پلتفرم توسعه آنتی بادی دو اختصاصی
آلفا لایفتک میتواند محصولات و خدمات با کیفیت تضمین شده آنتیبادی و پروتئین نوترکیب را به مشتریان ارائه دهد. ما می توانیم آنتی بادی هایی با کارایی بالا، ویژگی قوی و پایداری خوب تهیه کنیم. آلفا لایفتک دارای انواع ابزارها و تجهیزات تصفیه آنتیبادی است که میتواند خدمات تصفیه آنتیبادی را از منابع مختلف مانند آنتیبادیهای مونوکلونال خرگوش، گوسفند، مرغ و موش، و همچنین خدمات تصفیه پروتئین A/G و خدمات جداسازی و تصفیه آنتیبادی ارائه دهد. بر اساس ساخت سیستم پلت فرم جامع پلت فرم کشف آنتی بادی، پلت فرم پروتئین و غیره، ما خدمات بالادستی و پایین دستی تولید آنتی بادی را پوشش می دهیم و می توانیم خدمات فنی از تهیه آنتی بادی، خالص سازی آنتی بادی دوگانه و جداسازی و خالص سازی آنتی بادی، توالی آنتی بادی، اعتبارسنجی آنتی بادی و غیره را ارائه دهیم که می تواند برای درمان آنتی بادی دوگانه استفاده شود.
آنتی بادی های مونوکلونال به ایمونوگلوبولین های تولید شده توسط یک سلول B اطلاق می شود که ویژگی بالایی برای آنتی ژن ها یا اپی توپ ها دارند. تولید آنتی بادی های مونوکلونال در ابتدا با استفاده از فناوری هیبریدوما برای تولید آنتی بادی های موش تهیه شد. به طور خاص، با ادغام سلول های طحال موش های ایمن شده با سلول های میلوم از انسان یا موش، سلول های هیبریدوما تشکیل می شود که آنتی بادی های خاصی ترشح می کنند. آنتی بادی های مونوکلونال تولید شده عمدتاً در تحقیقات حیوانی و تشخیص بیماری پس از خدمات تصفیه استفاده می شود. با این حال، بدن انسان به پروتئین های خارجی موش پاسخ ایمنی تولید می کند، بنابراین محدودیت های قابل توجهی در کاربرد بالینی تولید آنتی بادی های مونوکلونال موش وجود دارد. بعدها، مردم از "انسان سازی" برای تهیه آنتی بادی های مونوکلونال از موش ها استفاده کردند و از فناوری مهندسی ژنتیک برای اصلاح آنتی بادی های موش استفاده کردند تا یک ناحیه ثابت از ایمونوگلوبولین انسانی داشته باشند تا ایمنی زایی آنها کاهش یابد. این نوع آنتی بادی به عنوان آنتی بادی مونوکلونال انسانی نیز شناخته می شود. علاوه بر این، استفاده از سلول های انسانی برای تولید آنتی بادی های مونوکلونال، آماده سازی آنتی بادی مونوکلونال کامل انسانی نامیده می شود. آنتی بادی های مونوکلونال به طور گسترده در کاربردهای زیست پزشکی و بالینی استفاده می شود. در تحقیقات پزشکی، آنتیبادیهای مونوکلونال را میتوان به عنوان تعدیلکننده ایمنی، آنتیبادیهای مونوکلونال درمانی را میتوان برای شیمیدرمانی سرطان و درمان عفونت ویروسی استفاده کرد، و توسعه ترکیبات آنتیبادی مونوکلونال عمدتاً برای درمان سرطان استفاده میشود.
مقدمه ای بر آنتی بادی دو گونه ای
در سال 1960، مفهوم آنتی بادی های دو گونه ای مطرح شد. آنتی بادی های دو گونه ای که به عنوان آنتی بادی های مونوکلونال دو گونه ای نیز شناخته می شوند، آنتی بادی هایی هستند که به طور مصنوعی با استفاده از فناوری مهندسی ژنتیک سنتز می شوند. به عنوان یک آنتی بادی مصنوعی مهندسی شده، آنتی بادی های دو گونه ای معمولاً به زیر کلاس IgG تعلق دارند و حاوی یک قطعه اتصال آنتی ژن هستند که زیرواحد CD3 را هدف قرار می دهد. آنتی بادی های دو اختصاصی دارای دو محل اتصال آنتی ژن خاص هستند که می توانند به طور همزمان دو آنتی ژن مختلف یا دو اپی توپ متفاوت از یک آنتی ژن را متصل کرده و تشخیص دهند. در مقایسه با آنتیبادیهای مونوکلونال، آنتیبادیهای دو گونهای دارای یک محل اتصال آنتیژن خاص اضافی هستند، بنابراین ویژگی و توانایی هدفگیری قویتری دارند که میتواند سلولهای تومور را با دقت بیشتری هدف قرار داده و سمیت هدف را کاهش دهد. آنتیبادیهای دو گونهای میتوانند به طور همزمان چندین عملکرد بیولوژیکی مانند جذب سلولهای ایمنی، مسدود کردن مسیرهای سیگنالینگ و کشتن مستقیم سلولهای تومور را انجام دهند. آنتیبادیهای دوگانه اولیه عمدتاً از طریق کونژوگاسیون شیمیایی یا همجوشی سلولی تهیه میشدند، اما این روش ممکن است به دلیل ترکیب تصادفی و مشکل در جداسازی ترکیب هدف، به کندی پیشرفت کند. با توسعه مداوم فناوری مهندسی ژنتیک، بسیاری از پلتفرم های فناوری جدید مانند گره ها در سوراخ ها (KIH)، CrossMab، DVD Ig و غیره توسعه یافته اند. این پلت فرم ها به طور موثر مشکلاتی مانند عدم تطابق زنجیره های سنگین و زنجیره سبک را حل می کنند و یکنواختی و بازده آنتی بادی های دو گونه ای را بهبود می بخشند.

