Υπηρεσία Ανάπτυξης Μονοκλωνικών Αντισωμάτων

Άλφα Λάιφτεκ Α.Ε.μπορεί να παρέχει πρόβλεψη επιτόπων, σύνθεση πεπτιδίων, έκφραση πρωτεϊνών, παραγωγή πολυκλωνικών ή μονοκλωνικών αντισωμάτων, καθώς και καθαρισμό αντισωμάτων από κυτταροκαλλιέργεια, ασκιτικό υγρό ή ολόκληρο ορό.

Άλφα Λάιφτεκ Α.Ε.έχει εμπειρία στην παροχή στους πελάτες διαφόρων υπηρεσιών σταθερών κυτταρικών σειρών, συμπεριλαμβανομένων κυττάρων υβριδώματος, κυτταρικών σειρών επεξεργασίας γονιδιώματος, κυτταρικών σειρών knockdown και κυτταρικών σειρών υπερέκφρασης. Προσπαθούμε να προσφέρουμε προηγμένες υπηρεσίες προσαρμοσμένων κυτταρικών σειρών σε κάθε πελάτη και οι υπηρεσίες μας είναι αποδεδειγμένες και αξιόπιστες.

Στρατηγική ανάπτυξης αντισωμάτων

1. Σχεδιασμός και παρασκευή αντιγόνου
Αυτά τα αντιγόνα μπορεί να είναι πρωτεΐνες, πεπτίδια ή άλλα μόρια. Ο σχεδιασμός ανοσογόνων απαιτεί μια ολοκληρωμένη προσέγγιση που ενσωματώνει τη γνώση της δομής του αντιγόνου, της ανοσολογίας και των συστημάτων χορήγησης. Η Alpha Lifetech διαθέτει τεχνολογία σχεδιασμού αντιγόνων που μπορεί να σχεδιάσει ανοσογόνα για πελάτες που έχουν ανάγκη.
Η Alpha Lifetech παρέχει προϊόντα ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης για τους πελάτες της. Διαθέτουμε μια ποικιλία συστημάτων έκφρασης πρωτεϊνών, όπως σύστημα έκφρασης E. coli, σύστημα έκφρασης ζύμης, σύστημα έκφρασης βακουλοϊού-εντόμου, σύστημα έκφρασης θηλαστικών κ.λπ., για την παραγωγή των ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών που χρειάζεστε για έρευνα.

2. Εμβολιασμός ζώων
Η Alpha Lifetech μπορεί να παρέχει ανοσογόνα σε πελάτες, ενώ διατίθενται ζώα με άνοσα χαρακτηριστικά, όπως ποντίκια, κουνέλια, πρόβατα, αλπακά, ινδικά χοιρίδια, χάμστερ κ.λπ., για να διαλέξετε.

3. Μέθοδοι παραγωγής μονοκλωνικών αντισωμάτων

●Παραγωγή Mabs με τεχνολογία Hybridoma
Το υβρίδωμα είναι ένα υβριδικό κύτταρο που παράγεται από τη σύντηξη δύο ειδών κυττάρων, συγκεκριμένα της κυτταρικής σειράς μυελώματος ποντικού και των πλασματοκυττάρων (λεμφοκύτταρα Β), στα οποία το ετερόζυγο κύτταρο μπορεί να παράγει συνεχή αντισώματα έναντι του αντιγόνου ενδιαφέροντος in vitro. Η παραγωγή μιας κυτταρικής σειράς υβριδώματος αποτελείται από τρία μέρη: σχεδιασμό αντιγόνου (απτένια, μικρά μόρια και πεπτίδια), ανοσοποίηση ζώων, σύντηξη κυττάρων και έλεγχος θετικών κλώνων. Χρησιμοποιώντας μοναδικές μεθοδολογίες ανοσοποίησης, επιτυγχάνουμε εξαιρετικά υψηλές αποδόσεις σύντηξης κυττάρων (1-10 υβριδώματα ανά χίλια Β κύτταρα) και υψηλούς τίτλους αντισωμάτων, μεγιστοποιώντας το ποσοστό επιτυχίας μας σε επακόλουθες αναλυτικές δοκιμές που περιλαμβάνουν βιοχημικό έλεγχο, δοκιμασίες in vitro με βάση τα κύτταρα και μελέτες σε ζώα.

