Antigorputz Monoklonalen Garapen Zerbitzua

Alpha Lifetech Inc.epitopoen iragarpena, peptidoen sintesia, proteinen adierazpena, antigorputz poliklonal edo monoklonalaren ekoizpena eta zelula-kulturatik, aszitis-fluidotik edo serum osotik antigorputzen purifikazioa eman ditzake.

Alpha Lifetech Inc.Bezeroei zelula-lerro egonkor ugari eskaintzen esperientzia du, besteak beste, hibridoma zelulak, genomaren edizioko zelula-lerroak, knockdown zelula-lerroak eta gainespresioko zelula-lerroak. Bezero guztiei zelula-lerro zerbitzu pertsonalizatu aurreratuak eskaintzen saiatzen gara eta gure zerbitzuak frogatuak eta fidagarriak dira.

Antigorputzen Garapen Estrategia

1. Antigenoen diseinua eta prestaketa
Antigeno hauek proteinak, peptidoak edo beste molekula batzuk izan daitezke. Immunogenoak diseinatzeko, antigenoen egituraren, immunologiaren eta banaketa-sistemen ezagutza integratzen duen ikuspegi integrala behar da. Alpha Lifetechek antigenoen diseinu-teknologia du, eta horri esker, behar duten bezeroentzako immunogenoak diseinatu ditzake.
Alpha Lifetech-ek proteina birkonbinatuen produktuak eskaintzen dizkie bezeroei aukeran. Hainbat proteina-adierazpen sistema ditugu, hala nola E. coli adierazpen sistema, legamia adierazpen sistema, bakulobirus-intsektu adierazpen sistema, ugaztunen adierazpen sistema, etab., ikerketarako behar dituzun proteina birkonbinatuak ekoizteko.

2. Animalien txertoa
Alpha Lifetech-ek immunogenoak eman diezazkieke bezeroei, eta saguak, untxiak, ardiak, alpakak, kobaiak, hamsterrak eta abar bezalako animalia immuneak eskuragarri dituzu aukeran.

3. Antigorputz monoklonalak ekoizteko metodoak

●Mab ekoizpena hibridoma teknologiaren bidez
Hibridoma bi zelula motaren fusioaren bidez sortutako zelula hibridoa da, hots, sagu mieloma zelula-lerroaren eta plasma-zelulen (B linfozitoa), non zelula heterozigotoak intereseko antigenoaren aurkako antigorputz jarraituak sor ditzakeen in vitro. Hibridoma zelula-lerro baten ekoizpenak hiru zati ditu: antigenoen diseinua (hapteno, molekula txikiak eta peptidoak), animalien immunizazioa, zelulen fusioa eta klon positiboaren baheketa. Immunizazio-metodologia bereziak erabiliz, zelula-fusioaren eraginkortasun oso altuak lortzen ditugu (1-10 hibridoma mila B zelula bakoitzeko) eta antigorputz-titulu altuak, ondorengo analisi-probetan arrakasta-tasa maximizatuz, hala nola baheketa biokimikoa, in vitro zeluletan oinarritutako analisiak eta animalien azterketak.

●Mab ekoizpena fagoen pantaila teknologiaren bidez
Fagoen bistaratzeak antigorputz monoklonalak sortzeko beste metodo bat eskaintzen du. B linfozitoak animalien odoletik isolatzen dira eta haien mRNA erauzten da. PCR bidez, mRNA hau cDNA bihurtzen da, eta horrek VH eta VL segmentu guztiak anplifikatzen ditu. Segmentu hauek bektore batean klonatzen dira ondoren, normalean kate bakarreko zati aldakor gisa (scFv), bakteriofago baten PIII proteinarekin batera. Ondoren, eraikuntza hau E. coli infektatzeko erabiltzen da, eta horren ondorioz, gutxi gorabehera 10^10 zelula dituen liburutegi bat sortzen da laguntzaile fago batekin inokulatuz. Ondoren, E. coli gai da bere estalkiaren zati gisa VH eta VL segmentuak dituen bakteriofago bat jariatzeko. Ondoren, intereseko antigenoari zuzendutako VH eta VL segmentu espezifikoak hautatu eta E. coli bakteriofagoarekin berriro inokulatzeko erabil daitezke. Plasmidoa duten zelulak isolatu eta sekuentziatu egiten dira ondoren.

4. Fusio-baheketa

●Zelulen fusioa eta hautaketa
Bildutako B zelulak mieloma zelulekin fusionatzen dira, eta zelula horiek minbizi-zelulak dira, eta hauek kulturan mugagabe ugal daitezke. Fusioa normalean polietilen glikolaren (PEG) fusioa bezalako teknika bat erabiliz lortzen da.
Fusioaren ondoren, hibridoma zelulak hibridomak bakarrik bizirauten uzten duen ingurune selektibo batean hazten dira. Inguruneak normalean aminopterina dauka, eta horrek fusionatu gabeko mieloma zelulen hazkuntza eragozten du.

