پلتفرم ایمنسازی حیوانات
پلتفرم ایمنسازی حیوانات عمدتاً حیوانات خانواده شتر (آلپاکا لیاما و شتر) را ایمنسازی میکند و پایه و اساس تولید نانوبادی را بنا مینهد.
تماس با ما01
پلتفرم ایمنسازی حیوانات
منابع حیوانی آلفا لایفتک مشخص هستند، دارای مجوزهای بازرسی و قرنطینه، پیشینه ژنتیکی روشن، فراوانی ایمنسازی واضح و سوابق دقیق فواصل ایمنسازی هستند و خدمات مناسبی را برای تولید آنتیبادی ارائه میدهند. این شرکت عمدتاً حیوانات خانواده شتر (آلپاکا لیاما و شتر) را ایمنسازی میکند و پایه و اساس تولید نانوبادی را بنا مینهد. علاوه بر این، میتواند حیوانات معمولی (مانند خرگوشهای سفید نیوزیلندی، موشها و سایر حیوانات) را نیز مطابق با فراوانی ایمنسازی مورد نیاز و الزامات ایمنیزایی مشتریان ایمنسازی کند، آنها را استخراج و در PBMCها جداسازی کند و از آنها برای آزمایشهای بعدی (مانند آنتیبادی مونوکلونال، توسعه آنتیبادی پلیکلونال و غیره) استفاده کند. مشتریان میتوانند ایمونوژنهای خود را تهیه کنند و ما کنترل کیفیت دقیقی روی آنها انجام خواهیم داد. اگر مشتریان ایمونوژنهای ویروسی تهیه کنند، باید غیرفعال شوند و ما آزمایش غیرفعالسازی را برای اطمینان از ایمنی انجام خواهیم داد. در عین حال، میتوانیم ایمونوژنهای مربوطه را نیز بر اساس نیاز مشتری سفارشی کنیم.
مقدمهای بر ایمنسازی حیوانات
هنگام تولید آنتیبادیهای مشتقشده از حیوانات مانند آنتیبادیهای مونوکلونال، آنتیبادیهای پلیکلونال و نانوبادیها، اولین قدم ایمنسازی حیوانات و به دست آوردن سلولهای B، آنتیبادیها یا PBMCهای مربوطه برای آمادهسازی جهت تولید بیشتر آنتیبادی، ترویج تحقیقات علمی پایه، توسعه ابزارهای تشخیصی بالینی و تسهیل کشف و توسعه داروهای جدید است. شترها، آلپاکاها، لیاماها و سایر شترهای خانواده شترسانان میتوانند از طریق جمعآوری خون ایمنی و استخراج PBMCها، کتابخانههای نانوبادی (آنتیبادی تک دامنه) تولید کنند. خرگوشها و سایر حیوانات را میتوان ایمنسازی کرد و آنتیبادیها را از بدن آنها استخراج کرد. پس از خالصسازی، میتوان از آنها برای تولید آنتیبادیهای پلیکلونال استفاده کرد. موشها، رتها و غیره را میتوان با ترکیب سلولهای B استخراجشده از سیستم ایمنی با سلولهای میلوما برای تولید آنتیبادیهای مونوکلونال استفاده کرد. قبل از ایمنسازی، باید به اصول 3R (جایگزینی، کاهش، اصلاح) توجه شود که میتواند تعداد حیوانات مورد استفاده را به حداقل لازم کاهش دهد، روشهای تجربی را بهبود بخشد و رنج حیوانات را به حداقل برساند. طراحی آزمایش مناسب، انتخاب آنتیبادیهای مناسب و روشهای اعتبارسنجی دقیق نیز باید رعایت شود.
