Aptameeri arendusplatvorm

Aptameerid on üheahelalised oligonukleotiidid (DNA, RNA või XNA), millel on kõrge afiinsus ja spetsiifilisus, mis seonduvad spetsiifiliselt sihtmolekulidega, näiteks antikehadega, ning neid kasutatakse laialdaselt biosensorite, diagnostika ja ravimite väljatöötamiseks.

Alpha Lifetechi pakutav aptameeriplatvorm hõlmab kahte kategooriat: aptameeride sünteesiplatvorm, mis hõlmab peamiselt SELEX-i aptameeride teegi sünteesiteenust ja aptameeride (DNA, RNA või XNA) arendusteenust, ning aptameeride sõelumisplatvorm, mis hõlmab SELEX-tehnoloogial põhinevaid sõelumisteenuseid valkude, peptiidide, rakkude, väikeste molekulide, metalliioonide ja muude sihtmolekulide jaoks, samuti aptameeride optimeerimise ja identifitseerimise analüüsi teenuseid.

Aptameeride sünteesi platvorm

SELEX aptameeride teekide sünteesiteenus

SELEX aptameeride teekide sünteesiteenus hõlmab peamiselt teekide loomist, mis sisaldavad suurt hulka juhuslikke üheahelalisi oligonukleotiidjärjestusi in vitro keemilise sünteesi teel vastavalt sihtmolekulidele. Teekide loomine on SELEX-tehnoloogia lähtepunkt, mis pakub arvukalt kandidaatjärjestusi järgnevaks skriininguprotsessiks, luues tohutuid juhuslikke teeke ja suurendades suure afiinsusega aptameeride skriiningu võimalust.

Raamatukogu süntees jaguneb peamiselt järgmisteks etappideks:

Sammud	Tehnoloogia üksikasjad
Sihtmolekulide tuvastamine	Tuvastage sihtmolekulid, mida tuleb aptameeride suhtes skriinida – need võivad olla valgud, nukleiinhapped, väikemolekulaarsed ühendid, metalliioonid jne.
Juhusliku järjestuse disain	Juhusliku järjestuse pikkus, aluste koostis ja muud parameetrid kavandati vastavalt sihtmolekulide omadustele ja sõelumisnõuetele. Tavaliselt on juhuslike järjestuste pikkus kümneid kuni sadu aluseid.
Fikseeritud järjestuste süntees	Projekteeritakse ja sünteesitakse mõlemas otsas fikseeritud järjestustega (näiteks PCR-praimerijärjestustega) oligonukleotiidfragmendid, mida kasutatakse järgnevas amplifikatsiooni- ja skriininguprotsessis.

Sünteesitud teeki tuleb kvaliteedikontrolli eesmärgil veel töödelda. Teegi kontsentratsioon määrati kindlaks, et tagada selle rakendatavus järgnevas sõelumisprotsessis. Teegis olevate juhuslike järjestuste mitmekesisust ja täpsust kontrolliti sekveneerimise ja muude meetodite abil, et tagada teeki kvaliteedi vastavus sõelumisnõuetele.

Ülaltoodud etappide abil saab sünteesida kvaliteetse ja väga mitmekesise SELEX aptameeride teeki, mis pakub arvukalt kandidaatjärjestusi järgnevaks skriininguprotsessiks.

Aptameeride arendusteenused (DNA, RNA või XNA)

Aptameerid viitavad tavaliselt nukleiinhappe aptameeridele. Nukleiinhappe aptameeride hulka kuuluvad DNA aptameerid, RNA aptameerid ja XNA aptameerid, mis on keemiliselt modifitseeritud nukleiinhappe aptameerid. SELEX-tehnikat kasutatakse laialdaselt aptameeride arendamiseks. Aptameeride arendusteenuste põhiline töövoog hõlmab teekide loomist, sihtmärkide sidumist, isoleerimist ja puhastamist, amplifikatsiooni, mitut sõelumisvooru ja järjestuse tuvastamist. Oleme aastaid keskendunud teekide loomisele ja omame laialdasi kogemusi aptameeride arendamisel. Oleme pühendunud klientidele paremate teenuste pakkumisele.

SELEXi tehnoloogiaprotsess

SELEX-protsess koosneb mitmest voorust, millest igaüks sisaldab järgmisi põhietappe:

Teegi ja sihtmärgi sidumine

Konstrueeritud nukleiinhappeteek segatakse spetsiifiliste sihtmolekulidega (näiteks valkude, väikemolekuliliste ühenditega jne), nii et teeki kuuluvatel nukleiinhappejärjestustel on võimalus sihtmolekulidega seonduda.

