Zer da Antigorputzen Ingeniaritza?

Antigorputzen ingeniaritzaren laguntzarekin, antigorputzen tamaina molekularra, farmakokinetika, immunogenizitatea, lotura-afinitatea, espezifikotasuna eta efektore-funtzioa aldatzea lortu da. Antigorputzak sintetizatu ondoren, antigorputzen lotura espezifikoak oso baliotsuak bihurtzen ditu diagnostiko klinikoan eta tratamenduan. Antigorputzen ingeniaritzaren bidez, sendagaien eta diagnostikoaren garapen goiztiarraren beharrak ase ditzakete.

Antigorputzen ingeniaritzaren helburua antigorputz naturalek lortu ezin dituzten funtzio oso espezifiko eta egonkorrak diseinatu eta ekoiztea da, antigorputz terapeutikoak ekoizteko oinarriak ezarriz.

Alpha Lifetech-ek, antigorputzen ingeniaritzan duen proiektu-esperientzia zabalari esker, espezie anitzetarako antigorputz monoklonal eta poliklonal zerbitzu pertsonalizatuak eskain ditzake, baita fagoen bistaratze-antigorputz liburutegien eraikuntza eta baheketa zerbitzuak ere. Alpha Lifetech-ek bezeroei kalitatezko antigorputz biosimilarrak eta proteina birkonbinatuen produktuak eskain diezazkieke, baita dagokien zerbitzuak ere, antigorputz eraginkorrak, oso espezifikoak eta egonkorrak ekoizteko. Antigorputz, proteina plataforma eta fagoen bistaratze-sistema integralak erabiliz, antigorputzen ekoizpenaren goi-mailako eta behe-mailako zerbitzuak eskaintzen ditugu, antigorputzen humanizazioa, antigorputzen purifikazioa, antigorputzen sekuentziazioa eta antigorputzen baliozkotzea bezalako zerbitzu teknikoak barne.

Antigorputzen ingeniaritzaren aitzindari-etapa bi teknologiarekin lotuta dago:

--DNA birkonbinatuaren teknologia

--Hibridoma teknologia

Antigorputzen ingeniaritzaren garapen azkarra hiru teknologia garrantzitsurekin lotuta dago:

--Geneen klonazio teknologia eta polimerasaren kate-erreakzioa

--Proteinen adierazpena: Proteina birkonbinatuak legamia, birus makil-formakoak eta landareak bezalako adierazpen-sistemek sortzen dituzte.

--Ordenagailuz lagundutako egitura-diseinua

Lehen belaunaldiko antigorputzak humanizatu ziren antigorputz kimerikoak ekoizteko, non saguaren antigorputz monoklonalen eskualde aldakorra gizakien IgG molekulen eskualde konstanteari lotuta zegoen. Bigarren belaunaldiko saguaren antigorputz monoklonalen antigenoen lotura-eskualdea (CDR) gizakien IgG-an transplantatu zen. CDR eskualdea izan ezik, gainerako antigorputz guztiak ia gizakien antigorputzak dira, eta ahaleginak egin ziren gizakien aurkako saguaren aurkako antigorputz (HAMA) erantzunak ez eragiteko sagu klon antigorputzak gizakien tratamendurako erabiltzean.

 

Fagoak erakusteko liburutegi bat eraikitzeko, lehen urratsa antigorputzak kodetzen dituzten geneak lortzea da, eta hauek animalia immunizatuen B zeluletatik isolatu daitezke (immunitate liburutegiaren eraikuntza), zuzenean animalia ez-immunizatuetatik erauzi (liburutegi naturalaren eraikuntza) edo baita in vitro antigorputzen geneen zatiekin muntatu ere (liburutegi sintetikoaren eraikuntza). Ondoren, geneak PCR bidez anplifikatzen dira, plasmidoetan txertatzen dira eta ostalari-sistema egokietan adierazten dira (legamien adierazpena (normalean Pichia pastoris), prokariotoen adierazpena (normalean E. coli), ugaztunen zelulen adierazpena, landare-zelulen adierazpena eta birus hagaxka-formakoekin infektatutako intsektuen zelulen adierazpena). Ohikoena E. coli adierazpen-sistema da, antigorputz-sekuentzia kodetzaile espezifiko bat fagoan integratzen duena eta fagoaren oskolaren proteinetako bat (pIII edo pVIII) kodetzen duena. Bakteriofagoen gainazalean bistaratzen den eta fagoen fusioa. Teknologia honen muina fagoak erakusteko liburutegi bat eraikitzea da, liburutegi naturalen aldean abantaila duena lotura espezifikoa izan dezakeelako. Ondoren, antigenoen espezifikotasuna duten antigorputzak hautaketa biologiko baten bidez aztertzen dira, helburuko antigenoak finkatzen dira, lotu gabeko fagoak behin eta berriz garbitzen dira eta lotutako fagoak garbitzen dira aberaste gehiago lortzeko. Hiru errepikapen-txanda edo gehiagoren ondoren, espezifikotasun handiko eta afinitate handiko antigorputzak isolatzen dira.

3. irudia: Antigorputz liburutegiaren eraikuntza eta baheketa

DNA birkonbinatuaren teknologia erabil daiteke antigorputz zatiak sortzeko. Hasieran, Fab antigorputzak proteasa gastrikoak bakarrik hidroliza ditzake (Fab ') 2 zatiak sortzeko, eta ondoren papainak digeritzen ditu Fab zati indibidualak sortzeko. Fv zatia VH eta VLz osatuta dago, eta hauek egonkortasun eskasa dute disulfuro loturen faltagatik. Beraz, VH eta VL 15-20 aminoazidoko peptido labur baten bidez lotuta daude, gutxi gorabehera 25KDa-ko pisu molekularra duen kate bakarreko zati aldakor (scFv) antigorputz bat osatzeko.

Kamelidoen (Gamelua, Liama ​​eta Alpaka) antigorputzen egituraren ikerketak argitu du antigorputzek kate astunak bakarrik dituztela eta ez dutela kate arinrik, horregatik kate astuneko antigorputzak (hcAb) deitzen zaie. Kate astuneko antigorputzen domeinu aldakorrari domeinu bakarreko antigorputzak edo nanogorputzak edo VHH deitzen zaio, 12-15 kDa-ko tamainarekin. Monomero gisa, ez dute disulfuro loturarik eta oso egonkorrak dira, antigenoekiko afinitate oso handiarekin.

5. irudia: Kate astunaren antigorputza eta VHH/Nanogorputza

Zelulen adierazpen askeak DNA natural edo sintetikoaren adierazpena erabiltzen du in vitro proteinen sintesia lortzeko, normalean E. coli adierazpen sistema erabiliz. Proteinak azkar sortzen ditu eta zelulen gaineko zama metaboliko eta zitoxikoa saihesten du in vivo proteina birkonbinatu kopuru handiak ekoiztean. Sintetizatzeko zailak diren proteinak ere sor ditzake, hala nola itzulpenaren ondoren aldatzeko edo mintz-proteinak sintetizatzeko zailak direnak.