پلتفرم توسعه آنتیبادی دو اختصاصی
آلفا لایفتک میتواند محصولات و خدمات کشف آنتیبادی و پروتئین نوترکیب با کیفیت تضمینشده را به مشتریان ارائه دهد.
تماس با ما01
پلتفرم توسعه آنتیبادی دو اختصاصی
آلفا لایفتک میتواند محصولات و خدمات کشف آنتیبادی و پروتئین نوترکیب با کیفیت تضمینشده را به مشتریان ارائه دهد. ما میتوانیم آنتیبادیهایی با اثربخشی بالا، اختصاصیت قوی و پایداری خوب تهیه کنیم. آلفا لایفتک دارای ابزارها و تجهیزات متنوعی برای خالصسازی آنتیبادی است که میتواند خدمات خالصسازی آنتیبادی از منابع مختلفی مانند آنتیبادیهای مونوکلونال خرگوش، گوسفند، مرغ و موش و همچنین خدمات خالصسازی میل ترکیبی پروتئین A/G و خدمات جداسازی و خالصسازی آنتیبادی را ارائه دهد. بر اساس ساختار جامع سیستم پلتفرم شامل پلتفرم کشف آنتیبادی، پلتفرم پروتئین و غیره، ما خدمات بالادستی و پاییندستی تولید آنتیبادی را پوشش میدهیم و میتوانیم خدمات فنی از آمادهسازی آنتیبادی، خالصسازی آنتیبادی دو اختصاصی و جداسازی و خالصسازی آنتیبادی، تعیین توالی آنتیبادی، اعتبارسنجی آنتیبادی و غیره را ارائه دهیم که میتوانند برای درمان با آنتیبادی دو اختصاصی استفاده شوند.
آنتیبادیهای مونوکلونال به ایمونوگلوبولینهای تولید شده توسط یک سلول B واحد اشاره دارند که اختصاصیت بالایی برای آنتیژنها یا اپیتوپها دارند. تولید آنتیبادیهای مونوکلونال در ابتدا با استفاده از فناوری هیبریدوما برای تولید آنتیبادیهای موشی انجام شد. به طور خاص، با ترکیب سلولهای طحال موشهای ایمنشده با سلولهای میلوما از انسان یا موش، سلولهای هیبریدوما تشکیل میشوند که آنتیبادیهای خاصی را ترشح میکنند. آنتیبادیهای مونوکلونال موشی تولید شده عمدتاً در تحقیقات حیوانی و تشخیص بیماری پس از خدمات خالصسازی استفاده میشوند. با این حال، بدن انسان پاسخ ایمنی به پروتئینهای موش خارجی ایجاد میکند، بنابراین محدودیتهای قابل توجهی در کاربرد بالینی تولید آنتیبادیهای مونوکلونال موشی وجود دارد. بعدها، افراد از "انسانیسازی" برای تهیه آنتیبادیهای مونوکلونال از موشها استفاده کردند و از فناوری مهندسی ژنتیک برای اصلاح آنتیبادیهای موشی استفاده کردند تا یک ناحیه ثابت از ایمونوگلوبولین انسانی داشته باشند تا ایمنیزایی آنها کاهش یابد. این نوع آنتیبادی همچنین به عنوان آنتیبادی مونوکلونال انسانیشده شناخته میشود. علاوه بر این، استفاده از سلولهای انسانی برای تولید آنتیبادیهای مونوکلونال، تهیه آنتیبادی مونوکلونال کامل انسانی نامیده میشود. آنتیبادیهای مونوکلونال به طور گسترده در کاربردهای زیستپزشکی و بالینی استفاده میشوند. در تحقیقات پزشکی، آنتیبادیهای مونوکلونال میتوانند به عنوان تعدیلکنندههای سیستم ایمنی مورد استفاده قرار گیرند، آنتیبادیهای مونوکلونال درمانی میتوانند برای شیمیدرمانی سرطان و درمان عفونت ویروسی مورد استفاده قرار گیرند و توسعه ترکیبات آنتیبادی مونوکلونال عمدتاً برای درمان سرطان استفاده میشود.
