La fago-eksponado de fago-eksponado celas la fremdan celgenon en la specifan pozicion de la fago-kapsida proteino, kaj esprimas la fremdan genon sur la surfaco de la fago sen influi la normalan funkciadon de la fago. Post pluraj rondoj de ekzamenado, la cela proteino kun forta specifeco kaj alta biologia aktiveco fine estis akirita.

Altkapacitaj antikorpaj bibliotekoj povas esti generitaj per ĉi tiu teknologio. La ekzamena ciklo estas mallonga, la funkcia procezo estas simpla, kaj la gamo de aplikoj estas vasta, permesante la identigon de optimumaj sekvencoj por celitaj peptidoj aŭ proteinoj. En virusrilataj aplikoj, esploristoj povas malkovri antikorpojn, kiuj ligiĝas al kritikaj virusaj epitopes per ekzamenado de grandaj antikorpaj bibliotekoj. Ĉi tiu procezo povas malhelpi la eniron, reproduktadon aŭ imunajn evitadmekanismojn de virusoj, tiel establante fundamenton por malsantraktado.

Fagoekrana teknologio estas pli vaste uzata ol hibridoma teknologio, kiu limiĝas al produktado de malgranda kvanto da antikorpoj kontraŭ specifaj imunogenoj. Kontraste, fagoekrana teknologio povas prezenti tutan antikorpan bibliotekon derivitan de diversaj imunaj specioj.

Fago-ekrana teknologio havas vastan gamon da aplikoj, inkluzive de ekzamenado de la receptoroj de patogenaj mikroorganismoj, studado de proteinaj interagoj, spurado de signaltransdono inter ĉeloj, diagnozado de bestaj malsanoj kaj evoluigado de vakcinoj, inter aliaj kampoj.

Fagoekrana teknologio ofertas multajn avantaĝojn kaj povas esti aplikata en diversaj kampoj. Tamen, la ĉefa defio en la disvolviĝo de rekombinaj antikorpoj uzante la fagoekranan metodon estas la komplekseco kaj kosto asociitaj kun la procezo. Ĉi tiu aliro necesigas la integriĝon de molekulbiologiaj teknikoj, inkluzive de mutacio, klonado kaj esprimo, kune kun imunologiaj, biokemiaj kaj biofizikaj analizoj por identigi kaj karakterizi la deziratajn antikorpojn.

Antigenprezentado estas tre grava ligo. La metodoj de antigenprezentado ĉefe inkluzivas rektan tegitan antigenprezentadon, nerektan tegitan antigenprezentadon, antigenprezentadon per tutaĉela rastrumo, antigenprezentadon per liposomoj, nano-fosfolipidaj diskoj kaj VLP-oj.

La metodo de rekta tegado estas relative simpla, sed la antigena formo estas facile ŝanĝebla, kaj la nerekta tegada operacio estas komplika, sed ĝi povas konservi la antigenan formon kaj plibonigi la prezentan efikecon. Ĉela ekzamenado povas simuli la realan scenon en vivo, sed ekzistas problemo pri nespecifa ligado. Nano-fosfolipida disko havas malgrandan grandecon, altan liver-efikecon kaj bonan stabilecon; VLP-oj estas kunfanditaj kun antigeno aŭ envolvitaj kun antigeno, kio havas altan imunogenecon kaj bonan sekurecon, kaj povas ekigi fortan imunan respondon.

Se la koncentriĝo estas tro malalta, la probableco de ligado kun la fago malpliiĝos, rezultante en reduktita ekzamena efikeco. Male, troe alta koncentriĝo povas pliigi la probablecon de nespecifa ligado, levi la fonan signalon kaj malhelpi la identigon de pozitivaj klonoj.

Milda fiksmetodo povas esti uzata por eviti altajn temperaturojn, fortajn acidojn kaj alkalojn. Nerekta tegaĵmetodo kaj biotino-streptavidina sistemo estis uzataj por redukti la damaĝon al la antigena strukturo. Se la antigeno estas membrana proteino, ĝi povas esti montrata sur la surfaco de sendifektaj ĉeloj aŭ uzata por simuli la membranan medion, kiel ekzemple nano-disko, por konservi ĝian naturan membranan proteinan formon.

Aldone al rutinaj eksperimentoj kiel ELISA, Okcidenta Makulumado (WB), kaj Imunofluoresko (IF), Surfaca Plasmona Resonanco (SPR) kaj Bio-Tavola Interfermometrio (BLI) detektoteknikoj povas esti uzataj por monitori la ligajn kaj disociĝajn procezojn de antikorpoj kaj antigenoj en reala tempo, permesante la determinadon de afineco kaj kinetaj parametroj.

Faĝa montrado povas esti utiligata por generi alt-afinecajn monoklonajn antikorpojn por vasta gamo de antikorpo-produktantaj specioj, inkluzive de sed ne limigite al homoj, musoj, ratoj, kunikloj, kokoj, kameloj, alpakoj, bovinoj, hundoj, ŝafoj, simioj kaj ŝarkoj.

La konstruteknologio de musaj antikorpaj bibliotekoj estas bone establita, kostefika, kaj havas mallongan eksperimentan daŭron, igante ĝin taŭga por prepara antikorpa ekzamenado kaj baza esplorado. Kuniklaj antikorpoj montras fortan afinecon kaj specifecon, kun pli larĝa epitopa rekona gamo kompare kun musaj antikorpoj. Homaj antikorpoj povas esti rekte akiritaj de homaj antikorpaj bibliotekoj, tiel evitante eblajn imunajn reagojn, kiuj povas okazi kiam heterologaj antikorpoj estas administrataj al la homa korpo. Ĉi tiu aliro havas signifan valoron en medikamentesplorado kaj disvolviĝo, precipe en la kreado de terapiaj antikorpoj.

