پلت فرم اندازه گیری میل جنسی
بر اساس پلتفرم Octet و Biacore-T2000، Alpha Lifetech می تواند خدمات تعیین میل قابل اعتمادی را ارائه دهد.
با ما تماس بگیرید01
پلت فرم اندازه گیری میل جنسی
بر اساس پلتفرم Octet و Biacore-T2000، Alpha Lifetech می تواند خدمات تعیین میل قابل اعتمادی را ارائه دهد. ما می‌توانیم تعیین میل ترکیبی را برای نمونه‌های متعدد، مانند آنتی‌بادی‌ها، سلول‌ها، پروتئین‌ها، مولکول‌های کوچک و غیره ارائه کنیم. روشهای تعیین میل ترکیبی مختلفی از جمله تشدید پلاسمون سطحی (SPR) و تداخل لایه زیستی (BLI) وجود دارد.
آلفا لایف‌تک دارای یک پلتفرم تعیین میل ترکیبی حرفه‌ای و دقیق است که ELISA را با تعیین میل ترکیبی ترکیب می‌کند و نتایج تعیین میل ترکیبی حرفه‌ای، کارآمد، سریع و دقیق را برای مشتریان در سراسر جهان ارائه می‌کند. ما می‌توانیم دو روش را برای مشتریان ارائه دهیم: تعیین میل ترکیبی سریع و تعیین میل دقیق. تعیین میل ترکیبی سریع یک تعیین تک غلظتی است، در حالی که تعیین میل ترکیبی دقیق می تواند میل ترکیبی غلظت های مختلف را اندازه گیری کند. برای مطالعه برهمکنشهای بین ترکیبات مختلف مولکولی کوچک، پپتیدها، پروتئین‌ها، الیگونوکلئوتیدها و الیگومرها، و همچنین لیپیدها، باکتریوفاژها، ویروس‌ها و سلول‌ها استفاده می‌شود. پلت فرم اندازه گیری میل ترکیبی می تواند پایه ای برای آزمایش و غربالگری داروهای میل ترکیبی، کشف آنتی بادی و تسهیل تحقیقات بعدی ایجاد کند.
مقدمه ای بر Binding Affinity
میل ترکیبی در ارزیابی فعل و انفعالات بین مولکولی، سنجش داروهای میل ترکیبی و غربالگری دارو مهم است. برهمکنشهای بین مولکولی را می‌توان با معادلات توصیف کرد: L + R = LR، که در آن L نشان‌دهنده لیگاندهای آزاد، R نشان‌دهنده گیرنده‌های غیر متصل، و LR نشان‌دهنده کمپلکس‌های لیگاند-گیرنده محدود است. واکنش‌های اتصال، برهمکنشهای بین مولکولی را تعریف می‌کنند، جایی که تبادل دینامیکی بین حالت‌های محدود و غیرمحدود در طول واکنش تا رسیدن به تعادل رخ می‌دهد. این را می توان با دو ثابت سرعت، Kon (ثابت سرعت اتصال) و Koff (ثابت سرعت تفکیک)، واکنش توصیف کرد. مقدار Kd که متقابل ثابت اتصال (Ka) است، Koff/Kon است که یک ثابت مهم برای میل واکنش است. بنابراین، هر چه اتصال بین دو مولکول محکم تر باشد، میل ترکیبی بیشتر است. هر چه مقدار Kd کوچکتر باشد، برعکس. این معادله را می توان به صورت یک منحنی S شکل در یک نمودار نیمه لگاریتمی، با غلظت لیگاند در محور x (در محور مقیاس لگاریتمی) و مرز کسری در محور y نشان داد. خط چین نشان دهنده غلظت لیگاند در Kd (1 نانومولار) از کسر اتصال 0.5 است.
شکل 1: منحنی اتصال سیگموئیدی غلظت های مختلف لیگاند متصل به گیرنده سطح سلول. (منبع مرجع:Hunter SA، کوکران JR. سنجش‌های اتصال سلولی برای تعیین میل ترکیبی برهمکنشهای پروتئین-پروتئین: فناوری‌ها و ملاحظات.)
