سرویس بلوغ میل ترکیبی آنتی‌بادی

شرکت آلفا لایف‌تکمی‌تواند خدمات بلوغ میل ترکیبی آنتی‌بادی را با استفاده از فناوری‌های جهش و انتخاب ارائه دهد. ما معمولاً از scFv به عنوان قالب آنتی‌بادی در فرآیندهای خدمات بلوغ میل ترکیبی و یک سیستم فاژمید نمایش تک ظرفیتی استفاده می‌کنیم که برای کاهش اثرات آویدیتی در طول غربالگری اتصال آنتی‌ژن استفاده شده است. تیم حرفه‌ای ما می‌تواند خدمات بلوغ میل ترکیبی را برای آنتی‌بادی‌های تک دامنه نیز ارائه دهد.

شرکت آلفا لایف‌تکمفتخر است که خدمات جامعی را برای برآوردن نیازهای متنوع مشتریان جهانی ارائه می‌دهد. هدف ما درک و برآوردن خواسته‌های مشتریان مختلف و کمک به هرگونه مشکل پیش رو و نوظهور در کارهای تحقیقاتی است.

بلوغ خویشاوندی چیست؟

بلوغ میل ترکیبی فرآیندی است که طی آن آنتی‌بادی‌ها تحت جهش‌های مکرر و انتخاب قرار می‌گیرند تا میل ترکیبی خود را برای آنتی‌ژن‌های خاص افزایش دهند. سلول‌های B که عمدتاً در مرکز زایای اندام‌های لنفاوی ثانویه رخ می‌دهند، تحت تأثیر سلول‌های T و سلول‌های دندریتیک فولیکولی، دچار جهش‌های بیش از حد سوماتیک و انتخاب می‌شوند.
در طول فرآیند بلوغ میل ترکیبی، سلول‌های B با گیرنده‌های ایمونوگلوبولین سطحی با میل ترکیبی کم، توسط مواجهه با آنتی‌ژن فعال شده و تحت تکثیر و تمایز قرار می‌گیرند. از طریق بلوغ میل ترکیبی هایپرموتاسیون سوماتیک، جایگزینی‌های تصادفی نوکلئوتیدی در ناحیه متغیر ژن‌های ایمونوگلوبولین رخ می‌دهد که منجر به تولید انواع مختلف آنتی‌بادی می‌شود. پس از هایپرموتاسیون سوماتیک، انتخاب مبتنی بر آنتی‌ژن بر روی سلول‌های B با گیرنده‌های ایمونوگلوبولین جهش‌یافته انجام می‌شود. سلول‌های B که آنتی‌بادی‌هایی با میل ترکیبی آنتی‌ژنی افزایش‌یافته تولید می‌کنند، ترجیحاً حفظ شده و اجازه تکثیر پیدا می‌کنند، در حالی که سلول‌های B با میل ترکیبی کاهش‌یافته یا بدون تغییر، تحت آپوپتوز قرار می‌گیرند. این فرآیند تکراری جهش و انتخاب منجر به تولید کلون‌های سلول B می‌شود که آنتی‌بادی‌هایی با میل ترکیبی به تدریج بالاتر برای آنتی‌ژن تولید می‌کنند.

سرویس بلوغ میل ترکیبی آنتی‌بادی

مزایای اصلی روش‌های مبتنی بر PCR این است که جهش‌ها دقیقاً به قطعه تکثیر شده هدف قرار می‌گیرند؛ میزان خطا به راحتی قابل کنترل است و این روش سریع و آسان راه‌اندازی می‌شود و از مواد شیمیایی خطرناک استفاده نمی‌کند. به خوبی شناخته شده است که پلیمراز Taq DNA، DNA را با دقت پایینی تکثیر می‌کند، که عمدتاً به دلیل عدم وجود فعالیت تصحیح ۳' به ۵' است.آلفا لایف‌تکپلتفرم مهندسی آنتی‌بادی، یک رویکرد PCR مستعد خطا را برای جهش عمدتاً نواحی CDR در طول ساخت زیرکتابخانه اعمال می‌کند. و اغلب ما جهش‌ها را در موقعیت‌های کاملاً تصادفی در کل قطعات VH و VL ایجاد می‌کنیم تا تنوع ژنتیکی زیرکتابخانه را افزایش دهیم. پس از ساخت یک کتابخانه ژن آنتی‌بادی جهش‌یافته توسط PCR مستعد خطا، انتخاب گونه‌های با میل ترکیبی بالا (میل ترکیبی آنتی‌بادی‌های scFv می‌تواند به 10^8 تا 10^10 مولار برسد) یا با جابجایی در محلول یا روی آنتی‌ژن تثبیت‌شده با شرایط شستشو بهینه‌شده برای انتخاب وابسته به نرخ غیرفعال انجام می‌شود.
  
