Aptameroen Karakterizazio Analisi Zerbitzua

Alpha Lifetech-ek urte askotan aptameroekin lotutako zerbitzuak eskaintzen ditu, eta gaur egun aptameroen garapen eskema integralak eskain ditzake, hala nola aptameroen sintesia, SELEX baheketa, errendimendu handiko sekuentziazioa eta aptameroen optimizazioa eta karakterizazioa. SELEX metodoaren aptameroak bahetzeko abantailetan oinarrituta, Alpha Lifetech-ek aptameroak bahetzeko metodo gehiago zabaldu ditu.

Aptameroen Karakterizazio Analisiaren Sarrera

Afinitatearen egiaztapena

Aptameroaren afinitate optimizatua aptameroaren lotura-analisi bidezko teknika garrantzitsuen bidez egiaztatu zen. Adibide gisa, Kalorimetria Isotermikoa (ITC), Fluxu Zitometria (FCM) eta Gainazaleko Plasmoi Erresonantzia (SPR), Mikrofluidika eta abar daude. Aptameroaren afinitatea normalean disoziazio-konstantearen (KD) bidez adierazten da, erreakzio itzulgarri batean molekula-disoziazio maila kuantifikatzeko erabiltzen den magnitude fisikoa. Zenbat eta txikiagoa izan KD balioa, orduan eta egonkorragoa da konplexua, hau da, orduan eta afinitate handiagoa; Alderantziz, zenbat eta handiagoa izan KD balioa, orduan eta ezegonkorragoa da konplexua eta orduan eta afinitate ahulagoa. Urrats hau da aptameroaren errendimendua identifikatzeko gakoa, aptameroaren afinitatearen heltzea bermatuz eta aplikazio praktikoetan molekula helburura afinitate eta selektibitate handiz lotu daitekeelako.

1. irudia Aptameroaren afinitatearen heltze prozesua. Erreferentzia iturria:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Funtzioen egiaztapena

Afinitate-egiaztapenaz gain, aptameroaren funtzioa egiaztatu behar da. Horrek barne hartzen du aptameroaren egonkortasuna, espezifikotasuna eta ingurune jakin bateko beste molekulekin dituen elkarrekintzak egiaztatzea. Egiaztapen funtzionalaren emaitzek zuzenean eragingo dute aptameroen balioan ikerketa zientifikoan eta aplikazio industrialean.

Egiaztapen Espezifikoa

Esperimentu lehiakorra: Aptameroak helburu espezifiko bati lotzeko duen gaitasuna ebaluatzen da antzeko beste helburu batzuen aurrean. Aptameroak helburu molekulari espezifikoki lotu badezake beste molekulen interferentziarik gabe, espezifikotasun handia duela adierazten du.

Erreakzio gurutzatuaren esperimentua: Aptameroa helburu erlazionatu edo erlazionatu gabeei lotzen zaie, helburu espezifiko bati bakarrik lotzen zaion ikusteko, eta horrela bere espezifikotasuna egiaztatzeko.

Egonkortasun egiaztapena

Nukleasa degradazioaren esperimentua: Aptameroak nukleasa kontzentrazio desberdinen eraginpean jarri ziren eta haien degradazioa behatu zen. Degradazio maila denbora-puntu desberdinetan alderatuz, aptameroaren antinukleasa degradazio gaitasuna ebaluatu daiteke.

Tenperatura eta denbora egonkortasunaren esperimentua: Aptameroa tenperatura eta denbora baldintza desberdinetan jarri zen bere egitura- eta funtzionaltasun-egonkortasuna behatzeko. Horrek aptameroen biltegiratze eta erabilera baldintza optimoak zehazten laguntzen du.

Jarduera biologikoaren identifikazioa

Metodo egokia normalean azido nukleikoaren aptameroaren aplikazio-helburu espezifikoaren arabera hautatzen da.

(1) Maila molekularreko probak: Biologia molekularreko teknikak erabiltzea, hala nola gel elektroforesia, Western blot, etab., aptameroa molekula helburuarekin konbinatu ondoren sortzen diren konplexuak detektatzeko edo aptameroak molekula helburuaren adierazpen mailan eragindako aldaketak detektatzeko.

(2) Zelula mailako probak: Zelula-kultura teknologia erabiliz, aptameroak zelula dianakin inkubatzen dira zelulen morfologia, ugalketa eta apoptosia bezalako aldaketa biologikoak behatzeko eta aptameroen jarduera biologikoa ebaluatzeko.

(3) Animalia-ereduen probak: Animalia-eredu egokietan, azido nukleikoen aptameroak injekzioz edo sendagaien administrazioz ematen dira, eta animalien adierazle fisiologikoak eta aldaketa patologikoak behatzen dira aptameroen jarduera biologikoa eta segurtasuna in vivo ebaluatzeko.