مقدمهای بر آنتیبادی دو اختصاصی
در سال ۱۹۶۰، مفهوم آنتیبادیهای دو اختصاصی مطرح شد. آنتیبادیهای دو اختصاصی که به عنوان آنتیبادیهای مونوکلونال دو اختصاصی نیز شناخته میشوند، آنتیبادیهایی هستند که با استفاده از فناوری مهندسی ژنتیک به صورت مصنوعی سنتز میشوند. به عنوان یک آنتیبادی مصنوعی مهندسیشده، آنتیبادیهای دو اختصاصی معمولاً متعلق به زیرکلاس IgG هستند و حاوی یک قطعه اتصال آنتیژن هستند که زیرواحد CD3 را هدف قرار میدهد. آنتیبادیهای دو اختصاصی دارای دو جایگاه اتصال آنتیژن اختصاصی هستند که میتوانند همزمان به دو آنتیژن مختلف یا دو اپیتوپ مختلف از یک آنتیژن متصل شده و آنها را شناسایی کنند. در مقایسه با آنتیبادیهای مونوکلونال، آنتیبادیهای دو اختصاصی دارای یک جایگاه اتصال آنتیژن اختصاصی اضافی هستند، بنابراین دارای اختصاصیت و توانایی هدفگیری قویتری هستند که میتوانند سلولهای تومور را با دقت بیشتری هدف قرار داده و سمیت خارج از هدف را کاهش دهند. آنتیبادیهای دو اختصاصی میتوانند همزمان چندین عملکرد بیولوژیکی مانند جذب سلولهای ایمنی، مسدود کردن مسیرهای سیگنالینگ و کشتن مستقیم سلولهای تومور را انجام دهند. آنتیبادیهای دو اختصاصی اولیه عمدتاً از طریق ترکیب شیمیایی یا همجوشی سلولی تهیه میشدند، اما این روش ممکن است به دلیل ترکیب تصادفی و دشواری در جداسازی ترکیب هدف، به کندی پیشرفت کرده باشد. با توسعه مداوم فناوری مهندسی ژنتیک، پلتفرمهای فناوری جدید بسیاری مانند گرهها در سوراخها (KIH)، CrossMab، DVD Ig و غیره توسعه یافتهاند. این پلتفرمها به طور مؤثر مشکلاتی مانند عدم تطابق زنجیره سنگین و زنجیره سبک را حل میکنند و یکنواختی و بازده آنتیبادیهای دو اختصاصی را بهبود میبخشند.
شکل 1. نمای کلی شماتیک سادهشده از مکانیسمهای پیشنهادی عملکرد آنتیبادیهای دو اختصاصی (bsAbs) در آزمایشهای بالینی سرطانشناسی.(منبع شکل: مروری بر آنتیبادیهای دو اختصاصی و ساختارهای آنتیبادی در سرطانشناسی و چالشهای بالینی - ScienceDirect)
فناوری تولید آنتیبادیهای دو اختصاصی
روشهای اصلی تولید آنتیبادی دو اختصاصی شامل اتصال شیمیایی، هیبریدومای چهار منبعی و تهیه آنتیبادی مهندسی ژنتیک است. در میان آنها، روش اتصال شیمیایی، دو IgG سالم یا دو قطعه آنتیبادی F (ab ') 2 را با استفاده از عوامل اتصال شیمیایی مانند فتالیمید و دیتیوآسیل بنزوئیک اسید به آنتیبادیهای دو اختصاصی متصل میکند. این روش ساده و آسان برای استفاده است، اما ممکن است به محل اتصال آنتیژن آسیب برساند، فعالیت آنتیبادی را کاهش دهد و خود عامل اتصال نیز درجه خاصی از سرطانزایی دارد. روش هیبریدومای چهار منبعی بر اساس ادغام سلولهای سوماتیک از دو رده سلولی هیبریدومای مختلف برای بیان IgG موشی مربوطه است. از طریق فناوری مهندسی ژنتیک، آنتیبادیها میتوانند از نظر ژنتیکی اصلاح شوند تا آنتیبادیهای دو اختصاصی تشکیل دهند. دو آنتیبادی مونوکلونال مختلف ساخته شدند و قطعات Fab یا نواحی متغیر زنجیره سنگین و زنجیره سبک دو آنتیبادی به طور جداگانه برش داده شدند. از طریق واکنش پیوند متقاطع یا فناوری نوترکیبی زنجیرهای، دو قطعه برای تشکیل یک آنتیبادی دو اختصاصی ترکیب شدند. اگرچه پیچیدگی فناوری مهندسی ژنتیک نسبتاً زیاد است، اما در حال حاضر رایجترین روش برای تولید آنتیبادی دو اختصاصی برای تنظیم ساختار و عملکرد آنتیبادیها است. هنگام طراحی آنتیبادی دو اختصاصی، میتوان از اصل واکنش متقاطع آنتیبادی استفاده کرد، اما واکنش متقاطع آنتیبادی ممکن است باعث واکنشهای غیر اختصاصی شود، بنابراین در کاربرد عملی طراحی آنتیبادی دو اختصاصی، مانند درمان با آنتیبادی دو اختصاصی، به دقت مورد توجه قرار خواهد گرفت.