شکل 1 نمای کلی شماتیک ساده شده مکانیسم های عمل پیشنهادی برای آنتی بادی های دو گونه ای (bsAbs) در کارآزمایی های بالینی انکولوژی.(منبع شکل:مروری بر آنتی بادی های دو اختصاصی و ساختارهای آنتی بادی در انکولوژی و چالش های بالینی - ScienceDirect)
فناوری تولید آنتی بادی های دو گونه ای
روشهای اصلی برای تولید آنتیبادی دو گونهای شامل جفت شدن شیمیایی، هیبریدوم چهار منبع و آمادهسازی آنتیبادی مهندسی ژنتیک است. در میان آنها، روش جفت شیمیایی دو قطعه آنتی بادی سالم IgG یا دو قطعه آنتی بادی F (ab') 2 را با استفاده از عوامل جفت کننده شیمیایی مانند فتالیمید و دی تیوآسیل بنزوئیک اسید به آنتی بادی های دو گونه ای جفت می کند. این روش ساده و آسان است، اما ممکن است به محل اتصال آنتی ژن آسیب برساند، فعالیت آنتی بادی را کاهش دهد، و خود عامل جفت کننده نیز دارای درجه خاصی از سرطان زایی است. روش هیبریدوم چهار منبع مبتنی بر ادغام سلول های سوماتیک از دو رده سلولی هیبریدوم مختلف برای بیان IgG مربوطه موش است. از طریق فناوری مهندسی ژنتیک، آنتیبادیها را میتوان از نظر ژنتیکی اصلاح کرد تا آنتیبادیهای دو گونهای را تشکیل دهند. دو آنتی بادی مختلف مونوکلونال ساخته شد و قطعات Fab یا زنجیره سنگین و زنجیره سبک مناطق متغیر دو آنتی بادی به طور جداگانه شکافت شدند. از طریق واکنش پیوند متقابل یا فناوری نوترکیبی زنجیره ای، این دو قطعه برای تشکیل یک آنتی بادی دو گونه ای ترکیب شدند. اگرچه پیچیدگی فناوری مهندسی ژنتیک نسبتاً زیاد است، اما در حال حاضر رایجترین روش برای تولید آنتیبادی دو گونهای برای تنظیم ساختار و عملکرد آنتیبادیها است. هنگام انجام طراحی آنتی بادی دو اختصاصی، ممکن است از اصل واکنش متقاطع آنتی بادی استفاده شود، اما واکنش متقابل آنتی بادی ممکن است باعث واکنش های غیر اختصاصی شود، بنابراین در کاربرد عملی طراحی آنتی بادی دو اختصاصی، مانند درمان آنتی بادی دو اختصاصی، به دقت مورد توجه قرار خواهد گرفت.
خالص سازی آنتی بادی های دو گونه ای
خالص سازی آنتی بادی دو گونه ای فرآیند جداسازی و خالص سازی آنتی بادی های هدف با خلوص بالا است. برای حذف برخی ناخالصی های محلول از دو روش سانتریفیوژ و فیلتراسیون عمیق استفاده می شود. آنتی بادی دو اختصاصی هدف در ابتدا توسط کروماتوگرافی میل ترکیبی گرفته می شود. برای آنتی بادیهای دو اختصاصی مانند IgG، کروماتوگرافی میل ترکیبی پروتئین A استفاده میشود، در حالی که برای آنتیبادیهای دو اختصاصی غیر مشابه IgG، میتوان از کروماتوگرافی میل ترکیبی مبتنی بر زنجیره سبک استفاده کرد. پس از آن، آنتی بادی در شرایط pH پایین برای مدت زمان معینی انکوبه می شود و باعث می شود ساختار پروتئین روی سطح پوشش ویروس مختل شود و در نتیجه توانایی آلوده کردن سلول ها را از دست بدهد. فیلتراسیون عمیق میانی برای حذف بیشتر ناخالصی ها مانند پروتئین های سلول میزبان (HCP) انجام می شود. خلوص آنتیبادیها از طریق روشهایی مانند کروماتوگرافی تبادل یونی بهبود مییابد و هر گونه ویروس باقیمانده از طریق روشهای نانوفیلتراسیون یا اولترافیلتراسیون حذف میشود. در نهایت، نمونه غلیظ شده و با یک بافر فرمولاسیون مناسب جایگزین می شود.
گردش کار خدمات تولید آنتی بادی های دو اختصاصی
مراحل | محتوای خدمات | جدول زمانی |
---|---|---|
سنتز ژن | تولید حداکثر 3 طرح طراحی مختلف توالی، تولید نوترکیب پلاسمیدهای DNA آنتی بادی نوترکیب | 2-3 هفته |
آزمون در مقیاس کوچک | تولید پروتئین های آنتی بادی دو اختصاصی ← بیان در مقیاس کوچک در رده های سلولی پستانداران ← اعتبار سنجی توسط SDS-PAGE ← آنالیز اتصال با آنتی ژن های پروتئین نوترکیب با روش ELISA ← مقایسه کلون ها با آنتی بادی های والدین | 5-6 هفته |
شناسایی کنید | بیان دو آنتی بادی دو اختصاصی اول → تجزیه و تحلیل اتصال با الایزا → ارزیابی ELISA آنتی بادی های شناسایی شده توسط آنتی بادی های ضد موش | 1 هفته |
تولید آنتی بادی | تولید آنتی بادی در مقیاس بزرگ | 3-4 هفته |
اگر سوالی دارید، لطفا در هر زمان با ما تماس بگیرید.
Leave Your Message
0102