Servicio de desarrollo de anticuerpos monoclonales

Alpha Lifetech Inc.Puede proporcionar predicción de epítopos, síntesis de péptidos, expresión de proteínas, producción de anticuerpos policlonales o monoclonales, así como purificación de anticuerpos a partir de cultivos celulares, líquido ascítico o suero completo.

Alpha Lifetech Inc.Contamos con amplia experiencia en la prestación de diversos servicios de líneas celulares estables, incluyendo células de hibridoma, líneas celulares de edición genómica, líneas celulares de knockdown y líneas celulares de sobreexpresión. Nos esforzamos por ofrecer servicios avanzados y personalizados de líneas celulares a cada cliente, y nuestros servicios son de eficacia comprobada y de confianza.

Estrategia de desarrollo de anticuerpos

1.Diseño y preparación de antígenos
Estos antígenos pueden ser proteínas, péptidos u otras moléculas. El diseño de inmunógenos requiere un enfoque integral que integre el conocimiento de la estructura, la inmunología y los sistemas de administración de los antígenos. Alpha Lifetech cuenta con tecnología de diseño de antígenos que permite diseñar inmunógenos para clientes que los necesitan.
Alpha Lifetech ofrece productos de proteína recombinante para que sus clientes elijan. Contamos con una variedad de sistemas de expresión de proteínas, como sistemas de expresión de E. coli, sistemas de expresión de levadura, sistemas de expresión de baculovirus-insectos, sistemas de expresión de mamíferos, etc., para producir las proteínas recombinantes que necesita para su investigación.

2. Inmunización animal
Alpha Lifetech puede proporcionar inmunógenos a los clientes, y puede elegir entre animales inmunes como ratones, conejos, ovejas, alpacas, conejillos de indias, hámsteres, etc.

3. Métodos de producción de anticuerpos monoclonales

●Producción de Mabs mediante tecnología de hibridoma
El hibridoma es una célula híbrida producida por la fusión de dos tipos de células: la línea celular de mieloma murino y las células plasmáticas (linfocito B). La célula heterocigota puede producir anticuerpos continuos contra el antígeno de interés in vitro. La producción de una línea celular de hibridoma consta de tres partes: diseño del antígeno (haptenos, moléculas pequeñas y péptidos), inmunización animal, fusión celular y cribado de clones positivos. Mediante metodologías de inmunización únicas, logramos eficiencias de fusión celular excepcionalmente altas (1-10 hibridomas por cada mil células B) y altos títulos de anticuerpos, lo que maximiza nuestra tasa de éxito en pruebas analíticas posteriores, que incluyen cribado bioquímico, ensayos celulares in vitro y estudios con animales.

●Producción de Mabs mediante tecnología de visualización de fagos
La visualización de fagos ofrece otro método para generar anticuerpos monoclonales. Se aíslan linfocitos B de sangre animal y se extrae su ARNm. Mediante PCR, este ARNm se convierte en ADNc, que amplifica todos los segmentos VH y VL. Estos segmentos se clonan en un vector, generalmente como fragmentos variables monocatenarios (scFv), junto con la proteína PIII de un bacteriófago. Posteriormente, esta construcción se utiliza para infectar E. coli, lo que da como resultado la creación de una biblioteca que contiene aproximadamente 10^10 células mediante la inoculación con un fago auxiliar. E. coli puede entonces secretar el bacteriófago que alberga los segmentos VH y VL como parte de su cubierta. A continuación, se pueden seleccionar segmentos VH y VL específicos dirigidos al antígeno de interés y utilizarlos para reinocular E. coli con el bacteriófago. Las células que contienen el plásmido se aíslan y secuencian.

4. Detección de fusiones

●Fusión y selección celular
Las células B extraídas se fusionan con células de mieloma, células cancerosas que pueden proliferar indefinidamente en cultivo. La fusión se logra generalmente mediante una técnica como la fusión con polietilenglicol (PEG).
Tras la fusión, las células de hibridoma se cultivan en un medio selectivo que permite la supervivencia únicamente de los hibridomas. Este medio suele contener aminopterina, que previene el crecimiento de células de mieloma no fusionadas.

●Detección y clonación
Las células de hibridoma resultantes se analizan para detectar la producción de anticuerpos específicos contra el antígeno diana. Esto se realiza generalmente mediante técnicas como el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), la inmunotransferencia (Western blot), la inmunoprecipitación y la citometría de flujo.

Una vez identificadas las células de hibridoma que producen el anticuerpo, se clonan para generar una población de células idénticas. Esto garantiza que el anticuerpo producido por cada célula de hibridoma sea idéntico.

5. Verificación funcional de anticuerpos
Alpha Lifetech proporciona validación funcional de anticuerpos, como Western blot, inmunohistoquímica o ensayos funcionales, para caracterizar los anticuerpos monoclonales y confirmar la especificidad, afinidad y funcionalidad de los anticuerpos.

6. Optimización de anticuerpos
Purificación de anticuerpos del sobrenadante de cultivo utilizando técnicas como cromatografía de afinidad de proteína A o proteína G, y Alpha Lifetech también puede proporcionar métodos de modificación de anticuerpos para mejorar la afinidad de los anticuerpos.

7. Producción de anticuerpos
Alpha Lifetech puede evaluar anticuerpos candidatos para aplicaciones de detección de alto rendimiento y producción a gran escala.