Aptamer-Karakterizada Analiza Servo

Alpha Lifetech provizas servojn rilatajn al aptameroj dum multaj jaroj, kaj nuntempe povas provizi ampleksajn skemojn por disvolvi aptamerojn, kiel ekzemple aptamer-sintezo, SELEX-rastrumo, alt-traira sekvencado, kaj aptamer-optimigo kaj karakterizado. Surbaze de la avantaĝoj de la SELEX-metodo por rastrumi aptamerojn, Alpha Lifetech vastigis pliajn metodojn por rastrumi aptamerojn.

Enkonduko al Aptamera Karakterizado-Analizo

Afineca konfirmo

La optimumigita aptamera afineco estis kontrolita per koncernaj teknikoj de la aptamera liganalizo. Ekzemploj inkluzivas Izoterman Titran Kalorimetrion (ITC), Fluan Citometrion (FCM), kaj Surfacan Plasmonan Resonancon (SPR), Mikrofluidaĵon, ktp. Aptamera afineco estas kutime esprimita per la disociiga konstanto (KD), fizika kvanto uzata por kvantigi la gradon de molekula disociiĝo en reigebla reakcio. Ju pli malgranda la KD-valoro, des pli stabila la komplekso, tio estas, des pli forta la afineco; Male, ju pli granda la KD-valoro, des pli malstabila la komplekso kaj des pli malforta la afineco. Ĉi tiu paŝo estas la ŝlosilo por identigi la funkciadon de la aptamero, certigante la maturiĝon de la aptamero kaj la eblon ligi al la cela molekulo kun alta afineco kaj selektiveco en praktikaj aplikoj.

Fig.1 Procezo de aptamera afineca maturiĝo. Referenca fonto:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Funkcia konfirmo

Aldone al la afineca konfirmo, la funkcio de la aptamero devas esti kontrolita. Tio inkluzivas la kontrolon de la stabileco, specifeco kaj interagoj de la aptamero kun aliaj molekuloj en specifa medio. La rezultoj de funkcia konfirmo rekte influos la valoron de aptameroj en scienca esplorado kaj industriaj aplikoj.

Specifa Konfirmo

Konkurenciva eksperimento: La kapablo de la aptamero ligiĝi al specifa celo estas taksata en la ĉeesto de aliaj similaj celoj. Se la aptamero povas specife ligiĝi al la cela molekulo sen interfero de aliaj molekuloj, tio indikas, ke ĝi havas altan specifecon.

Eksperimento pri krucreakcio: La aptamero estas ligita al serio de rilataj aŭ senrilataj celoj por vidi ĉu ĝi ligiĝas nur al specifa celo, por kontroli ĝian specifecon.

Stabileca konfirmo

Eksperimento pri nukleaza degradiĝo: La aptameroj estis eksponitaj al malsamaj koncentriĝoj de nukleazoj kaj ilia degradiĝo estis observita. Komparante la gradon de degradiĝo je malsamaj tempoj, la kapablo de la aptamero je kontraŭnukleaza degradiĝo povas esti taksita.

Eksperimento pri temperaturo kaj tempostabileco: La aptamero estis metita sub malsamajn temperaturo- kaj tempokondiĉojn por observi ĝian strukturan kaj funkcian stabilecon. Ĉi tio helpas determini optimumajn stokado- kaj uzkondiĉojn por aptameroj.

Identigo de biologia agado

La taŭga metodo estas kutime elektita laŭ la specifa aplika celo de la nukleaacida aptamero.

(1) Molekulnivela testado: Uzante molekulbiologiajn teknikojn, kiel ĝelan elektroforezon, okcidentan makulumadon, ktp., por detekti la kompleksojn formitajn post kiam la aptamero kombiniĝas kun la cela molekulo, aŭ detekti la ŝanĝojn en la esprimnivelo de la cela molekulo kaŭzitajn de la aptamero.

(2) Ĉelnivela testado: Per ĉelkultura teknologio, aptameroj estas kovitaj kun celĉeloj por observi biologiajn ŝanĝojn kiel ĉelmorfologio, proliferado kaj apoptozo, kaj taksi la biologian aktivecon de aptameroj.

(3) Testado per bestaj modeloj: En taŭgaj bestaj modeloj, nukleaacidaj aptameroj estas donataj per injekto aŭ per administrado de medikamentoj, kaj fiziologiaj indikiloj kaj patologiaj ŝanĝoj de bestoj estas observataj por taksi la biologian aktivecon kaj sekurecon de la aptameroj en vivo.