Servicio de análisis y caracterización de aptámeros

Alpha Lifetech lleva muchos años ofreciendo servicios relacionados con aptámeros y actualmente proporciona servicios integrales para su desarrollo, como síntesis, cribado SELEX, secuenciación de alto rendimiento, optimización y caracterización. Aprovechando las ventajas del método SELEX para el cribado de aptámeros, Alpha Lifetech ha ampliado su oferta con otros métodos para este fin.

Introducción al análisis de caracterización de aptámeros

Verificación de afinidad

La afinidad optimizada del aptámero se verificó mediante técnicas relevantes de ensayo de unión de aptámeros. Algunos ejemplos incluyen calorimetría de titulación isotérmica (ITC), citometría de flujo (FCM), resonancia de plasmones superficiales (SPR), microfluídica, etc. La afinidad del aptámero se suele expresar mediante la constante de disociación (KD), una magnitud física que cuantifica el grado de disociación molecular en una reacción reversible. Cuanto menor sea el valor de KD, más estable será el complejo, es decir, mayor será la afinidad; por el contrario, cuanto mayor sea el valor de KD, más inestable será el complejo y menor la afinidad. Este paso es clave para identificar el rendimiento del aptámero, asegurando la maduración de su afinidad y su capacidad para unirse a la molécula diana con alta afinidad y selectividad en aplicaciones prácticas.

Fig. 1 Proceso de maduración de la afinidad del aptámero. Fuente de referencia:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Verificación de funciones

Además de verificar la afinidad, es necesario comprobar la función del aptámero. Esto incluye verificar su estabilidad, especificidad e interacciones con otras moléculas en un entorno determinado. Los resultados de la verificación funcional influirán directamente en el valor de los aptámeros en la investigación científica y las aplicaciones industriales.

Verificación específica

Experimento competitivo: Se evalúa la capacidad del aptámero para unirse a una diana específica en presencia de otras dianas similares. Si el aptámero puede unirse específicamente a la molécula diana sin interferencia de otras moléculas, esto indica que posee una alta especificidad.

Experimento de reacción cruzada: El aptámero se une a una serie de objetivos relacionados o no relacionados para comprobar si se une únicamente a un objetivo específico, con el fin de verificar su especificidad.

Verificación de estabilidad

Experimento de degradación por nucleasas: Los aptámeros se expusieron a diferentes concentraciones de nucleasas y se observó su degradación. Al comparar el grado de degradación en diferentes momentos, se puede evaluar la capacidad de degradación antinucleasa del aptámero.

Experimento de estabilidad a temperatura y tiempo: El aptámero se sometió a diferentes condiciones de temperatura y tiempo para observar su estabilidad estructural y funcional. Esto ayuda a determinar las condiciones óptimas de almacenamiento y uso de los aptámeros.

Identificación de la actividad biológica

El método apropiado se selecciona generalmente en función del objetivo de aplicación específico del aptámero de ácido nucleico.

(1)Pruebas a nivel molecular: Utilizar técnicas de biología molecular, como electroforesis en gel, Western blot, etc., para detectar los complejos formados después de que el aptámero se combine con la molécula objetivo, o detectar los cambios en el nivel de expresión de la molécula objetivo causados por el aptámero.

(2) Pruebas a nivel celular: Mediante el uso de tecnología de cultivo celular, los aptámeros se incuban con células objetivo para observar cambios biológicos como la morfología celular, la proliferación y la apoptosis, y evaluar la actividad biológica de los aptámeros.

(3)Pruebas en modelos animales: En modelos animales apropiados, los aptámeros de ácido nucleico se administran mediante inyección o administración de fármacos, y se observan indicadores fisiológicos y cambios patológicos de los animales para evaluar la actividad biológica y la seguridad de los aptámeros in vivo.