طبقهبندی ایمونوژنها - تولید نانوبادی
| انواع ایمونوژنها | مثال | آماده سازی ایمونوژن | یادداشتها |
|---|---|---|---|
| ایمونوژنهای پروتئینی | آنزیمها، پروتئینها، سموم باکتریایی و سایر مواد | سیستمهای بیان پروتئین مختلف را انتخاب کنید: E. coli، مخمر، سلولهای حشرات، سلولهای پستانداران و سیستم بدون سلول | به عواملی مانند دما، زمان، pH و اجسام انکلوزیونی که بر بیان پروتئین تأثیر میگذارند، توجه کنید. |
| ایمونوژنهای اسید نوکلئیک | دیانای، آرانای | ایمونوژن DNA: ساخت DNA پلاسمید، کلون کردن ناقلهای بیان مناسب برای ژنهای هدف، کشت سلولها برای تکثیر DNA پلاسمید و استخراج DNA پلاسمید با خلوص بالا ایمونوژن RNA: نیاز به افزودن ساختار کلاه و دم PolyA برای جلوگیری از تخریب | هنگام تهیه ایمونوژنهای DNA باید به سلولهای میزبان مناسب توجه شود و هنگام تهیه ایمونوژنهای RNA باید به جلوگیری از تخریب RNA توجه شود. |
| ایمونوژنهای ویروسی | واکسن غیرفعال شده با ویروس کامل، واکسن زیر واحدی، واکسن ناقل ویروسی (آدنوویروس، لنتی ویروس و غیره)، واکسن mRAN. | هنگام تهیه واکسن غیرفعال شده با ویروس کامل، ابتدا ویروس برای افزایش ایمنی غیرفعال میشود. از آزمایش سمیت برای تعیین کامل بودن غیرفعالسازی استفاده میشود. واکسنهای زیر واحدی فقط به پروتئینهای سطحی ویروس به عنوان آنتیژن نیاز دارند و باید اثربخشی ایمنی را در نظر بگیرند. | برای ایجاد اثرات ایمنی، باید مواد کمکی اضافه شود، باید به ویروسی که باید غیرفعال شود توجه شود، تیترهای مناسب ویروس برای اطمینان از اثرات ایمنی مورد نیاز است و ایمنی فرآیند آمادهسازی باید به شدت کنترل شود. |
فرآیند یا جدول زمانی ایمنسازی حیوانات
انتخاب حیوان و تهیه آنتی ژن
انتخاب حیوانات: آلپاکاهایی با سن مناسب و فیزیک بدنی سالم را از گروههای سالم انتخاب کنید و آزمایش خون و غربالگری بیماری انجام دهید تا از عدم وجود بیماریهای عفونی یا سایر مشکلات سلامتی اطمینان حاصل شود.
آمادهسازی ایمونوژن: ایمونوژنها کلید القای پاسخهای ایمنی هستند و نیاز به انتخاب پروتئینها، پپتیدها یا سایر مواد مناسب بر اساس الزامات آنتیبادی هدف دارند.
یک آلپاکا میتواند به طور همزمان با ۱ تا ۳ آنتیژن ایمن شود، با مقدار کل آنتیژن ۱ تا ۲ میلیگرم در هر ایمنسازی و حجم کمتر از ۲ میلیلیتر. قبل از ایمنسازی، آنتیژن و ادجوانت به نسبت ۱:۱ امولسیون میشوند تا مخلوطی یکنواخت تشکیل دهند که در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری میشود.
آلپاکای ایمونولوژیک
شماره گوش خالی آلپاکا را ثبت کنید و آزمایش ایمنسازی را شروع کنید. به غدد لنفاوی نزدیک گردن آلپاکا در هر دو طرف تزریق کنید، به طوری که در هر طرف ۲ نقطه وجود داشته باشد و تقریباً ۰.۴ میلیلیتر آنتیژن امولسیون شده در هر نقطه تزریق شود. پس از ایمنسازی، به مدت نیم ساعت مشاهده کنید تا تأیید شود که آلپاکا هیچ علامت ناراحتی ندارد. ایمنسازی باید هر ۲ هفته یکبار و حداقل ۴ بار انجام شود.
جمعآوری خون
پس از ۴ نوبت واکسیناسیون به مدت ۵ تا ۷ روز، ۵۰ میلیلیتر خون از ورید گردن آلپاکا جمعآوری کنید.
جداسازی سرم
نمونههای خون برای ارزیابی ایمنی قبل از هر ایمنسازی آنتیژن، با 5 میلیلیتر خون در هر بار گرفته میشوند؛ در همان روز، خون به مدت 30 دقیقه با استفاده از سانتریفیوژ از پیش خنک شده 25 درجه سانتیگراد با سرعت 400 xg سانتریفیوژ شد. لایه بالایی سرم جدا شده و برای آزمایش تیتر آنتیبادی بعدی ذخیره میشود.