روشهای تعیین میل جنسی
سنجش میل اتصال الایزا
روش پرکاربرد برای مطالعه میل آنتی بادی مبتنی بر روش الایزا است که با راحتی، سرعت، سادگی، حساسیت بالا و ویژگی قوی مشخص می شود. می تواند از مقدار کمی از معرف ها (یعنی آنتی بادی ها و آنتی ژن ها) استفاده کند و میل آنتی بادی را بدون نیاز به معرف های تصفیه اندازه گیری کند. با تثبیت آنتی ژن روی یک سطح جامد و تشخیص آن با استفاده از یک آنتی بادی اولیه، آنتی بادی ثانویه نشان‌دار شده با آنتی‌بادی اولیه واکنش می‌دهد تا داده‌ها را در دستگاه سنجش ایمنی مرتبط با آنزیم (ELISA) بخواند و تجزیه و تحلیل کند.
شکل 2: سنجش های الایزا مانند برای ارزیابی اتصال پپتیدهای طراحی شده به اهدافشان. (منبع مرجع:حاجی کریملو، مریم، و همکاران، 2022. یک رویکرد محاسباتی برای طراحی سریع پپتیدهایی که پروتئین سطحی SARS-CoV-2 را شناسایی می کنند.)
سنجش میل اتصال رزونانس پلاسمون سطحی (SPR).
فناوری SPR عمدتاً تغییرات ضریب شکست را تشخیص می دهد. با کمک پدیده‌های نوری سنتی و پدیده رزونانس نور، می‌توان یک فناوری آنالیز حسی زیستی برای برهمکنش بین مولکول‌های زیستی برای تشخیص تعامل بین لیگاندها و آنالیت‌ها بر روی تراشه‌های حسگر زیستی ساخت. سیگنال های خاصی از اتصال و تعامل بین زیست مولکول ها را می توان با نظارت بر تغییرات دینامیکی در زوایای SPR در طی واکنش های بیولوژیکی به دست آورد.
شکل 3: آنالیز رزونانس پلاسمون سطحی (SPR) اتصال H10/AGR2. (منبع مرجع:گاری، کارولینا، و همکاران، 2018. شناسایی، خصوصیات و کاربرد یک پپتید جدید در برابر همولوگ گرادیان قدامی 2 (AGR2).)
سنجش میل پیوندی تداخل لایه زیستی (BLI).
فناوری تداخل بیوفیلم یک تکنیک تشخیص نوری بدون برچسب و نظارت بر زمان واقعی است که عمدتاً برای تجزیه و تحلیل کمی جامع برهمکنشهای بین مولکولی و تعیین غلظت پروتئین استفاده می‌شود. این فناوری از یک حسگر زیستی مبتنی بر پروب برای تشخیص مستقیم تغییرات در ضخامت بیوفیلم روی نمونه استفاده می کند. با تشخیص تغییرات جابجایی طیف تداخل، اتصال و تفکیک بین مولکول‌های زیستی که بر روی سطح حسگر برهمکنش دارند، شناسایی می‌شود و جابجایی بلادرنگ (nm) طیف تداخل نمایش داده می‌شود.
شکل 4: سنجش تداخل سنجی بیلایه (BLI) بین aLDRG و کیتینولیگوساکاریدها. (منبع مرجع:لی، بینگ، 2023. نشانه‌های رونویسی مقایسه‌ای بین ریزومورف‌ها و هیف‌های Armillaria sp. 541 شرکت در همزیستی قارچ با تاکید بر دامنه های LysM.)
