خدمات بلوغ میل آنتی بادی

شرکت آلفا لایف تکمی تواند خدمات بلوغ میل آنتی بادی را با استفاده از فناوری های جهش و انتخاب ارائه دهد. ما معمولاً از scFv به عنوان فرمت آنتی بادی در فرآیندهای خدمات بلوغ میل ترکیبی و یک سیستم فاژمید نمایشی تک ظرفیتی استفاده می کنیم که برای کاهش اثرات علاقه در طول غربالگری اتصال آنتی ژن استفاده شده است. تیم حرفه ای ما می تواند خدمات بلوغ میل ترکیبی را برای آنتی بادی های تک دامنه نیز ارائه دهد.

شرکت آلفا لایف تکمفتخر است که خدمات جامعی را برای رفع نیازهای متنوع مشتریان جهانی ارائه می دهد. هدف ما درک و برآورده کردن خواسته های مشتریان مختلف و کمک به مشکلات آینده و ظهور در کار تحقیقاتی است.

بلوغ میل جنسی چیست؟

بلوغ میل ترکیبی فرآیندی است که طی آن آنتی‌بادی‌ها تحت جهش‌های مکرر قرار می‌گیرند و انتخاب می‌شوند تا تمایل خود را به آنتی‌ژن‌های خاص افزایش دهند. سلول‌های B که عمدتاً در مرکز زایایی اندام‌های لنفاوی ثانویه رخ می‌دهند، تحت تأثیر سلول‌های T و سلول‌های دندریتیک فولیکولی تحت هیپرجهش سوماتیک و انتخاب قرار می‌گیرند.
در طی فرآیند بلوغ میل ترکیبی، سلول‌های B با گیرنده‌های ایمونوگلوبولین سطحی با میل ترکیبی کم، در اثر برخورد آنتی‌ژن فعال می‌شوند و تحت تکثیر و تمایز قرار می‌گیرند. از طریق بلوغ میل ترکیبی هیپرجهش سوماتیک، جایگزینی تصادفی نوکلئوتید در ناحیه متغیر ژن‌های ایمونوگلوبولین رخ می‌دهد که منجر به تولید انواع مختلف آنتی‌بادی می‌شود. پس از هیپرجهش سوماتیک، انتخاب مبتنی بر آنتی ژن بر روی سلول های B با گیرنده های ایمونوگلوبولین جهش یافته انجام می شود. سلول‌های B که آنتی‌بادی‌هایی با میل ترکیبی آنتی ژنی افزایش یافته تولید می‌کنند ترجیحاً حفظ می‌شوند و اجازه تکثیر داده می‌شوند، در حالی که سلول‌های B با میل ترکیبی کاهش‌یافته یا بدون تغییر تحت آپوپتوز قرار می‌گیرند. این فرآیند تکراری جهش و انتخاب منجر به تولید کلون‌های سلول B می‌شود که آنتی‌بادی‌هایی با میل ترکیبی به تدریج برای آنتی‌ژن تولید می‌کنند.

خدمات بلوغ میل آنتی بادی

مزایای اصلی روش‌های مبتنی بر PCR این است که جهش‌ها دقیقاً بر روی قطعه تقویت‌شده هدف قرار می‌گیرند. میزان خطا به راحتی قابل کنترل است و این روش سریع و آسان تنظیم می شود و از مواد شیمیایی خطرناک استفاده نمی کند. به خوبی شناخته شده است که Taq DNA پلیمراز DNA را با وفاداری پایین تکرار می کند، اساساً به دلیل عدم وجود فعالیت تصحیح 3' تا 5'.آلفا لایف تکپلتفرم مهندسی آنتی بادی از یک رویکرد PCR مستعد خطا برای جهش در مناطق عمدتاً CDR در طول ساخت و ساز زیر کتابخانه استفاده می کند. و اغلب ما جهش‌هایی را در موقعیت‌های کاملاً تصادفی در کل قطعات VH و VL ایجاد می‌کنیم تا تنوع ژنتیکی زیرکتابخانه را افزایش دهیم. پس از ساخت یک کتابخانه ژن آنتی‌بادی جهش‌یافته توسط PCR مستعد خطا، انتخاب انواع با میل ترکیبی بالا (میل ترکیبی آنتی‌بادی‌های scFv می‌تواند به 10^8 - 10^10 M برسد) یا با پانینگ در محلول یا روی آنتی‌ژن بی‌حرکت با شرایط شستشو بهینه‌سازی شده برای انتخاب وابسته به نرخ غیرفعال انجام می‌شود.
  
دانشمندان درشرکت آلفا لایف تکاز سویه های mutator Escherichia coli mutAD5TM به عنوان یکی از چندین استراتژی جهش برای معرفی جهش های تصادفی، و در نتیجه اصلاح میل ترکیبی و بیان قطعات آنتی بادی نوترکیب استفاده کنید. شرایط انتخاب را می توان برای قطعات آنتی بادی با افزایش سطح تولید اصلاح کرد. شرایط رشد در سلول های جهش دهنده اشرشیاکلی را می توان برای معرفی یک جهش نقطه تصادفی واحد در هر کیلوباز DNA، تقریباً معادل یک تغییر کدون در هر قطعه scFv تنظیم کرد. پس از چندین چرخه جهش، نمایش و انتخاب، می‌توانیم ثابت میل را از 10^5 - 10^6 M به 10^8 - 10^10 M بهبود دهیم.

بهبود استراتژی های بلوغ میل جنسی

موقعیت‌های خاصی از آنتی‌بادی‌ها را می‌توان با تنوع تعریف‌شده تصادفی کرد (مانند تصادفی‌سازی کامل با تمام 20 اسید آمینه یا تصادفی‌سازی تصادفی با اسیدهای آمینه انتخابی در درصدهای ثابت) برای بهبود میل ترکیبی. ما دو استراتژی برای بهبود میل آنتی‌بادی داریم: اول، جهش‌ها در موقعیت‌های محدود در مناطق تعیین‌کننده مکمل (CDRs) توسط جهش‌زایی به‌منظور مکان معرفی می‌شوند. دوم، جهش‌ها با جهش‌زایی تصادفی به کل مناطق کدکننده V وارد می‌شوند. با استفاده از این دو روش، توالی‌های اسید آمینه حفاظت‌شده یا کل ناحیه چارچوب آنتی‌بادی با اسیدهای آمینه دیگری جایگزین می‌شوند، که با فناوری‌های اسکن کتابخانه پپتیدی ما ترکیب می‌شوند، می‌توانند به شدت میل آنتی‌بادی‌های مورد علاقه را به سطح بسیار بالایی افزایش دهند.

میل نمایشگر فاژ-آنتی بادی

هنگامی که کتابخانه جهش یافته scFv ساخته شد، دو استراتژی غربالگری در دسترس هستند: جداسازی زیستی و مرتب‌سازی آنتی‌ژن جامد. در حالت اول، از یک غلظت کاهنده سوبسترا برای جداسازی آنتی بادی با میل ترکیبی بالا استفاده می‌شود، زیرا جهش‌یافته‌های با میل ترکیبی پایین شسته می‌شوند و ذرات فاژ با علاقه بالا باقی می‌مانند. استراتژی دوم از یک آنتی ژن نشاندار در محلول استفاده می کند، انتخاب بر اساس ثابت تعادل (Kd)، و انتخاب بر اساس سینتیک اتصال، این رویکرد انتخاب گونه های آنتی بادی با Kd بهبود یافته را مشخص می کند.

اگر سوالی دارید، لطفا در هر زمان با ما تماس بگیرید.