Bestaj imunogenoj estas ĝenerale dividitaj en proteinajn antigenojn, polipeptidajn antigenojn, nukleacidajn antigenojn kaj patogen-rilatajn antigenojn, inter kiuj patogen-rilataj antigenoj inkluzivas virusajn antigenojn (kompletajn viruspartiklojn, virusproteinojn, virusajn nestrukturajn proteinojn, ktp.), bakteriajn antigenojn (kompletajn bakteriajn ekstraktojn, ĉelmurajn komponantojn, sekreciitajn proteinojn, toksinojn, ktp.) kaj parazitajn antigenojn.

Adaptu imunogenojn anstataŭigante imunajn antigenojn per rekombinaj proteinoj kaj anstataŭigante fajroestingajn viruspartiklojn per la strukturaj proteinoj de virusoj. Adaptu la eksperimentan dezajnon kaj modifu la imunan dozon.

Imunogeneco povas esti plibonigita per kunigado de antigenoj kun transportaj proteinoj, kiel ekzemple bova seruma albumino. Plie, imunaj adjuvantoj, inkluzive de la adjuvanto de Freund kaj la aluminia adjuvanto, povas esti uzataj por plilongigi la restadtempon en vivo kaj stimuli la aktivigon kaj proliferadon de imunĉeloj, tiel plibonigante imunogenecon.

Biblioteko de fagaj antikorpoj estas kolekto de diversaj fagaj antikorpoj kreitaj per kunmetado de kompleta aro de variaj regionaj genoj el antikorpoj en fagajn vektorojn kaj esprimado de ili sur la surfacoj de fagoj. Ĉi tiu procezo rezultas en la formado de biblioteko de fagaj antikorpoj.

La ĝenerala procezo de faga montrado implikas plurajn ŝlosilajn paŝojn: ekstraktado de periferiaj sangaj mononukleaj ĉeloj (PBMC) el imunigitaj bestoj, izolado de totala RNA kaj transskribado de ĝi en komplementan DNA-on (cDNA), amplifikado de la cela geno uzante polimerazan ĉenreakcian (PCR) teknologion, klonado de la cela geno en fagan vektoron, kaj transformado de la vektoro en gastigan ĉelon por esprimo. Ĉi tiu procezo rezultas en la konstruado de faga montrada biblioteko, kiu povas rapide identigi alt-afinecajn antikorpojn. Poste, ĉi tiu biblioteko povas servi kiel valora rimedo por la disvolviĝo de vakcinoj, terapiaj drogoj kaj diagnozaj reakciiloj.

Laŭ la fonto de la antikorpa biblioteko, fagaj antikorpaj bibliotekoj povas esti klasifikitaj en imunajn fagajn antikorpajn bibliotekojn kaj denaskajn fagajn antikorpajn bibliotekojn. La ĉefa distingo inter ĉi tiuj du tipoj kuŝas en ĉu la bestoj estis vakcinitaj. Plie, denaskaj antikorpaj bibliotekoj povas esti generitaj per duonsintezo aŭ sintezo.

Ekzistas du ĉefaj indeksoj por taksi la kvaliton de antikorpa biblioteko: stoka kapacito kaj diverseco. Granda stoka kapacito, kombinita kun alta diverseco, certigas la efikan rastradon de antikorpoj kun kaj alta afineco kaj specifeco.

En la procezo de biologia elutriado, la ekranbiblioteko estas inkubaciita kun fiksitaj celoj kaj poste amplekse lavita por forigi nereaktivajn fagojn. Konjugaĵoj estas tipe eluitaj uzante acidan aŭ alt-salan solvaĵon kaj poste amplifitaj en taŭgaj gastigaj ĉeloj por riĉigo. Post 3 ĝis 5 raŭndoj de kribrado, antikorpoj kun alta afineco estas akiritaj.

Fagaj ekzamenmetodoj ĉefe inkluzivas solid-fazan paneladon, likva-fazan ekzamenadon kaj ĉel-bazitan ekzamenadon. La elekto de taŭga ekzamenmetodo devus konsideri la karakterizaĵojn de la celaj molekuloj, la celojn de la ekzamenprocezo kaj la laboratorian medion.

Pozitiva ekzameno estas la plej fundamenta metodo por ekzameni fagajn antikorpojn, kiuj ligiĝas al celproteinoj. Negativa ekzameno servas por elimini nespecifajn antikorpojn. Dum la ekzamena procezo de fagaj antikorpoj, nespecifaj antikorpoj povas esti identigitaj pro interfero de la cela antigena etikedo, materialoj aŭ aliaj antigenoj kun strukturaj similecoj al la cela antigeno. En tiaj kazoj, negativa ekzameno povas plibonigi la efikecon de la ekzamena procezo.

La metodoj por antikorpa konfirmo tipe inkluzivas ELISA, okcidentan makulumadon (WB), fluocitometrion, imunoprecipitadon (IP), imunofluoreskon (IF), imunohistokemion, kaj diversajn aliajn eksperimentajn teknikojn. Alpha Lifetech posedas vastan sperton pri antikorpa detekto kaj havas profesian eksperimentan teamon, certigante la efikecon de antikorpoj en postaj eksperimentoj.