مقایسه فناوری BLI و SPR
| نام فناوری | BLI (تداخل سنجی لایه زیستی) | SPR (رزونانس پلاسمون سطحی) |
|---|---|---|
| اصل | تغییرات در الگوی تداخل نور منعکس شده بر روی سطح حسگر را اندازه‌گیری می‌کند و فعل و انفعالات مولکولی را از طریق تغییر در ضخامت نوری روی لایه زیستی تشخیص می‌دهد. این یک منحنی اتصال بلادرنگ (اندازه گیری مستقیم) را فراهم می کند. | فعل و انفعالات مولکولی را با تشخیص تغییرات سیگنال در ضریب شکست در نزدیکی سطح تراشه حسگر اندازه‌گیری می‌کند (زمانی که نور با رابط طلا و شیشه تعامل می‌کند و باعث تغییر در ضریب شکست می‌شود رخ می‌دهد). داده ها به صورت تغییرات در زاویه رزونانس (اندازه گیری غیر مستقیم) منعکس می شوند. |
| سازنده | سارتوریوس | جنرال الکتریک |
| ابزار | حسگرهای زیستی فورت بیو | ابزار SPR را باز کنید |
| سیستم | ForteBio Octet System (برای تحلیل برهمکنش مولکولی) | TraceDrawer (توسعه یافته توسط Ridgeview Instruments، سوئد) |
| مزایا | 1. سازگاری گسترده نمونه، پایداری عالی، به ویژه برای تشخیص مولکول های کوچک (الزامات خاص برای خلوص نمونه و شرایط بافر کمتر سختگیرانه است). تراشه های SSA برای مطالعات اتصال مقرون به صرفه هستند. 2. توان عملیاتی سریعتر و زمانهای آزمایشی کوتاهتر در مقایسه با SPR. | 1. سابقه توسعه طولانی تر، ارائه حساسیت بالاتر در مقایسه با BLI. 2. دقت و استحکام بیشتر برای کاربردهای خاص، مانند شناسایی پروتئین‌های کمیاب یا ارزشمند با داده‌های میل و ویژگی بالاتر. |
| معایب | 1. دقت داده در مقایسه با SPR کمی کمتر است. 2. به نگهداری دقیق ابزار نیاز دارد. 3. هزینه تراشه SSA نسبتا بالا است. | 1. شرایط بافر برای تشخیص مولکول های بسیار کوچک می تواند سخت باشد و خطر شکست تشخیص را افزایش دهد. 2. تراشه ها به طور کلی گران تر از چیپ های استفاده شده در BLI هستند. 3. تبخیر نمونه در طول آزمایش های طولانی می تواند یک مسئله باشد. |
| نوع تراشه | تراشه SSA | تراشه NTA |
محدوده اندازه گیری میل جنسی
تعیین میل ترکیبی می تواند شامل آنتی ژن-آنتی بادی (آنتی ژن-آنتی بادی قوی، آنتی ژن-آنتی بادی ضعیف)، پروتئین-پروتئین، پروتئین-پپتید، پروتئین-مولکول کوچک و پروتئین DNA/RNA (آپتامر) باشد. هنگام اندازه گیری KD، دانستن یکی از غلظت های مولی ضروری است. وقتی مولکول های کوچک به هم متصل می شوند، یک وزن مولکولی نمی تواند کمتر از 150 دالتون باشد.
| تایپ کنید | دامنه | موارد احتیاط |
|---|---|---|
| 1. آنتی ژن-آنتی بادی | 10^-6 تا 10^-12 | مقادیر Kd اکثر آنتی بادی ها در محدوده 10^-6-10^-7 تا 10^-9 است. به طور کلی اعتقاد بر این است که آنتی بادی های میل ترکیبی بالا در محدوده 10^-9 هستند، در حالی که میل ترکیبی بالا هستند. آنتی بادی ها در محدوده 10^-12 هستند. |
| 2. پروتئین - مولکول های کوچک | 10^-4 تا 10^-5 | KD مولکول ها و پروتئین های کوچک بین 10^-4 و 10^-5 است، در حالی که 10^-3 و 10^-7 طبیعی هستند و نمی توانند به 10^-10 برسند. مولکول های کوچک کووالانسی ممکن است به 10^-10 برسند. |