Seondumata molekulide eraldamine

Sihtmolekuliga mitteseotud nukleiinhappejärjestused eraldatakse segust spetsiifiliste meetoditega, näiteks afiinsuskromatograafia, magnethelmeste eraldamine jne.

Sidumismolekulide amplifikatsioon

Sihtmolekuliga seotud nukleiinhappejärjestus amplifitseeritakse, tavaliselt polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) tehnoloogia abil. Järgnevas sõelumisfaasis kasutatakse amplifitseeritud järjestusi lähtekoguna.

Joonis 1: SELEX-i sõelumisprotsess

Aptameeri sõelumisplatvorm

Aptameeride sõeluuringu teenus

Alpha Lifetech pakub laia valikut spetsialiseeritud aptameeride skriininguteenuseid, rakendades erinevat tüüpi molekulide jaoks mitmesuguseid SELEX-meetodeid:

Sihtmärgi tüübid	Tehnilised andmed
Valgu aptameeri skriining SELEXi abil	Valgu aptameeride skriinimise peamine eesmärk on skriinida aptameere, mis suudavad spetsiifiliselt seonduda sihtvalgu molekulidega. Neid aptameere on lihtsam sünteesida, need on stabiilsemad ja vähem vastuvõtlikud keskkonnateguritele.
Peptiidi aptameeri skriining SELEXi abil	Peptiidaptameerid on lühikeste peptiidjärjestuste klass, millel on kõrge spetsiifilisus ja afiinsus, mis suudavad spetsiifiliselt seonduda sihtainetega ja millel on lai rakenduspotentsiaal biomeditsiini valdkonnas. Spetsiifilise sõelumisprotsessi abil sõelutakse suurest hulgast juhuslikest peptiidjärjestuste kogudest peptiidaptameere, mis suudavad spetsiifiliselt seonduda sihtmolekulidega.
Rakuspetsiifiline aptameeride skriining (Cell-SELEX)	Sihtmärkidena valmistatakse ette sihtrakud või raku pinnal olevad spetsiifilised molekulid. Sihtmärkideks võivad olla terved rakud, rakumembraanil olevad retseptorid, valgud või muud väikesed molekulid.
Väikese molekuli aptameeri skriining Capture SELEXi abil	Capture SELEX on in vitro sõelumistehnika väikemolekuliliste aptameeride skriinimiseks, mis on SELEXi variant. Capture SELEX sobib eriti hästi väikemolekuliliste sihtmärkide aptameeride skriinimiseks, millel on tavaliselt vähem funktsionaalseid rühmi ja mida on raske otse tahkefaasilistele kandjatele immobiliseerida.
Elusloomadel põhinevad SELEX-teenused	Elusloomadel põhinev sõeluuringu teenus on eksperimentaalne meetod, mida kasutatakse laialdaselt bioteaduste, meditsiini ja biotehnoloogia valdkonnas ning mis kasutab elusloomi eksperimentaalsete mudelitena konkreetsete molekulide, ravimite, ravimite või bioloogiliste protsesside skriinimiseks ja hindamiseks. Teenused on loodud inimkeha füsioloogilise keskkonna simuleerimiseks, et täpsemalt ennustada ja hinnata eksperimentaalsete tulemuste tõhusust ja ohutust inimkehas.

Aptameeride optimeerimise teenus

Aptameeride hüdrofiilsus, suur afiinsuse kadu tootmise ajal ja kiire eritumine piiravad nende rakendamist. Praegu on aptameeride toimivuse parandamiseks uuritud mitmesuguseid optimeerimismeetodeid.

Samuti on meil aptameeri optimeerimiseks mitmesuguseid viise, mis hõlmavad kärpimist, modifitseerimist ja konjugeerimist sobiva rühmaga (tiool, karboksü, amiin, fluorofoor jne).

Aptameeri iseloomustamise analüüsi teenus

Aptameeri iseloomustamise analüüsi teenus viitab professionaalsele teenusele, mis hõlmab saadud aptameeri toimivuse hindamist, struktuuri lahutamist ja funktsionaalset kontrollimist, et tagada aptameeri vastavus spetsiifilise sidumisvõime, stabiilsuse ja spetsiifilisuse nõuetele. See hõlmab peamiselt afiinsuse ja spetsiifilisuse analüüsi, stabiilsuse hindamist ja bioloogilise funktsiooni kontrollimist.