خالصسازی آنتیبادیهای دو اختصاصی
خالصسازی آنتیبادی دو اختصاصی، فرآیند جداسازی و خالصسازی آنتیبادیهای هدف با خلوص بالا است. دو روش، سانتریفیوژ و فیلتراسیون عمیق، برای حذف برخی ناخالصیهای محلول استفاده میشود. آنتیبادی دو اختصاصی هدف در ابتدا توسط کروماتوگرافی میل ترکیبی جذب میشود. برای آنتیبادیهای دو اختصاصی مشابه IgG، از کروماتوگرافی میل ترکیبی پروتئین A استفاده میشود، در حالی که برای آنتیبادیهای دو اختصاصی غیر مشابه IgG، میتوان از کروماتوگرافی میل ترکیبی مبتنی بر زنجیره سبک استفاده کرد. پس از آن، آنتیبادی برای مدت زمان مشخصی در شرایط pH پایین انکوبه میشود و باعث میشود ساختار پروتئین روی سطح پوشش ویروس مختل شود و در نتیجه توانایی آلوده کردن سلولها را از دست بدهد. فیلتراسیون عمیق متوسط برای حذف بیشتر ناخالصیهایی مانند پروتئینهای سلول میزبان (HCP) انجام میشود. خلوص آنتیبادیها از طریق روشهایی مانند کروماتوگرافی تبادل یونی بهبود مییابد و هرگونه ویروس باقیمانده از طریق تکنیکهای نانوفیلتراسیون یا اولترافیلتراسیون حذف میشود. در نهایت، نمونه تغلیظ شده و با یک بافر فرمولاسیون مناسب جایگزین میشود.
گردش کار خدمات تولید آنتیبادیهای دو اختصاصی
| مراحل | محتوای خدمات | گاهشمار |
|---|---|---|
| سنتز ژن | تولید حداکثر ۳ طرح طراحی مختلف از توالیها، تولید de novo پلاسمیدهای DNA آنتیبادی نوترکیب | ۲-۳ هفته |
| آزمون در مقیاس کوچک | تولید پروتئینهای آنتیبادی دو اختصاصی → بیان در مقیاس کوچک در ردههای سلولی پستانداران → اعتبارسنجی با SDS-PAGE → آنالیز اتصال با آنتیژنهای پروتئین نوترکیب با ELISA → مقایسه کلونها با آنتیبادیهای والدین | ۵-۶ هفته |
| شناسایی | بیان دو آنتیبادی دو اختصاصی کامل اول → آنالیز اتصال با روش الایزا → ارزیابی الایزای آنتیبادیهای شناساییشده توسط آنتیبادیهای ضد موش | ۱ هفته |
| تولید آنتیبادی | تولید انبوه آنتیبادی | ۳-۴ هفته |
-
بیان بالا
بیان بالای پروتئین در سلولهای CHO.
-
ذخیرهسازی پایدار
بیش از ۲ هفته در سرم در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد.
-
بدون مشکل حلالیت
>30 میلیگرم در میلیلیتر
-
Lnes سلولی پایدار
بسیاری از ردههای سلولی پایدار با آنتیژنهای توموری برای تأیید بسیاری از آنتیبادیهای دو اختصاصی توسعه داده شدهاند.
اگر سوالی دارید، لطفا در هر زمانی با ما تماس بگیرید.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102