| 3. آویدین بیوتین | 10^-14 | Affinity می تواند به راحتی تحت اتصال غیر اختصاصی قرار گیرد و می توان از استرپتاویدین یا میل ترکیبی دی گلیکوزیله استفاده کرد. |
| 4. DNA-پروتئین | 10^-8 تا 10^-10 | DNA با کیفیت بالا و کامل؛ مراقب باشید تا از تأثیر الکتروفورز جلوگیری کنید. |
الزامات نمونه برای تعیین میل ترکیبی
| نمونه | الزامات |
|---|---|
| 1. نمونه مولکول بزرگ | پروتئین > 50 میکروگرم، آنتی بادی > 100 میکروگرم، پروتئین بیوتینیله > 200 میکروگرم. پروتئین بدون بیوتین > 2 میلی گرم، خلوص مورد نیاز > 90 درصد، محلول بافر: PBS، HEPBS. نمی تواند حاوی گروه های ایمیدازول باشد. کنترل کیفیت مورد نیاز است. |
| 2. نمونه مولکولی کوچک | مقدار> 1 میلی گرم، پودر یا مایع، مایع باید در آب یا DMSO محلول باشد. سعی کنید حاوی گلیسرول، ایمیدازول، ترهالوز یا سایر نمک ها نباشید. سعی کنید از معرف های دارای گروه های آمینه مانند Tris در بافر، به طور کلی PBS، HEPPS و غیره بدون معرف های آلی اجتناب کنید. |
تجزیه و تحلیل چند نمونه
آلفا لایف‌تک می‌تواند سنجش میل ترکیبی را برای نمونه‌های مختلف، از جمله آنتی‌بادی‌ها، سلول‌ها، پروتئین‌ها و سایر مولکول‌های زیستی ارائه دهد.
پلت فرم فناوری بالغ
ما فن‌آوری‌های پیشرفته‌ای مانند سنجش اتصال spr، سنجش اتصال bli، و سنجش اتصال الایزا داریم.
انتخاب پروژه انعطاف پذیر
مشتریان می توانند بین تعیین میل ترکیبی سریع و تعیین میل دقیق انتخاب کنند.
نتایج با دقت بالا
تیم فنی حرفه ای ما می تواند نتایج کارآمد، دقیق و قابل اعتماد تعیین میل را تضمین کند.
مطالعه موردیمورد
آنتی بادی سنجش میل ترکیبی سریع BLI و سنجش میل ترکیبی آپتامر
آپتامرهای بیوتینیله شده را با ویژگی پروب SA گرفته و آنها را حل کنید. نمونه را تا غلظت ثابت حل و رقیق کنید، آپتامرهای هدف 1-5 مخصوص پروب را جامد کنید و پس از اشباع سیگنال، به نمونه متصل شوید. سپس آنها را به یک بشقاب 96 چاهی اضافه کنید.
شکل 5: توزیع موقعیت های تشخیص برای نمونه های صفحه 96 چاهی. B به بافری اشاره دارد که برای تعادل و تفکیک سنسورها استفاده می شود. L: بیوتین هدف 1-5 آپتامر، 221: نمونه.
برای اطمینان از پایداری و دقت داده ها به حفاری توجه کنید و برنامه مربوطه را برای به دست آوردن نتایج تنظیم کنید:
شکل 6: نمودار برازش متقابل بین هدف 1، 2 و 3 آپتامرها و نمونه ها. (CH 1 \ 3 \ 5 نشان دهنده سیگنال و داده های تعامل بین کاوشگر آپتامر هدف 1 \ 2 \ 3 جامد شده و نمونه است.)
شکل 7: نمودار برازش متقابل بین آپتامرهای هدف 4 و 5 و نمونه ها. (CH 1 \ 3 نشان دهنده سیگنال و داده های تعامل بین کاوشگر آپتامر هدف 4 \ 5 جامد شده و نمونه است.)
نتایج نشان می دهد
نتایج زیر به دست آمد: میل ترکیبی آداپتور Target 1 به نمونه پس از برازش 9.41 ^ -8 بود. تمایل آداپتور Target 2 به نمونه پس از اتصال 8.32 ^ -8 است. تمایل آداپتور Target 3 به نمونه پس از اتصال 8.64 ^ -8 است. تمایل آداپتور Target 4 به نمونه پس از اتصال 3.70 ^ -8 است. تمایل آداپتور Target 5 به نمونه پس از اتصال 3.01 ^ -8 است.
اگر سوالی دارید، لطفا در هر زمان با ما تماس بگیرید.
Leave Your Message
16-07-2018 
0102