Zer da Antigorputzen Ingeniaritza?

Antigorputzen ingeniaritzaren laguntzaz, antigorputzen tamaina molekularra, farmakokinetika, immunogenizitatea, lotura-afinitatea, espezifikotasuna eta funtzio efektoreak aldatzea posible izan da. Antigorputzak sintetizatu ondoren, antigorputzen lotura espezifikoak oso baliotsu bihurtzen ditu diagnostiko eta tratamendu klinikoan. Antigorputzen ingeniaritzaren bidez, sendagaien eta diagnostikoen garapen goiztiarraren beharrak ase ditzakete.

Antigorputzen ingeniaritzaren helburua antigorputz naturalek lortu ezin dituzten funtzio oso espezifikoak eta egonkorrak diseinatzea eta ekoiztea da, antigorputz terapeutikoak ekoizteko oinarriak ezarriz.

Alpha Lifetech-ek, antigorputzen ingeniaritzan proiektuko esperientzia zabalarekin, antigorputz monoklonal eta poliklonal zerbitzu pertsonalizatuak eskain ditzake espezie anitzeko, baita fagoen pantailako antigorputz liburutegien eraikuntza eta baheketa zerbitzuak ere. Alpha Lifetech-ek bezeroei kalitatezko antigorputz bioantzeko eta proteina birkonbinatuen produktuak eskain diezazkieke, baita dagozkien zerbitzuak ere, antigorputz eraginkor, oso espezifikoak eta egonkorrak sortzeko. Antigorputz, proteina-plataforma eta fagoen bistaratzeko sistema integralak erabiliz, antigorputz-ekoizpenaren gora eta beherako zerbitzuak eskaintzen ditugu, zerbitzu teknikoak barne, hala nola, antigorputzak humanizatzea, antigorputzen arazketa, antigorputzen sekuentziazioa eta antigorputzen baliozkotzea.

Antigorputzen ingeniaritzaren etapa aitzindaria bi teknologiekin lotuta dago:

--ADN birkonbinatzailearen teknologia

--Hibridoma teknologia

Antigorputzen ingeniaritzaren garapen azkarra hiru teknologia garrantzitsurekin lotuta dago:

--Genea klonatzeko teknologia eta polimerasaren kate-erreakzioa

Proteinen adierazpena: proteina birkonbinatzaileak legamia, hagaxka itxurako birusak eta landareak bezalako adierazpen sistemen bidez sortzen dira.

--Ordenagailuz lagundutako egitura-diseinua

Antigorputzen lehen belaunaldia antigorputz kimerikoen ekoizpenerako humanizatu zen, non saguaren antigorputz monoklonalen eskualde aldakorra giza IgG molekulen eskualde konstantearekin lotzen zen. Bigarren belaunaldiko saguaren antigorputz monoklonalaren antigenoa lotzeko eskualdea (CDR) giza IgGra transplantatu zen. CDR eskualdean izan ezik, gainerako antigorputzak ia giza antigorputzak dira, eta ahaleginak egin ziren giza tratamendurako saguaren aurkako antigorputzak (HAMA) erantzunak ez eragiteko.

 

Fagoen bistaratzeko liburutegi bat eraikitzeko, lehen urratsa antigorputzak kodetzen dituzten geneak lortzea da, zeinak animalia immunizatuen B zeluletatik isolatu daitezke (biblioteka immunologikoaren eraikuntza), zuzenean inmunizatu gabeko animalietatik atera daitezke (liburutegiaren eraikuntza naturala), edo baita in vitro muntatu ere antigorputzen gene zatiekin (liburutegi sintetikoa eraikitzea). Ondoren, geneak PCR bidez anplifikatzen dira, plasmidoetan txertatzen dira eta ostalari-sistema egokietan adierazten dira (legamiaren adierazpena (normalean Pichia pastoris), adierazpen prokariotikoa (normalean E. coli), ugaztun-zelulen adierazpena, landare-zelulen adierazpena eta makila-formako birusekin infektatutako intsektu-zelulen adierazpena). Ohikoena E. coli espresio-sistema da, antigorputz sekuentzia kodetzaile espezifiko bat fagoan integratzen duena eta fagoen oskoletako proteinetako bat (pIII edo pVIII) kodetzen duena. Geneen fusioa, Eta bakteriofagoen gainazalean bistaratzen da. Teknologia honen muina fago pantailako liburutegi bat eraikitzea da, eta horrek liburutegi naturalen aurrean abantaila du, lotura espezifikoa izan dezakeelako. Ondoren, antigenoaren espezifikotasuna duten antigorputzak hautaketa-prozesu biologiko baten bidez aztertzen dira, xede-antigenoak finkatzen dira, lotu gabeko fagoak behin eta berriz garbitzen dira eta loturiko fagoak garbitzen dira gehiago aberasteko. Hiru txanda edo gehiago errepikatu ondoren, espezifikotasun handiko eta afinitate handiko antigorputzak isolatzen dira.

3. irudia: Antigorputzen liburutegiaren eraikuntza eta baheketa

DNA birkonbinatzailearen teknologia antigorputz zatiak sortzeko erabil daiteke. Fab antigorputzak hasieran proteasa gastrikoak soilik hidroliza daitezke (Fab ') 2 zatiak sortzeko, eta gero papainak digeritzen ditu Fab zati bana sortzeko. Fv zatia VH eta VLz osatuta dago, eta egonkortasun eskasa dute disulfuro loturarik ez dagoelako. Hori dela eta, VH eta VL 15-20 aminoazidoko peptido labur baten bidez lotzen dira, gutxi gorabehera 25KDa-ko pisu molekularra duen kate bakarreko zati aldakorreko (scFv) antigorputz bat osatzeko.

Camelidae-en (Camel, LIama eta Alpaca) antigorputzen egituraren azterketak argitu du antigorputzek kate astunak baino ez dituztela eta kate arinrik ez, horregatik kate astuneko antigorputzak (hcAb) deitzen zaie. Kate astuneko antigorputzen domeinu aldakorrari domeinu bakarreko antigorputzak edo nanogorputzak edo VHH deitzen zaio, 12-15 kDa-ko tamaina duena. Monomero gisa, ez dute lotura disulfurorik eta oso egonkorrak dira, antigenoekiko oso afinitate handia dute.

5. irudia: Kate Astuneko Antigorputza eta VHH/ Nanobody

Zelularik gabeko adierazpenak DNA naturalaren edo sintetikoaren adierazpena erabiltzen du in vitro proteinen sintesia lortzeko, normalean E. coli adierazpen-sistema erabiliz. Proteinak azkar ekoizten ditu eta zelulen karga metabolikoa eta zitotoxikoa saihesten ditu proteina birkonbinatzaile kopuru handiak in vivo ekoizten dituenean. Sintetizatzeko zailak diren proteinak ere sor ditzake, hala nola, itzulpenaren ondoren aldatzeko zailak direnak edo mintzeko proteinak sintetizatzen dituztenak.