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Plataforma de desarrollo de anticuerpos mediante visualización de fagos

Gracias a la construcción de un sistema de plataforma integral para la detección de anticuerpos, Alpha Lifetech puede proporcionar servicios técnicos que abarcan desde la preparación de anticuerpos, su purificación y secuenciación, entre otros.

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Plataforma de desarrollo de anticuerpos mediante visualización de fagos


Alpha Lifetech, con su amplia experiencia en el descubrimiento de anticuerpos, ofrece servicios personalizados de anticuerpos monoclonales y policlonales para diversas especies, así como servicios de construcción y cribado de bibliotecas de anticuerpos. Alpha Lifetech proporciona a sus clientes anticuerpos y anticuerpos recombinantes de calidad garantizada, junto con los servicios correspondientes, para la producción de anticuerpos eficientes, altamente específicos y estables. Mediante plataformas integrales y técnicas avanzadas de ingeniería de anticuerpos, ofrecemos servicios que abarcan todo el proceso de producción de anticuerpos, incluyendo servicios técnicos como la preparación, purificación, secuenciación y validación de anticuerpos.

Alpha Lifetech cuenta con una plataforma de descubrimiento de anticuerpos consolidada que ofrece a sus clientes una amplia gama de servicios, incluyendo inmunidad animal, construcción y cribado de bibliotecas de anticuerpos mediante visualización en fagos, secuenciación, expresión, purificación, validación y marcaje de anticuerpos basados ​​en tecnología de hibridoma, tecnología de células B individuales, tecnología de visualización en fagos y más. Alpha Lifetech dispone de una línea de producción estandarizada y, además de los servicios de preparación de anticuerpos, también ofrece servicios de apoyo como humanización y maduración de la afinidad de anticuerpos, diseño y desarrollo de fármacos ADC y diseño de secuencias CAR-T. Asimismo, Alpha Lifetech ha construido una biblioteca de anticuerpos basada en las plataformas de tecnología de visualización en fagos M13, T4 y T7, con una capacidad de almacenamiento de hasta 10⁸-10⁹. La tasa de positividad, la tasa de inserción y la diversidad de la biblioteca superan el 90%.

Tecnología de visualización de fagos

La producción de anticuerpos monoclonales se inició utilizando la tecnología de anticuerpos monoclonales de hibridoma para producir anticuerpos monoclonales de hibridoma de ratón. Específicamente, mediante la fusión de células del bazo de ratones inmunizados con células de mieloma de humanos o ratones, se forman células de hibridoma que secretan anticuerpos monoclonales de hibridoma específicos. Mediante la modificación humanizada de los anticuerpos monoclonales de ratón y la modificación genética de los anticuerpos para dotarlos de una región constante de inmunoglobulina humana, se puede reducir su inmunogenicidad. La ingeniería de anticuerpos monoclonales se utiliza ampliamente en aplicaciones biomédicas y clínicas.

Alpha Lifetech ofrece servicios integrales de ingeniería de anticuerpos, desde el diseño de protocolos de investigación preclínica hasta el descubrimiento de conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) y su validación en animales. Los ADC administran fármacos quimioterapéuticos a las células cancerosas. Tras unirse a dianas específicas expresadas en las células cancerosas, los ADC liberan fármacos citotóxicos en su interior. Alpha Lifetech también ofrece servicios completos de optimización de la afinidad de anticuerpos. Mediante la optimización avanzada de mutaciones y la tecnología de cribado de fagos de alto rendimiento, se seleccionan primero los anticuerpos con una afinidad determinada y, posteriormente, se introducen mutaciones de aminoácidos para generar diversas variantes. A continuación, se evalúan y seleccionan los anticuerpos de alta afinidad mediante técnicas de cribado. Tras múltiples rondas de optimización y análisis estructural, se obtienen anticuerpos con mayor afinidad y especificidad.

Alpha Lifetech puede construir diversos tipos de bibliotecas de anticuerpos mediante la técnica de visualización de fagos, incluyendo bibliotecas inmunes, nativas, semisintéticas y sintéticas. Gracias a la alta capacidad de estas bibliotecas, se pueden obtener anticuerpos altamente específicos. Se ofrecen múltiples vectores fagemídicos como pMECS, pComb3X y pCANTAB 5E, así como cepas como TG1 E. coli, XL1 Blue y ER2738. Además de una capacidad de biblioteca de hasta 10⁹, la tasa de inserción del fragmento objetivo es elevada, lo que crea las condiciones óptimas para la selección de anticuerpos que satisfagan las necesidades de los clientes. El diagrama de flujo del servicio de preparación de anticuerpos de Alpha Lifetech, basado en la tecnología de visualización de fagos, se muestra en la Figura 1.