لنفوسیتهای جداگانه
ابتدا ۱۵ میلیلیتر محلول جداسازی سلول اضافه کنید، سپس به آرامی ۱۵ میلیلیتر خون را به یک لوله سانتریفیوژ ۵۰ میلیلیتری اضافه کنید. هنگام اضافه کردن خون مراقب باشید و آهسته عمل کنید تا از مخلوط شدن خون و محلول جداسازی جلوگیری شود. سانتریفیوژ را از قبل در دمای ۲۵ درجه سانتیگراد سرد کنید، به مدت ۳۰ دقیقه در ۴۰۰ xg سانتریفیوژ کنید و سرم بالایی را در یک لوله سانتریفیوژ جدید در دمای ۸۰- درجه سانتیگراد نگهداری کنید. با استفاده از پیپت، سلولهای ایمنی لایه بالایی پنبهای شکل میانی را در یک لوله سانتریفیوژ ۵۰ میلیلیتری جدید آسپیره کنید. ۱۰ میلیلیتر بافر PBS در دمای اتاق به هر لوله اضافه کنید، به مدت ۲۰ دقیقه در دمای ۲۵ درجه سانتیگراد و ۴۰۰ xg سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را بردارید، ۵ میلیلیتر بافر PBS در دمای اتاق به هر لوله اضافه کنید، به آرامی خوب مخلوط کنید، تعداد سلولها را با استفاده از هموسیتومتر محاسبه کنید و سپس به مدت ۲۰ دقیقه در دمای ۲۵ درجه سانتیگراد و ۴۰۰ xg سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را برداشته و لنفوسیتهای بهدستآمده توسط RNAiso Plus را بر اساس تعداد سلولها حل کنید تا 10^7 در هر میلیلیتر لیزات سلولی بهدست آید که در دمای -80 درجه سانتیگراد نگهداری میشود.
شکل ۱: نمایش شماتیک استراتژیهای مختلف کشف آنتیبادی و مراحل آزمایشی مربوطه. (منبع شکل: لاستسن، آندریاس اچ. و همکاران.)
مشتریان کنترل کیفیت دقیق ایمونوژنها را ارائه میدهند
| انواع ایمونوژنها | مورد نیاز | روش کنترل کیفیت |
|---|---|---|
| نمونههای پپتید/مولکول کوچک | شرایط انحلال (عمدتاً بسته به اینکه آیا فاژها را غیرفعال میکنند یا خیر)، ساختار مولکولی/توالی پپتیدی، گزارش سنتز (HPLC/MS/HNMR) | تشخیص HPLC/MS |
| نمونههای پروتئین | SDS-PAGE/WB، شرایط آمادهسازی، بافر، اطلاعات برچسب، مقدار کل (20-50 میکروگرم)، غلظت، خلوص و غیره | SDS-PAGE/WB |
| نمونههای سلولی | نوع سلول (سلولهای اولیه/سلولهای ویرایش ژنی شده)، شکل سلول (تازه/منجمد شده، ذوب شده)، نوع رشد (چسبنده/معلق)، محیط کشت مورد نیاز، تعداد سلولهای ارائه شده، تعداد سلولهای ارائه شده، سلولهای ویرایش ژنی شده برای اطمینان از بیان پایدار اهداف غربالگری (آنتیبادی اولیه مربوط به مشتری)، سلولهای منجمد شده، ذوب شده برای تعیین میزان بازیابی | عمدتاً سلولهای ویرایششده ژنی را هدف قرار میدهد، با استفاده از آنتیبادیهای اولیه تأمینشده توسط مشتری برای شناسایی بیان هدف به روش ELISA (شرکت ما آنتیبادیهای ثانویه HRP را ارائه میدهد)، تشخیص فلوسایتومتری (شرکت ما میتواند آنتیبادیهای ثانویه فلورسنت را ارائه دهد). |
-
کاربردهای ایمنی حیوانات چیست؟
+آنتیبادیهای پلیکلونال را میتوان با ایمنسازی حیوانات تولید کرد، آنتیبادیهای مونوکلونال را میتوان با ادغام سلولهای B با سلولهای میلوما تولید کرد، و PBMCها را میتوان از منابع شتر (آلپاکا، شتر، آلپاکا و غیره) استخراج کرد تا اشکال مختلف قطعات آنتیبادی مانند نانوبادیها، قطعات Fab، قطعات آنتیبادی scFv و غیره تولید شود. -
اقدامات احتیاطی برای مصونیت حیوانات چیست؟
