Fagoen bistaratze teknologiak gene arrotza fagoaren kapside proteinaren posizio espezifikoan txertatzea du helburu, eta gene arrotza fagoaren gainazalean adieraztea, fagoaren funtzio normala eragin gabe. Hainbat baheketa-txanda egin ondoren, espezifikotasun sendoa eta jarduera biologiko handiko proteina lortu zen azkenean.

Teknologia hau erabiliz, gaitasun handiko antigorputz liburutegiak sor daitezke. Bahetze zikloa laburra da, eragiketa prozesua erraza da eta aplikazio sorta zabala da, peptido edo proteina zuzenduentzako sekuentzia optimoak identifikatzea ahalbidetuz. Birusekin lotutako aplikazioetan, ikertzaileek birus epitopo kritikoei lotzen zaizkien antigorputzak aurki ditzakete antigorputz liburutegi handiak arakatuz. Prozesu honek birusen sarrera, erreplikazioa edo immunitate-saiheste mekanismoak oztopatu ditzake, eta horrela gaixotasunen tratamendurako oinarriak ezarri.

Fagoen bistaratze teknologia hibridoma teknologia baino gehiago erabiltzen da, azken hau immunogeno espezifikoen aurkako antigorputz kopuru txiki bat ekoiztera mugatzen baita. Aldiz, fagoen bistaratze teknologiak hainbat espezie immunetik eratorritako antigorputz liburutegi oso bat aurkez dezake.

Fagoen pantaila teknologiak aplikazio sorta zabala du, besteak beste, mikroorganismo patogenoen hartzaileak aztertzea, proteinen arteko elkarrekintzak aztertzea, zelulen arteko seinaleen transmisioa jarraitzea, animalien gaixotasunak diagnostikatzea eta txertoak garatzea.

Fagoen bistaratze teknologiak abantaila ugari eskaintzen ditu eta hainbat arlotan aplika daiteke. Hala ere, fagoen bistaratze metodoa erabiliz antigorputz birkonbinatuak garatzeko erronka nagusia prozesuarekin lotutako konplexutasuna eta kostua da. Ikuspegi honek biologia molekularreko teknikak integratzea eskatzen du, mutazioa, klonazioa eta adierazpena barne, baita analisi immunologiko, biokimiko eta biofisikoekin ere, nahi diren antigorputzak identifikatu eta karakterizatzeko.

Antigenoen aurkezpena lotura oso garrantzitsua da. Antigenoen aurkezpen metodoen artean daude batez ere antigenoen aurkezpen zuzena, antigenoen aurkezpen zeharkakoa, antigenoen aurkezpena zelula osoen baheketaren bidez, antigenoen aurkezpena liposomen, nano-fosfolipido diskoen eta VLPen bidez.

Zuzeneko estaldura-metodoa nahiko sinplea da, baina antigenoaren konformazioa erraz aldatzen da, eta zeharkako estaldura-eragiketa konplikatua da, baina antigenoaren konformazioa mantendu eta aurkezpen-eraginkortasuna hobetu dezake. Zelulen baheketak benetako eszena in vivo simulatu dezake, baina lotura ez-espezifikoaren arazoa dago. Nano-fosfolipidoen diskoak tamaina txikia, banaketa-eraginkortasun handia eta egonkortasun ona ditu; VLPak antigenoarekin fusionatzen dira edo antigenoarekin biltzen dira, eta horrek immunogenizitate handia eta segurtasun ona ditu, eta erantzun immunologiko sendoa eragin dezake.

Kontzentrazioa baxuegia bada, fagoarekin lotzeko probabilitatea gutxitu egingo da, eta ondorioz, bahetze-eraginkortasuna murriztuko da. Alderantziz, kontzentrazio altuegi batek lotura ez-espezifikoaren probabilitatea handitu, atzeko planoaren seinalea igo eta klon positiboak identifikatzea oztopatu dezake.

Tenperatura altuak, azido sendoak eta alkaliak saihesteko finkatze-metodo leuna erabil daiteke. Zeharkako estaldura-metodoa eta biotina-estreptavidina sistema erabili ziren antigenoen egiturari egindako kaltea murrizteko. Antigenoa mintz-proteina bat bada, zelula osoen gainazalean bistara daiteke edo mintz-ingurunea simulatzeko erabil daiteke, hala nola nano-disko bat, bere mintz-proteinaren konformazio naturala mantentzeko.

ELISA, Western Blotting (WB) eta Immunofluoreszentzia (IF) bezalako ohiko esperimentuez gain, Gainazaleko Plasmoi Erresonantzia (SPR) eta Bio-Geruza Interferometria (BLI) detekzio teknikak erabil daitezke antigorputzen eta antigenoen lotura eta disoziazio prozesuak denbora errealean kontrolatzeko, afinitate eta parametro zinetikoak zehazteko aukera emanez.

Fagoen pantaila erabil daiteke afinitate handiko antigorputz monoklonalak sortzeko antigorputz monoklonalak sortzeko hainbat espezierentzat, besteak beste, gizakiak, saguak, arratoiak, untxiak, oiloak, gameluak, alpakak, behiak, txakurrak, ardiak, tximinoak eta marrazoak.