دانشمندان درشرکت آلفا لایف‌تکاز سویه‌های جهش‌یافته‌ی اشریشیا کلی mutAD5TM به عنوان یکی از چندین استراتژی جهش برای ایجاد جهش‌های تصادفی استفاده کنید و در نتیجه میل ترکیبی و بیان قطعات آنتی‌بادی نوترکیب را تغییر دهید. شرایط انتخاب را می‌توان برای قطعات آنتی‌بادی با افزایش سطح تولید اصلاح کرد. شرایط رشد در سلول‌های جهش‌یافته‌ی اشریشیا کلی را می‌توان طوری تنظیم کرد که یک جهش نقطه‌ای تصادفی در هر کیلوباز DNA ایجاد شود، تقریباً معادل یک تغییر کدون در هر قطعه scFv. پس از چندین چرخه جهش، نمایش و انتخاب، می‌توانیم ثابت میل ترکیبی را از 10^5 - 10^6 M به 10^8 - 10^10 M بهبود بخشیم.

بهبود استراتژی‌های بلوغ وابستگی

می‌توان موقعیت‌های خاصی از آنتی‌بادی‌ها را با تنوع تعریف‌شده‌ای (مانند تصادفی‌سازی کامل با هر 20 اسید آمینه یا تصادفی‌سازی مغرضانه با اسیدهای آمینه انتخاب‌شده با درصدهای ثابت) به صورت تصادفی انتخاب کرد تا میل ترکیبی بهبود یابد. ما دو استراتژی برای بهبود میل ترکیبی آنتی‌بادی داریم: اول، جهش‌ها در موقعیت‌های محدود در نواحی تعیین‌کننده مکمل (CDR) با جهش‌زایی هدفمند معرفی می‌شوند؛ دوم، جهش‌ها با جهش‌زایی تصادفی در کل نواحی کدکننده V معرفی می‌شوند. با استفاده از این دو روش، توالی‌های اسید آمینه‌ای حفاظت‌شده یا کل ناحیه چارچوب آنتی‌بادی با سایر اسیدهای آمینه جایگزین می‌شوند، که در ترکیب با فناوری‌های اسکن کتابخانه پپتیدی ما، می‌تواند میل ترکیبی آنتی‌بادی‌های مورد نظر را به میزان بسیار بالایی افزایش دهد.

نمایش فاژ-میل ترکیبی آنتی‌بادی

پس از ساخت کتابخانه جهش‌یافته‌های scFv، دو استراتژی غربالگری در دسترس است: بیوپنینگ و مرتب‌سازی آنتی‌ژن جامد. در حالت اول، از غلظت کاهشی سوبسترا برای جداسازی آنتی‌بادی با میل ترکیبی بالا استفاده می‌شود، زیرا جهش‌یافته‌های با میل ترکیبی پایین شسته می‌شوند و ذرات فاژ با میل ترکیبی بالا باقی می‌مانند. استراتژی دوم از یک آنتی‌ژن نشاندار شده در محلول، انتخاب بر اساس ثابت تعادل (Kd) و انتخاب بر اساس سینتیک اتصال استفاده می‌کند، این رویکرد انتخاب، انواع آنتی‌بادی با Kd بهبود یافته را جدا می‌کند.

اگر سوالی دارید، لطفا در هر زمانی با ما تماس بگیرید.