پلتفرم توسعه انسانی سازی آنتی بادی

آنتی بادی های انسانی شده حداقل پاسخی را از سوی سیستم ایمنی بدن انسان ایجاد می کنند یا هیچ پاسخی ندارند. بر اساس تحقیقات بازار شناختی، اندازه بازار جهانی انسان سازی آنتی بادی در سال 2024 92.5 میلیون دلار است و با نرخ رشد ترکیبی سالانه (CAGR) 13.00 درصد از سال 2024 تا 2031 گسترش خواهد یافت. ما چندین استراتژی انسانی سازی داریم، از جمله پیوند CDR، پیوند SDR، زنجیره زدن، نمایش فاژ و غیره، که می توانند با توجه به نیازهای آزمایشی شما انتخاب شوند. ما نه تنها می‌توانیم آنتی‌بادی‌های موجود در گونه‌های مختلف مانند موش، خرگوش، آلپاکا، شتر و غیره را انسانی‌سازی کنیم، بلکه می‌توانیم آنتی‌بادی‌ها را در اشکال مختلف مانند scFv، Fab و نانوبادی‌ها نیز انسانی کنیم. ما پرسنل فنی حرفه ای برای ارائه خدمات تولید آنتی بادی، تصفیه و اعتبار سنجی، از جمله تولید آنتی بادی مونوکلونال موش، تولید آنتی بادی کایمریک، بیان و خالص سازی آنتی بادی انسانی، و خصوصیات و تجزیه و تحلیل آنتی بادی انسانی داریم. با نرخ موفقیت بالا، خلوص بالا و ایمنی زایی کم، ما تولید آنتی بادی انسانی را تضمین می کنیم.

مقدمه ای بر انسان سازی آنتی بادی

درمان آنتی بادی مونوکلونال می تواند برای درمان بیماری های خود ایمنی، سرطان و سایر بیماری ها استفاده شود. آنتی بادی های مونوکلونال با ایمن سازی موش ها یا حیوانات دیگر تولید می شوند. هنگامی که برای درمان بیماری ها در مراحل بعدی تولید آنتی بادی مونوکلونال استفاده می شود، ایمنی زایی آنتی بادی های غیر انسانی را نمی توان نادیده گرفت. اصل اصلی انسان‌سازی، ادغام باقی‌مانده‌های چارچوب غیرانسانی، مانند مناطق تعیین‌کننده مکملیت بیش‌متغیر (CDRs)، در چارچوب انسانی، تولید توالی‌هایی است که ویژگی‌های آنتی‌بادی اصلی را حفظ می‌کنند و در عین حال از ایمنی‌زایی جلوگیری می‌کنند. ایمن‌سازی موش و متعاقب آن انسان‌سازی توالی موش دو مسیر اصلی برای کشف آنتی‌بادی‌های درمانی است که عمدتاً از چندین مرحله می‌گذرد: تولید آنتی‌بادی موش، کایمریزاسیون آنتی‌بادی مونوکلونال، آنتی‌بادی مونوکلونال انسانی کایمریک، و فرآیند توسعه آنتی‌بادی مونوکلونال کاملاً انسانی. در حال حاضر، تحقیقات عمدتاً شامل موش‌های تراریخته (انتقال ژن‌های سلول B انسانی به موش)، غربالگری با کارایی بالا با استفاده از فن‌آوری نمایش مخمر یا فاژ، پیوند CDR (قرار دادن CDR‌های والدین در توالی‌های انسانی)، باقی‌مانده‌های تعیین پیوند خاص (SDR)، مخلوط کردن چارچوب، و روش‌های دیگر است.

شکل 1: نمای کلی شماتیک انسان سازی آنتی بادی از آنتی بادی های موشی (دامنه های سبز) به آنتی بادی های کاملاً انسانی.

