پروتئینهای غشایی دسته متنوعی از پروتئینها هستند که درون یا متصل به دولایه لیپیدی غشای سلولی قرار گرفتهاند. پروتئینهای غشایی را میتوان به سه دسته تقسیم کرد: پروتئینهای غشایی محیطی، پروتئینهای متصل به لیپید و پروتئینهای غشایی انتگرالی. آنها نقشهای حیاتی در فرآیندهای مختلف سلولی، از جمله انتقال سیگنال، انتقال مولکولها از طریق غشاها، ارتباط سلول-سلول و چسبندگی سلول ایفا میکنند.
روشهای مرسوم، مانند سیستم پستانداران،سیستم باکولوویروس-حشره،سیستم باکتریایی، وسیستم مخمربرای تهیه پروتئینهای غشایی انتگرال، محدودیتهای ذاتی در بیان پروتئینهای غشایی وجود دارد، زیرا تولید پروتئینهای غشایی یک کار چالش برانگیز است زیرا ماهیت آبگریز آنها و الزامات خاص آنها در سیستمهای بیان سلولی اغلب مانع از سنتز کارآمد میشود. تاکنون، تعداد قابل توجهی از پروتئینهای غشایی از خانوادههای متنوع مانند ناقلهای کوچک چند دارویی پروکاریوتی (SMTs) یا گیرندههای جفتشده با پروتئین G یوکاریوتی (GPCRs) در سیستمهای بدون سلول در مقادیر زیاد و به اشکال فعال عملکردی تولید شدهاند.
آلفا لایفتک میتواند ارائه دهد؟
آلفا لایفتک خدمات بیان پروتئین غشایی، راهحلهای پیشرفتهای را برای تولید پروتئینهای غشایی چالشبرانگیز، از جمله GPCRها، کانالهای یونی و ذرات شبهویروسی ارائه میدهد.
گردش کار تولید پروتئین غشایی
سوالات متداول درباره تولید پروتئین غشایی
۱. انواع پروتئینهای غشایی کدامند؟
پروتئینهای غشایی انتگرال، پروتئینهای غشایی محیطی و پروتئینهای متصل به لیپید.
۲. چرا وقتی پروتئین غشایی حل میشود، شوینده فوق خالص را انتخاب کنیم و چه چیزی باید انتخاب شود؟
استفاده از یک شوینده فوق خالص برای انحلال مؤثر پروتئین غشایی بسیار مهم است. این شوینده با مختل کردن لایه لیپیدی و تثبیت پروتئین در محلول، به حل شدن پروتئین کمک میکند. در اینجا چند شوینده فوق خالص رایج برای حل شدن پروتئین غشایی آورده شده است: تریتون X-100؛ دودسیل مالتوزید (DDM)؛ N-دودسیل-β-d-مالتوپیرانوزید (DDM)؛ دیجیتونین؛ سدیم دودسیل سولفات (SDS)؛ سری فوس-کولین.
۳. اثرات غلظت زیاد یا کم مواد شوینده چیست؟
غلظت خیلی بالای شوینده میتواند پروتئین را دناتوره کند، در حالی که غلظت خیلی کم ممکن است منجر به حل شدن ناقص شود.
۴. چرا به زمان انحلال به اندازه کافی طولانی نیاز داریم؟
باید زمان کافی برای واکنش مواد شوینده با غشاء و حل کردن مؤثر پروتئین در نظر گرفته شود. برای انحلال کامل، ممکن است دورههای انکوباسیون طولانیتری لازم باشد.
۵. اجزای محلول بافر چیست؟
بافر باید شرایط بهینه را برای پایداری و انحلال پروتئین فراهم کند. این بافر معمولاً شامل ترکیبی از نمکها، تنظیمکنندههای pH و افزودنیها (مثلاً عوامل کاهنده، تثبیتکنندهها) است که متناسب با پروتئین خاص و الزامات آزمایشگاهی طراحی شدهاند.
مزایای تولید پروتئین غشاییچرا انتخاب کنیم؟
نمونههای پروتئین غشایی با خلوص بالا را تهیه کنید که امکان مطالعات ساختاری و عملکردی دقیق را فراهم میکند.
تیم دانشمندان باتجربه ما دانش عمیقی در مورد بیان و خالصسازی پروتئینهای غشایی دارند و تولید موفقیتآمیز پروتئینهای با کیفیت بالا را تضمین میکنند.
اقدامات دقیق کنترل کیفیت برای اطمینان از یکپارچگی و عملکرد پروتئینهای غشایی بیانشده.
سیستمهای بیان پروتئین چندگانه: سیستم بیان بدون سلول، سیستم باکولوویروس-حشره و سیستم بیان سلولی HEK293
تحویل سریع
استراتژیهای متعدد خالصسازی شامل برچسبگذاری با تمایل، رزین یا خالصسازی با مهره مغناطیسی است.