Sagu-antigorputz liburutegien eraikuntza-teknologia ondo finkatuta dago, kostu-eraginkorra da eta esperimentu-iraupen laburra du, eta horrek egokia egiten du aurretiazko antigorputzen baheketarako eta oinarrizko ikerketarako. Untxi-antigorputzek afinitate eta espezifikotasun handia erakusten dute, sagu-antigorputzekin alderatuta epitopoen ezagutza-tarte zabalagoa dutelarik. Giza-antigorputzak zuzenean lor daitezke giza-antigorputz liburutegietatik, eta horrela saihestu egiten dira giza gorputzean antigorputz heterologoak administratzen direnean gerta daitezkeen erreakzio immunologiko potentzialak. Ikuspegi honek balio handia du sendagaien ikerketan eta garapenean, batez ere antigorputz terapeutikoak sortzeko.

Animalien immunogenoak, oro har, proteina-antigeno, polipeptido-antigeno, azido nukleiko-antigeno eta patogenoekin lotutako antigenoetan banatzen dira, eta horien artean, patogenoekin lotutako antigenoen artean daude birus-antigenoa (birus-partikula osoa, birus-proteina, birus-proteina ez-estrukturala, etab.), bakterio-antigenoa (bakterio-estraktu osoa, zelula-hormaren osagaia, jariatutako proteina, toxina, etab.) eta parasito-antigenoa.

Egokitu immunogenoak antigeno immuneak proteina birkonbinatuekin ordezkatuz eta suhiltzaileen birus partikulak birusen proteina estrukturalekin ordezkatuz. Egokitu diseinu esperimentala eta aldatu dosi immunologikoa.

Immunogenizitatea hobetu daiteke antigenoak garraiatzaile-proteinekin, hala nola behi-serumeko albuminarekin, akoplatuz. Horrez gain, immunitate-laguntzaileak, Freunden laguntzailea eta aluminiozko laguntzailea barne, erabil daitezke in vivo-ko bizileku-denbora luzatzeko eta zelula immunitarioen aktibazioa eta ugalketa estimulatzeko, horrela immunogenizitatea hobetuz.

Fagoak dituzten antigorputz liburutegi bat fagoen aurkako antigorputz anitzen bilduma bat da, eskualde aldakorreko gene multzo oso bat antigorputzetatik fago bektoreetan bildu eta fagoen gainazalean adieraziz sortua. Prozesu honek fagoen antigorputz liburutegi bat sortzen du.

Fagoen bistaratze prozesu orokorrak hainbat urrats gako ditu: animalia immunizatuetatik odoleko zelula mononuklear periferikoak (PBMC) erauztea, RNA osoa isolatzea eta DNA osagarrian (cDNA) transkribatzea, gene diana polimerasa-kate-erreakzio (PCR) teknologia erabiliz anplifikatzea, gene diana fago bektore batean klonatzea eta bektorea adierazpenerako ostalari-zelula batean eraldatzea. Prozesu honek fagoen bistaratze liburutegi bat eraikitzea dakar, eta horrek afinitate handiko antigorputzak azkar identifikatu ditzake. Ondoren, liburutegi hau baliabide baliotsua izan daiteke txertoak, sendagai terapeutikoak eta erreakzio diagnostikoak garatzeko.

Antigorputz liburutegiaren iturriaren arabera, fagoen antigorputz liburutegiak sailka daitezke immune fagoen antigorputz liburutegietan eta natiboen fagoen antigorputz liburutegietan. Bi mota hauen arteko bereizketa nagusia animaliak txertoa hartu duten ala ez da. Gainera, natiboen antigorputz liburutegiak erdi-sintesi edo sintesi bidez sor daitezke.

Bi adierazle nagusi daude antigorputz-liburutegi baten kalitatea ebaluatzeko: biltegiratze-ahalmena eta dibertsitatea. Biltegiratze-ahalmen handi batek, dibertsitate handiarekin batera, afinitate eta espezifikotasun handiko antigorputzen baheketa eraginkorra bermatzen du.

Elutriazio biologikoaren prozesuan, bistaratze liburutegia helburu finkoekin inkubatzen da eta ondoren sakonki garbitzen da erreaktiboak ez diren fagoak kentzeko. Konjugatuak normalean azido edo gatz handiko soluzio bat erabiliz elutzen dira eta ondoren ostalari-zelula egokietan anplifikatzen dira aberasteko. 3-5 txandako baheketaren ondoren, afinitate handiko antigorputzak lortzen dira.

Fagoen bahetze-metodoek batez ere fase solidoko baheketa, fase likidoko baheketa eta zeluletan oinarritutako baheketa barne hartzen dituzte. Bahetze-metodo egoki bat hautatzerakoan, molekulen ezaugarriak, bahetze-prozesuaren helburuak eta laborategiko ingurunea kontuan hartu behar dira.

Baheketa positiboa da proteina diana lotzen diren fagoen antigorputzak bahetzeko metodorik oinarrizkoena. Baheketa negatiboak antigorputz ez-espezifikoak ezabatzeko balio du. Fagoen antigorputzen baheketa prozesuan, antigorputz ez-espezifikoak identifikatu daitezke antigenoaren etiketaren, materialen edo antigenoarekiko egitura-antzekotasunak dituzten beste antigeno batzuen interferentziagatik. Kasu horietan, baheketa negatiboak baheketa prozesuaren eraginkortasuna hobetu dezake.

Antigorputzak egiaztatzeko metodoek normalean ELISA, Western Blotting (WB), fluxu-zitometria, immunoprezipitazioa (IP), immunofluoreszentzia (IF), immunohistokimika eta beste hainbat teknika esperimental barne hartzen dituzte. Alpha Lifetechek esperientzia zabala du antigorputzen detekzioan eta esperimentu-talde profesionala du, ondorengo esperimentuetan antigorputzen eraginkortasuna bermatuz.