●Παραγωγή Mabs με τεχνολογία απεικόνισης φάγων
Η απεικόνιση φάγων προσφέρει μια άλλη μέθοδο για τη δημιουργία μονοκλωνικών αντισωμάτων. Τα Β-λεμφοκύτταρα απομονώνονται από το αίμα των ζώων και το mRNA τους εξάγεται. Μέσω της PCR, αυτό το mRNA μετατρέπεται σε cDNA, το οποίο ενισχύει όλα τα τμήματα VH και VL. Αυτά τα τμήματα στη συνέχεια κλωνοποιούνται σε έναν φορέα, συνήθως ως μεταβλητά θραύσματα μονής αλυσίδας (scFv), παράλληλα με την πρωτεΐνη PIII ενός βακτηριοφάγου. Στη συνέχεια, αυτό το κατασκεύασμα χρησιμοποιείται για τη μόλυνση του E. coli, με αποτέλεσμα τη δημιουργία μιας βιβλιοθήκης που περιέχει περίπου 10^10 κύτταρα μέσω εμβολιασμού με έναν βοηθητικό φάγο. Το E. coli είναι στη συνέχεια σε θέση να εκκρίνει τον βακτηριοφάγο που φιλοξενεί τα τμήματα VH και VL ως μέρος του περιβλήματός του. Στη συνέχεια, συγκεκριμένα τμήματα VH και VL που στοχεύουν το αντιγόνο ενδιαφέροντος μπορούν να επιλεγούν και να χρησιμοποιηθούν για τον επαναεμβολιασμό του E. coli με τον βακτηριοφάγο. Τα κύτταρα που περιέχουν το πλασμίδιο στη συνέχεια απομονώνονται και αλληλουχούνται.

4. Έλεγχος σύντηξης

●Σύντηξη και Επιλογή Κυττάρων
Τα συλλεγόμενα Β κύτταρα στη συνέχεια συντήκονται με κύτταρα μυελώματος, τα οποία είναι καρκινικά κύτταρα που μπορούν να πολλαπλασιάζονται επ' αόριστον σε καλλιέργεια. Η σύντηξη επιτυγχάνεται συνήθως χρησιμοποιώντας μια τεχνική όπως η σύντηξη πολυαιθυλενογλυκόλης (PEG).
Μετά τη σύντηξη, τα κύτταρα υβριδώματος καλλιεργούνται σε ένα επιλεκτικό μέσο που επιτρέπει μόνο στα υβριδώματα να επιβιώσουν. Το μέσο συνήθως περιέχει αμινοπτερίνη, η οποία εμποδίζει την ανάπτυξη μη συντηγμένων κυττάρων μυελώματος.

●Έλεγχος και Σφήνωση
Τα προκύπτοντα υβριδωματικά κύτταρα ελέγχονται για την παραγωγή αντισωμάτων ειδικών για το αντιγόνο-στόχο. Αυτό συνήθως γίνεται χρησιμοποιώντας τεχνικές όπως η ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA), η Western blot, η ανοσοκατακρήμνιση και η κυτταρομετρία ροής.

Μόλις ταυτοποιηθούν τα υβριδωματικά κύτταρα που παράγουν το αντίσωμα, κλωνοποιούνται για να δημιουργηθεί ένας πληθυσμός πανομοιότυπων κυττάρων. Αυτό διασφαλίζει ότι το αντίσωμα που παράγεται από κάθε υβριδωματικό κύτταρο είναι πανομοιότυπο.

5. Λειτουργική επαλήθευση αντισωμάτων
Η Alpha Lifetech παρέχει λειτουργική επικύρωση αντισωμάτων, όπως Western blotting, ανοσοϊστοχημεία ή λειτουργικές δοκιμασίες, για τον χαρακτηρισμό μονοκλωνικών αντισωμάτων και την επιβεβαίωση της ειδικότητας, της συγγένειας και της λειτουργικότητας των αντισωμάτων.

6. Βελτιστοποίηση αντισωμάτων
Ο καθαρισμός αντισωμάτων από το υπερκείμενο καλλιέργειας χρησιμοποιώντας τεχνικές όπως η χρωματογραφία συγγένειας πρωτεΐνης Α ή πρωτεΐνης G, και η Alpha Lifetech μπορεί επίσης να παρέχει μεθόδους τροποποίησης αντισωμάτων για τη βελτίωση της συγγένειας αντισωμάτων.

7. Παραγωγή αντισωμάτων
Η Alpha Lifetech μπορεί να αξιολογήσει υποψήφια αντισώματα για εφαρμογές διαλογής υψηλής απόδοσης και παραγωγή μεγάλης κλίμακας.