Kio estas Antikorpa Inĝenierado?

Helpe de antikorpa inĝenierado, estis eble modifi la molekulan grandecon, farmakokinetikon, imunogenecon, liga afinecon, specifecon kaj efikiran funkcion de antikorpoj. Post sintezado de antikorpoj, la specifa ligado de antikorpoj igas ilin tre valoraj en klinika diagnozo kaj terapio. Per antikorpa inĝenierado, ili povas renkonti la bezonojn de drogo kaj diagnoza frua evoluo.

La celo de antikorpa inĝenierado estas desegni kaj produkti tre specifajn, stabilajn funkciojn kiujn naturaj antikorpoj ne povas atingi, metante la fundamenton por la produktado de terapiaj antikorpoj.

Alpha Lifetech, kun ĝia ampleksa projekt-sperto en antikorpa inĝenierado, povas provizi personecigitajn unuklonajn kaj policlonajn antikorpajn servojn por multoblaj specioj, kaj ankaŭ pri konstruo kaj ekzamenado de servoj pri antikorpaj bibliotekoj pri fagoj. Alpha Lifetech povas provizi klientojn per kvalitaj biosimilaj antikorpoj kaj rekombinaj proteinaj produktoj, same kiel respondajn servojn, por produkti efikajn, tre specifajn kaj stabilajn antikorpojn. Uzante ampleksajn antikorpojn, proteinajn platformojn kaj fagajn ekransistemojn, ni provizas servojn kovrantajn la kontraŭfluan kaj laŭfluan de produktado de antikorpoj, inkluzive de teknikaj servoj kiel ekzemple antikorpa humanigo, antikorppurigo, antikorpa sinsekvo kaj antikorpa validumado.

La pionira stadio de antikorpinĝenieristiko rilatas al du teknologioj:

--Rekombina DNA-teknologio

--Hibridoma teknologio

La rapida evoluo de antikorpinĝenieristiko rilatas al tri gravaj teknologioj:

--Gena klona teknologio kaj polimeraza ĉenreakcio

- Proteina esprimo: rekombinaj proteinoj estas produktitaj per esprimsistemoj kiel gisto, bastonformaj virusoj kaj plantoj.

--Komputilo helpita struktura dezajno

La unua generacio de antikorpoj estis humanigita por la produktado de ĥimeraj antikorpoj, kie la varia regiono de musaj unuklonaj antikorpoj estis ligita al la konstanta regiono de homaj IgG-molekuloj. La antigen-liga regiono (CDR) de la duageneracia musa unuklona antikorpo estis transplantita en homan IgG. Krom la CDR-regiono, ĉiuj aliaj antikorpoj estas preskaŭ homaj antikorpoj, kaj klopodoj estis faritaj por eviti indukti homajn kontraŭmusantikorpajn (HAMA) respondojn dum uzado de musklonaj antikorpoj por homa terapio.

 

Por konstrui fagan ekranbibliotekon, la unua paŝo estas akiri la genojn kodantajn antikorpojn, kiuj povas esti izolitaj de B-ĉeloj de imunigitaj bestoj (imunbiblioteka konstruo), ĉerpitaj rekte de ne imunigitaj bestoj (natura biblioteka konstruo), aŭ eĉ kunvenitaj en vitro kun antikorpaj genfragmentoj (sinteza biblioteka konstruo). Tiam, la genoj estas plifortigitaj per PCR, enigitaj en plasmidojn, kaj esprimitaj en taŭgaj mastro-sistemoj (gista esprimo (kutime Pichia pastoris), prokariota esprimo (kutime E. coli), mamula ĉela esprimo, plantĉela esprimo, kaj insektĉela esprimo infektita kun bastonformaj virusoj). La plej ofta estas la E. coli-esprimsistemo, kiu integras specifan ĉifradan antikorpsekvencon sur la fago kaj ĉifras unu el la fagoŝelproteinoj (pIII aŭ pVIII). La gena kunfandiĝo de, Kaj montrata sur la surfaco de bakteriofagoj. La kerno de tiu teknologio devas konstrui fagan ekranbibliotekon, kiu havas la avantaĝon super naturaj bibliotekoj en tio ke ĝi povas havi specifan ligadon. Poste, antikorpoj kun antigenspecifeco estas ekzamenitaj tra biologia selektprocezo, celantigenoj estas fiksitaj, nebinitaj fagoj estas plurfoje forlavitaj, kaj ligitaj fagoj estas forlavitaj por plia riĉiĝo. Post tri aŭ pli da ripetoj, alta specifeco kaj alta afinca antikorpoj estas izolitaj.

Figo 3: Antikorpa Biblioteko Konstruo kaj Kribrado

Rekombina DNA-teknologio povas esti uzita por generi antikorpfragmentojn. Fab-antikorpoj povas komence nur esti hidroligitaj per stomaka proteazo por produkti (Fab ') 2 fragmentojn, kiuj tiam estas digestitaj per papaino por generi individuajn Fab-fragmentojn. La Fv-fragmento konsistas el VH kaj VL, kiuj havas malbonan stabilecon pro la foresto de disulfidobligacioj. Tial, VH kaj VL estas interligitaj kune tra mallonga peptido de 15-20 aminoacidoj por formi ununuran ĉenan varian fragmentan antikorpon (scFv) kun molekulpezo de proksimume 25KDa.

La studo de antikorpstrukturo en Kameledoj (Kamelo, LIama, kaj Alpaca) klarigis ke antikorpoj nur havas pezajn ĉenojn kaj neniujn malpezajn ĉenojn, tial ili estas nomitaj pezaj ĉenaj antikorpoj (hcAb). La varia domajno de pezaj ĉenaj antikorpoj estas nomitaj ununuraj domajnaj antikorpoj aŭ nanokorpoj aŭ VHH, kun grandeco de 12-15 kDa. Kiel monomeroj, ili havas neniujn disulfidligojn kaj estas tre stabilaj, kun tre alta afineco por antigenoj.

Figo 5: Peza Ĉena Antikorpo kaj VHH/ Nanobody

Ĉela senesprimo utiligas la esprimon de natura aŭ sinteza DNA por atingi en vitran proteinsintezon, tipe uzante la E. coli-esprimsistemon. Ĝi produktas proteinojn rapide kaj evitas la metabolan kaj citotoksan ŝarĝon sur ĉeloj dum produktado de grandaj kvantoj de rekombinaj proteinoj en vivo. Ĝi ankaŭ povas produkti proteinojn malfacile sintezeblajn, kiel tiuj, kiuj malfacilas modifi post traduko aŭ sintezi membranajn proteinojn.