پلتفرم توسعه انسانیسازی آنتیبادی
آنتیبادیهای انسانیشده، پاسخ بسیار کمی از سیستم ایمنی بدن انسان ایجاد میکنند یا اصلاً پاسخی نمیدهند. طبق تحقیقات بازار شناختی، اندازه بازار جهانی انسانیسازی آنتیبادی در سال ۲۰۲۴، ۹۲.۵ میلیون دلار آمریکا است و از سال ۲۰۲۴ تا ۲۰۳۱ با نرخ رشد مرکب سالانه (CAGR) ۱۳٪ گسترش خواهد یافت. آلفا لایفتک دارای یک پلتفرم انسانیسازی آنتیبادی بالغ با نرخ موفقیت بیش از ۹۸٪ برای آنتیبادیهای انسانیشده است. ما استراتژیهای انسانیسازی متعددی از جمله پیوند CDR، پیوند SDR، تغییر زنجیرهای، نمایش فاژ و غیره داریم که میتوانند بر اساس نیازهای تجربی شما انتخاب شوند. ما نه تنها میتوانیم انسانیسازی آنتیبادیها را از گونههای مختلف مانند موش، خرگوش، آلپاکا، شتر و غیره ارائه دهیم، بلکه میتوانیم انسانیسازی آنتیبادیها را در اشکال مختلف مانند scFv، Fab و نانوبادیها نیز ارائه دهیم. ما پرسنل فنی حرفهای برای ارائه خدمات تولید، خالصسازی و اعتبارسنجی آنتیبادی، از جمله تولید آنتیبادی مونوکلونال موشی، تولید آنتیبادی کایمریک، بیان و خالصسازی آنتیبادی انسانیشده و توصیف و تجزیه و تحلیل آنتیبادی انسانیشده داریم. با نرخ موفقیت بالا، خلوص بالا و ایمنیزایی پایین، ما تولید آنتیبادی انسانیشده را تضمین میکنیم.
مقدمهای بر انسانیسازی آنتیبادی
درمان با آنتیبادی مونوکلونال میتواند برای درمان بیماریهای خودایمنی، سرطان و سایر بیماریها مورد استفاده قرار گیرد. آنتیبادیهای مونوکلونال با ایمنسازی موشها یا سایر حیوانات تولید میشوند. هنگامی که برای درمان بیماریها در مرحله بعدی تولید آنتیبادی مونوکلونال استفاده میشوند، ایمنیزایی آنتیبادیهای غیرانسانی را نمیتوان نادیده گرفت. اصل اصلی انسانیسازی، ادغام بقایای چارچوب غیرانسانی، مانند مناطق تعیینکننده مکملیت (CDR) با تغییرات زیاد، در چارچوب انسانی است و توالیهایی تولید میکند که ویژگیهای آنتیبادی اصلی را حفظ میکنند و در عین حال از ایمنیزایی جلوگیری میکنند. ایمنسازی موش و متعاقباً انسانیسازی توالی موش، دو مسیر اصلی برای کشف آنتیبادیهای درمانی هستند که عمدتاً از چندین مرحله عبور میکنند: تولید آنتیبادی موش، کایمریزاسیون آنتیبادی مونوکلونال، آنتیبادی مونوکلونال انسانی کایمریک موشی و فرآیند توسعه آنتیبادی مونوکلونال کاملاً انسانیشده. در حال حاضر، تحقیقات عمدتاً شامل موشهای تراریخته (انتقال ژنهای سلول B انسانی به موش)، غربالگری با توان عملیاتی بالا با استفاده از فناوری نمایش مخمر یا فاژ، پیوند CDR (وارد کردن CDRهای والدینی به توالیهای انسانی)، باقیماندههای تعیینکننده اختصاصی پیوند (SDR)، تغییر چارچوب و سایر روشها میشود.