استراتژی انسان سازی آنتی بادی

پیوند CDR

پیوند CDR از طریق یک سیستم بیان پستانداران مبتنی بر فناوری DNA نوترکیب به دست می آید و مراحل اصلی آن عبارتند از:

(1) آنتی‌بادی‌های مربوطه را در موش‌ها (یا منابع غیر انسانی) ایجاد کنید، آنتی‌بادی‌های کدکننده DNA را جدا کنید، و آن‌ها را در ناقل‌هایی برای توالی‌یابی شبیه‌سازی کنید (یا مستقیماً توالی‌یابی تک سلولی را انجام دهید).

(2) برای تعیین توالی DNA مربوط به آنتی بادی CDR و تعیین ویژگی اتصال هدف.

(3) ناحیه چارچوب انسانی (FR) را برای پیوند CDR های غیر انسانی و ساخت یک ژن آنتی بادی جدید انتخاب کنید.

(4) یک تجزیه و تحلیل سه بعدی از تضادهای بین CDR های غیر انسانی و FR های انسانی برای ایجاد جهش های بازیابی برای تثبیت حلقه و جلوگیری از از دست دادن میل ترکیبی یا یکپارچگی ساختاری آنتی بادی انسانی نهایی انجام دهید.

شکل 2: نمای کلی شماتیک پیوند ناحیه تعیین کننده مکمل (CDR).

به هم ریختن چارچوب

درهم ریختگی چارچوب به فناوری نمایش فاژ و فناوری غربالگری کتابخانه فاژ برای به دست آوردن آنتی بادی های با میل ترکیبی بالا متکی است. الیگونوکلئوتیدهایی که چارچوب های زنجیره سنگین آنتی بادی انسانی را کد می کنند به عنوان الگو استفاده می شوند، مناطق CDR به عنوان آغازگر کدگذاری می شوند و تقویت PCR برای دناتوره کردن محصول PCR برای به دست آوردن DNA تک رشته ای انجام می شود. DNA تک رشته‌ای ژن‌های VL و VH خالص‌شده با استرپتاویدین بر روی ناقل‌ها با استفاده از T4 DNA لیگاز و آنزیم‌های محدودکننده بازسازی می‌شود، با باکتریوفاژها انکوبه می‌شود و توسط باکتریوفاژها تقویت می‌شود و یک کتابخانه نمایش فاژ ساخته می‌شود. سه دور غربالگری با آنتی ژن های مربوطه انجام می شود و کلون های مثبت در نهایت با استفاده از الایزا و روش های دیگر تأیید می شوند.

شکل 3: تصویر شماتیکی از استراتژی‌های انسان‌سازی پیوند ناحیه تعیین‌کننده مکمل (CDR) و چارچوب (FR). (الف) روش اصلی پیوند CDR. (ب) فرآیند اصلی درهم ریختن FR. (منبع مرجع:وانگ یونگمی، و همکاران، مقایسه "در هم ریختن چارچوب" و "پیوند CDR" در انسان سازی یک آنتی بادی موش PD-1.)

نمایش فاژ

تولید آنتی بادی های انسانی بر اساس روش نمایش آنتی بادی های خاص بر روی سطح باکتریوفاژها است که عمدتاً از طریق کتابخانه های فاژ آنتی بادی انسانی ساخته می شود. منبع این کتابخانه PBMC های جدا شده از خون محیطی انسان برای ساخت کتابخانه های فاژ است که توالی های مربوطه از آن غربال می شوند. این توالی دارای توالی کامل انسانی است، اما آنتی بادی های تولید شده قطعات آنتی بادی مانند scFv، Fab و nanobody هستند.

گردش کار خدمات انسانی سازی آنتی بادی

مراحل خدمات	استاندارد QC	جدول زمانی
جداسازی آنتی بادی	خلوص 95%	1-2 هفته
تجزیه و تحلیل توالی	شناسایی دقیق توالی های غیر انسانی	1 هفته
CDR Grafting و Framework Grafting	ادغام و بیان موفق	2-3 هفته
بیان و تطهیر	بازده و خلوص بالا	2-3 هفته
اعتبار سنجی عملکردی	ارزیابی قرابت و ویژگی	1 هفته