●Baheketa eta atxikimendua
Sortutako hibridoma-zelulak antigeno espezifikoen ekoizpenaren bila aztertzen dira. Horretarako, normalean, entzima-lotutako immunosorbente-analisia (ELISA), Western blot, immunoprezipitazioa eta fluxu-zitometria bezalako teknikak erabiltzen dira.

Behin antigorputza sortzen duten hibridoma-zelulak identifikatuta, klonatu egiten dira zelula berdinen populazio bat sortzeko. Horrek ziurtatzen du hibridoma-zelula bakoitzak sortutako antigorputza berdina dela.

5. Antigorputzen funtzionalitatearen egiaztapena
Alpha Lifetech-ek antigorputzen funtzionalitatearen balidazioa eskaintzen du, hala nola Western blotting, immunohistokimika edo funtzionaltasun-analisiak, antigorputz monoklonalak karakterizatzeko eta antigorputzen espezifikotasuna, afinitatea eta funtzionaltasuna berresteko.

6. Antigorputzen optimizazioa
Kultura-gainjariotik antigorputzen purifikazioa A proteina edo G proteina afinitate-kromatografia bezalako teknikak erabiliz, eta Alpha Lifetech-ek antigorputzen aldaketa-metodoak ere eman ditzake antigorputzen afinitatea hobetzeko.

7. Antigorputzen ekoizpena
Alpha Lifetech-ek hautagai-antigorputzak ebaluatu ditzake errendimendu handiko baheketa-aplikazioetarako eta eskala handiko ekoizpenerako.

maiz egiten diren galderakmaiz egiten diren galderak

Antigorputz monoklonalen garapenari buruzko maiz egiten diren galderak

1

Nola aukeratu fusio hibridoma egokia?

Fusio prozesuan zehar, 10-15 96 putzuko mikrotitulu plaka ereiten dira fusio hibrido nahasketarekin. Plaka bakoitzari HAT-IMDM hautaketa-euskarria ematen zaio eta karbono dioxidozko inkubagailu batean mantentzen da 37 gradu Celsius-tan. Fusioaren ondorengo 9-14 egunetan, hibridoen gainnadanteak aztertzen dira intereseko antigorputz espezifikoaren presentzia detektatzeko.
2

Nola hobetu hautaketaren eraginkortasuna?

Plasma-zelulen eta mieloma-parekoen arteko fusioa ez da %100ean eraginkorra. Baldintza optimoetan eta estimulazio eraginkorrenean ere, zelulen fusioak zelula ez-fluenteen eta konfluenteen nahasketa sortzen du, eta hauek bereizi behar dira. Hautaketa-prozesuaren eraginkortasuna hobetzeko, fusiorako erabilitako mieloma-zelulek ez dute HGPRT, nukleotidoen berreskuratze-bideko entzima gakoa. Ondoren, nahasketa HAT ingurune batean landu zen, non HGPRT entzima zuten zelulak bakarrik ziren bideragarriak, plasma-zeluletatik HGPRT heredatu zuten hibridomak.
3

Nola aztertu hibridoma zelula-lerroak antigorputzen jarduera detektatzeko?

Hibridoen barietateen ebaluazioa urrats erabakigarria da. Normalean, hibridoma, klon eta azpiklonen gainnatzaileen baheketa entzima-immunosorbente saiakuntza (ELISA), Western blot saiakuntza eta fluoreszentziaz aktibatutako zelula sailkapena (FACS) bidez egiten da. Gainnatzaileen baheketa guztia gure laborategian egitea aukeratuko dugu.
4

Eman antigorputzen jardueraren baheketa nola egin behar den azaltzen duten argibide zehatzak?

Probatu beharreko hibridoma-gainjatoek 500 eta 1.440 lagin artekoak izan daitezke, eta 9-14 egunetarako prest egongo dira probatzeko. Hiru eta bost eguneko epean egin dezakegu edo egun berean prest egon gaitezke guztiak, beraz, garrantzitsua da bezeroaren laborategia aste batzuk lehenago prestatuta egotea, aukeratutako bigarren mailako baheketa-analisi espezifikoekin.
5

Zergatik behar dira hibridoma positiboak azpiklonatu?

ELISA bahetze-prozeduraren hasieran putzu positiboak identifikatu ondoren, hibridomak bolumen handiago batera transferitu ziren, hau da, 24 putzuko plaketara, azpiklonazio-prozedura prestatzeko. Hibridomen azpiklonazioa normalean diluzio mugatuko metodo baten bidez egiten da, monoklon egonkorrak isolatzea bermatzeko. Teknikak hibridoma-kulturak diluitu eta 96 putzuko plaketan sakabanatzea dakar, monoklonalitatea lortzeko (zelula bat putzu bakoitzeko). Gutxienez bi diluzio mugatu egin behar dira hibridoma-populazio mistoak garatzeko arriskua murrizteko.
6

Zein dira hibridoma teknologia erabiltzearen onurak antigorputzak aurkitzeko?

Zelula-lerro hibridoak goraipatu egin dira afinitate, egonkortasun eta espezifikotasun handiko antigorputzak modu eraginkorrenean ekoizteko duten gaitasunagatik.