شکل 1: نمای کلی شماتیک از انسانیسازی آنتیبادی از آنتیبادیهای موشی (دامنههای سبز) تا آنتیبادیهای کاملاً انسانی.
استراتژی انسانیسازی آنتیبادی
پیوند CDR
پیوند CDR از طریق یک سیستم بیان پستانداران مبتنی بر فناوری DNA نوترکیب انجام میشود و مراحل اصلی آن عبارتند از:
(1) آنتیبادیهای مربوطه را در موشها (یا منابع غیرانسانی) توسعه دهید، آنتیبادیهای کدکننده DNA را جدا کنید و آنها را برای تعیین توالی در ناقلها کلون کنید (یا مستقیماً تعیین توالی تک سلولی را انجام دهید).
(2) تعیین توالی DNA مربوط به CDR آنتیبادی و تعیین اختصاصیت اتصال به هدف؛
(3) ناحیه چارچوب انسانی (FR) را برای پیوند CDR های غیر انسانی و ساخت یک ژن آنتی بادی جدید انتخاب کنید.
(4) انجام یک تحلیل سهبعدی از تضادهای بین گیرندههای اصلی غیرانسانی و گیرندههای اصلی انسانی برای ایجاد جهشهای بازیابی جهت تثبیت حلقه و جلوگیری از از دست دادن میل ترکیبی یا یکپارچگی ساختاری آنتیبادی انسانیشده نهایی.

شکل ۲: نمای کلی شماتیک از پیوند ناحیه تعیینکننده مکمل (CDR).
تغییر چارچوب
درهمآمیختگی چارچوب برای دستیابی به آنتیبادیهای با میل ترکیبی بالا، به فناوری نمایش فاژ و فناوری غربالگری کتابخانه فاژ متکی است. الیگونوکلئوتیدهای کدکننده چارچوبهای زنجیره سنگین آنتیبادی انسانی به عنوان الگو استفاده میشوند، نواحی CDR به عنوان آغازگر کدگذاری میشوند و تکثیر PCR برای دناتوره کردن محصول PCR جهت دستیابی به DNA تکرشتهای انجام میشود. DNA تکرشتهای ژنهای VL و VH خالصشده با استرپتاویدین با استفاده از لیگاز DNA T4 و آنزیمهای محدودکننده روی ناقلها بازسازی میشود، با باکتریوفاژها انکوبه میشود و توسط باکتریوفاژها تکثیر میشود و یک کتابخانه نمایش فاژ ساخته میشود. سه دور غربالگری با آنتیژنهای مربوطه انجام میشود و در نهایت کلونهای مثبت با استفاده از ELISA و سایر روشها تأیید میشوند.

شکل 3: تصویر شماتیک از پیوند ناحیه تعیینکننده مکملیت (CDR) و استراتژیهای انسانیسازی درهمآمیختگی چارچوب (FR). (الف) روش اصلی پیوند CDR. (ب) فرآیند اصلی درهمآمیختگی FR. (منبع مرجع: وانگ یونگمی و همکاران، مقایسه «ترکیب چارچوب» و «پیوند CDR» در انسانیسازی آنتیبادی موشی PD-1.)
نمایش فاژ
تولید آنتیبادیهای انسانیشده بر اساس روش نمایش آنتیبادیهای خاص روی سطح باکتریوفاژها است که عمدتاً از طریق کتابخانههای فاژ آنتیبادی انسانی ساخته میشوند. منبع کتابخانه، PBMCهای جدا شده از خون محیطی انسان برای ساخت کتابخانههای فاژ است که از آنها توالیهای مربوطه غربالگری میشوند. این توالی دارای توالی کامل انسانی است، اما آنتیبادیهای تولید شده قطعات آنتیبادی مانند scFv، Fab و نانوبادی هستند.
گردش کار خدمات انسانیسازی آنتیبادی
| مراحل خدمات | استاندارد کنترل کیفیت | گاهشمار |
|---|---|---|
| جداسازی آنتیبادی | خلوص >95% | ۱-۲ هفته |
| تحلیل توالی | شناسایی دقیق توالیهای غیر انسانی | ۱ هفته |
| پیوند CDR و پیوند چارچوب | ادغام و بیان موفق | ۲-۳ هفته |
| بیان و تصفیه | راندمان و خلوص بالا | ۲-۳ هفته |
| اعتبارسنجی عملکردی | ارزیابی وابستگی و اختصاصیت | ۱ هفته |
اگر سوالی دارید، لطفا در هر زمانی با ما تماس بگیرید.
Leave Your Message
0102




2018-07-16 

