren kontrollierten Diversität dar.

Die Unterscheidung zwischen naiven und synthetischen Antikörperbibliotheken beruht auf der Herkunft der Immunglobulingene. Der Unterschied zwischen einer halbsynthetischen und einer synthetischen Antikörperbibliothek liegt darin, dass erstere aus Teilen naiver Antikörpersegmente, wie der leichten oder schweren Kette, besteht, wobei nur eines davon in vitro synthetisiert wird; die synthetische hingegen wird vollständig durch künstliche Synthese mittels PCR in vitro hergestellt.

Alpha Lifetech kann Folgendes bieten

Alpha Lifetech Inc.Wir bieten eine halbsynthetische/synthetische Antikörperbibliothek tierischen und menschlichen Ursprungs an, die auf unserer professionellen Plattform zur Antikörperentwicklung basiert. Dank unserer langjährigen Erfahrung in der genetischen Modifikation und Bibliothekskonstruktion können wir synthetische Bibliotheken erstellen, die Antikörper mit einer Affinität und Spezifität produzieren, die die Möglichkeiten natürlicher Antikörper übertrifft.Alpha LifetechsExperten sind stolz darauf, verkünden zu können, dass wir eine hohe Erfolgsquote beim Aufbau einer Antikörperbibliothek mit 10^8 – 10^10 unabhängigen Klonen garantieren können.

Alpha Lifetech Inc.Wir sind stolz darauf, umfassende Dienstleistungen zur Erstellung von Antikörperbibliotheken anzubieten, um den vielfältigen Bedürfnissen von Forschern weltweit gerecht zu werden. Dazu gehören scFv-, Fab-, VHH-Antikörper- und kundenspezifische Bibliotheken. Unser Ziel ist es, die Anforderungen unserer Kunden zu verstehen und zu erfüllen sowie sie bei allen anstehenden und neuen Herausforderungen in ihrer Forschungsarbeit zu unterstützen.

Prozess der Erstellung synthetischer Antikörperbibliotheken

Design
Die Designphase umfasst die Auswahl von Antikörpergerüsten und komplementaritätsbestimmenden Regionen (CDRs) auf Basis bestehender Antikörpersequenzen oder Strukturdaten. Synthetische CDR-Antikörper können auch so designt werden, dass sie spezifische Funktionalitäten einführen oder die Bindungseigenschaften verbessern.

Synthese
Synthetische DNA, die die entworfenen Antikörpersequenzen einschließlich der Gerüstregionen und CDRs kodiert, wird mittels chemischer oder enzymatischer Methoden synthetisiert.

Montage
Die synthetisierten DNA-Fragmente werden mithilfe von Techniken wie PCR, Ligation oder Gibson-Assembly zu Antikörper-Expressionsvektoren zusammengefügt. Diese Vektoren können dann in Expressionssysteme wie Bakterien-, Hefe- oder Säugetierzellen zur Antikörperproduktion eingebracht werden.

Screening und Auswahl
Die erstellten Antikörperbibliotheken werden mittels Hochdurchsatz-Screening-Methoden auf Antikörper mit den gewünschten Eigenschaften untersucht und selektiert. Je nach Bibliotheksformat und Anwendung können hierfür Techniken wie Phagen-Display, Hefe-Display oder Ribosomen-Display zum Einsatz kommen.

Dienstleistungen zur Erstellung synthetischer Antikörperbibliotheken

Alpha Lifetech Inc.Wir bieten unseren Kunden einen Komplettservice für die Entwicklung und Synthese von Antikörperbibliotheken. Dazu ligieren wir die Repertoires der schweren und leichten V-Gene in einen Phagenvektor mithilfe des Cre-lox-Systems zur ortsspezifischen Rekombination. So entsteht ein Repertoire von Fab-Fragmenten, das auf Phagen präsentiert wird und 6,5 × 10^10 Klone umfasst. Die Bibliothek lieferte Antikörper gegen zahlreiche Antigene, einige davon mit nanomolarer Affinität. Die Generierung der humanen Antikörperbibliothek basiert auf der M13-Phagen-Display-Technologie (siehe Abbildung unten).