Visualización de fagos - Alpha Lifetech
Figura 1. Diagrama de proceso para la preparación de anticuerpos monoclonales mediante la tecnología de presentación en fagos.

Flujo de trabajo de producción de anticuerpos mediante presentación de fagos

Pasos Contenido del servicio Cronología
Paso 1: Inmunización animal
(1) Inmunización animal 4 veces, inmunización de refuerzo 1 dosis, un total de 5 dosis inmunizadas.
(2) Se recolectó suero negativo antes de la inmunización y se realizó ELISA en la cuarta dosis para detectar el título sérico.
(3) Si el título de anticuerpos séricos de la cuarta dosis cumple con los requisitos, se administrará una dosis adicional de inmunización 7 días antes de la toma de muestra de sangre. Si no cumple con los requisitos, se continuará con la inmunización de rutina.
(4) Potencia calificada, recolección de sangre y separación de monocitos
10 semanas
Paso 2: Preparación del ADNc
(1) Extracción de ARN total de PBMC (Kit de extracción de ARN)
(2) Preparación de ADNc mediante RT-PCR de alta fidelidad (kit de transcripción inversa)
1 día
Paso 3: Construcción de la biblioteca de anticuerpos
(1) Utilizando ADNc como plantilla, los genes se amplificaron mediante dos rondas de PCR.
(2) Construcción y transformación de fagos: vector fagemídico de empalme genético, transformación por electroporación de bacterias huésped TG1, construcción de biblioteca de anticuerpos.
(3) Identificación: Seleccionar aleatoriamente 24 clones, tasa de identificación positiva por PCR + tasa de inserción.
(4) Preparación asistida de fagos: amplificación y purificación del fago M13.
(5) Rescate de bibliotecas de visualización de fagos
3-4 semanas
Paso 4: Cribado de la biblioteca de anticuerpos (3 rondas)
(1) Cribado predeterminado de 3 rondas (cribado en fase sólida): cribado de presión para eliminar los anticuerpos no específicos en la mayor medida posible.
(2) Amplificación de un solo clon de bacteriófago seleccionado + expresión inducida por IPTG + detección de clones positivos mediante ELISA.
(3) Todos los clones positivos fueron seleccionados para la secuenciación genética.
4-5 semanas

Ventajas de la tecnología de visualización de fagos

Alpha Lifetech cuenta con una dilatada experiencia en el campo del desarrollo de anticuerpos. A lo largo de los años, Alpha Lifetech ha consolidado una plataforma integral para el desarrollo de anticuerpos.

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Servicios de apoyo

Podemos proporcionar diferentes servicios de construcción de bibliotecas inmunológicas basadas en animales y servicios de cribado de bibliotecas de anticuerpos naturales según las necesidades del cliente.

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Objetivo múltiple

Disponemos de servicios de descubrimiento de anticuerpos dirigidos a múltiples objetivos: proteínas, péptidos, moléculas pequeñas, virus, proteínas de membrana, ARNm, etc.

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Vectores múltiples

Servicio de construcción de bibliotecas personalizadas: podemos proporcionar varios vectores de bacteriófagos, incluidos PMECS, pComb3X y pCANTAB 5E, y modificarlos según las necesidades del cliente.

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Plataforma madura

La capacidad de almacenamiento puede alcanzar 10 ^ 8-10 ^ 9, las tasas de inserción son todas superiores al 90%, y la afinidad de los anticuerpos obtenidos mediante cribado generalmente se encuentra en el nivel nM pM.

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Plataforma de desarrollo de anticuerpos mediante visualización de fagos

Alpha Lifetech puede proporcionar servicios técnicos para el desarrollo de anticuerpos mediante la técnica de presentación en fagos, desde la preparación de anticuerpos, la purificación de anticuerpos, la secuenciación de anticuerpos, etc.

Si tiene alguna pregunta, no dude en ponerse en contacto con nosotros en cualquier momento.

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