+برای تولید نانوآنتیبادیها برای حیوانات مشتقشده از شتر، 5 تا 6 نوبت ایمنسازی مورد نیاز است. نمونههای خون باید قبل از ایمنسازی به عنوان کنترل جمعآوری شوند و بین هر ایمنسازی 2 هفته فاصله باشد. پس از چهارمین ایمنسازی، خون مثبت و خون منفی ایمننشده باید برای آزمایش الایزا جمعآوری شوند تا تیتر تعیین شود. اگر تیتر کمتر از 10 به توان 6 باشد، تعداد ایمنسازیها باید افزایش یابد تا تیتر به سطح مناسبی برسد. برای سایر ایمنسازیهای حیوانی مانند ایمنسازی خرگوش (سطح بهینه یا رایج آنتیژن پروتئینی برای ایمنسازی خرگوش ۵۰ تا ۱۰۰۰ میکروگرم است)، ایمنسازی موش (سطح بهینه یا رایج آنتیژن پروتئینی برای ایمنسازی موش ۵ تا ۵۰ میکروگرم است که در صورت سلول بودن به ۱۰ به توان ۶ سلول و برای اسید نوکلئیک یا کربوهیدراتها به ۱۰ تا ۵۰ میکروگرم نیاز دارد)، ایمنسازی بز (سطح بهینه یا رایج آنتیژن پروتئینی برای ایمنسازی بز ۲۵۰ تا ۵۰۰۰ میکروگرم است) و غیره، باید به دوز، ایمنی و اثربخشی ایمونوژنها توجه شود. -
چگونه حیوانات ایمن را انتخاب کنیم؟
+بسته به نوع آنتیبادی مورد نیاز مشتری، اگر نیاز به تولید نانوبادی یا سایر قطعات آنتیبادی دارید، میتوانید حیوانات مشتق شده از شتر (شتر، آلپاکا، آلپاکا) را برای ایمنسازی انتخاب کنید. اگر نیاز به تولید آنتیبادیهای مونوکلونال یا پلیکلونال دارید، باید گونه مربوطه را بر اساس مقدار سرم، آنتیژن و منبع آنتیژن انتخاب کنید. حداکثر مقدار سرم برای خرگوشها ۵۰۰ میلیلیتر است که به مقدار کمی آنتیژن نیاز دارد و انتخاب اصلی برای تولید آنتیبادیهای پلیکلونال است. حداکثر مقدار سرم برای موشها ۲ میلیلیتر و حداکثر مقدار سرم برای موشهای صحرایی ۲۰ میلیلیتر است که معمولاً انتخاب بهینه برای آنتیبادیهای مونوکلونال است. آنتیبادیهای تولید شده توسط بز میل ترکیبی بالایی دارند و آلفا لایفتک میتواند یک برنامه ایمنسازی اختصاصی را مطابق با نیازهای شما سفارشی کند. -
آیا لازم است آنتیژنها همراه با ادجوانتها استفاده شوند؟ چگونه انتخاب کنیم؟
+دو نوع ادجوانت وجود دارد: پایه روغنی و پایه آبی. استفاده معقول از ادجوانتها برای القای پاسخهای قوی آنتیبادی به آنتیژنهای محلول بسیار مهم است. رهایش پایدار ادجوانتها به این معنی است که میتوان از دوزهای کمتری از آنتیژنها استفاده کرد و پاسخهای آنتیبادی ماندگارتر هستند. اولین تزریق باید همراه با یک ادجوانت استفاده شود. معمولاً توصیه میشود زمانی که مقدار ایمونوژن کم است، از ادجوانت فروند استفاده شود. -
اقدامات احتیاطی برای ایمن سازی آلپاکا؟
+(1) انتخاب آلپاکا و آنتیژن ایمنی، کلید ایمنسازی موفق است. انتخاب شتر با جثه متناسب توصیه نمیشود. خلوص و ترکیب صحیح آنتیژنهای ایمنی برای غربالگری آنتیبادیهای مناسب برای کاربردهای بعدی پس از ایمنسازی با آلپاکا بسیار مهم است. خلوص آنتیژنهای پروتئینی عموماً کمتر از 90٪ نیست.(2) جداسازی لنفوسیتها: جداسازی به موقع سلولها میتواند به طور موثری از همولیز پس از جمعآوری خون جلوگیری کند تا بهترین اثر جداسازی حاصل شود.(3) چرخه ایمنی میتواند بر پاسخ ایمنی تأثیر بگذارد: یک فاصله ایمنی 1-2 هفتهای به آلپاکاها اجازه میدهد تا پاسخ ایمنی خوبی به اکثر آنتیژنها داشته باشند.
کمکی توسعهیافته به طور مستقل
فرمول منحصر به فرد کمکی ما برای سیستم ایمنی آلپاکا بهینه شده است و قدرت و اختصاصیت بالاتری نسبت به کمکیهای سنتی ارائه میدهد.
تحویل واکسناستاندارد
ما قول میدهیم که ایمنسازی را در مدت زمان مشخصشده تکمیل کنیم، سرم با تیتر بالا ارائه دهیم و هر مرحله را از طریق گزارشهای دقیق ثبت کنیم.
کنترل کیفیت پروژه
هر پروژه تحت فرآیندهای کنترل کیفیت سختگیرانهای قرار میگیرد تا از تحویل آنتیبادیهایی که استانداردهای بالا را رعایت میکنند به مشتریان اطمینان حاصل شود.
به وضوحآلپاکاپیشینه
ما جمعیت سالمی از آلپاکا داریم که از برنامههای مختلف واکسیناسیون پشتیبانی میکنند.
اگر سوالی دارید، لطفا در هر زمانی با ما تماس بگیرید.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102