خدمات توسعه آنتی بادی مونوکلونال

شرکت آلفا لایف تکمی تواند پیش بینی اپی توپ، سنتز پپتید، بیان پروتئین، تولید آنتی بادی پلی کلونال یا مونوکلونال و همچنین خالص سازی آنتی بادی از کشت سلولی، مایع آسیت یا سرم کامل را فراهم کند.

شرکت آلفا لایف تکدر ارائه خدمات مختلف خط سلولی پایدار به مشتریان از جمله سلول های هیبریدوما، خطوط سلولی ویرایشگر ژنوم، خطوط سلولی ناکارآمد و خطوط سلولی با بیان بیش از حد تجربه دارد. ما سعی می کنیم خدمات پیشرفته خط سلولی سفارشی را به هر مشتری ارائه دهیم و خدمات ما اثبات شده و قابل اعتماد است.

استراتژی توسعه آنتی بادی

1. طراحی و آماده سازی آنتی ژن
این آنتی ژن ها می توانند پروتئین ها، پپتیدها یا مولکول های دیگر باشند. طراحی ایمونوژن ها نیازمند یک رویکرد جامع است که دانش ساختار آنتی ژن، ایمونولوژی و سیستم های تحویل را ادغام می کند. Alpha Lifetech دارای فناوری طراحی آنتی ژن است که می تواند ایمونوژن ها را برای مشتریان نیازمند طراحی کند.
آلفا لایف‌تک محصولات پروتئین نوترکیب را برای مشتریان فراهم می‌کند. ما انواع مختلفی از سیستم های بیان پروتئین مانند سیستم بیان E. coli، سیستم بیان مخمر، سیستم بیان باکولوویروس-حشره، سیستم بیان پستانداران و غیره را برای تولید پروتئین های نوترکیب مورد نیاز برای تحقیق داریم.

2. ایمن سازی حیوانات
آلفا لایف‌تک می‌تواند ایمونوژن‌ها را در اختیار مشتریان قرار دهد و حیوانات مصون مانند موش، خرگوش، گوسفند، آلپاکا، خوکچه هندی، همستر و غیره در دسترس شما هستند تا از بین آنها انتخاب کنید.

3. روش های تولید آنتی بادی مونوکلونال

●Mabs تولید با تکنولوژی Hybridoma
هیبریدوم یک سلول ترکیبی است که از ادغام دو نوع سلول، یعنی رده سلولی میلوم موش و سلول‌های پلاسما (لنفوسیت B) تولید می‌شود که در آن سلول هتروزیگوت می‌تواند آنتی‌بادی‌های پیوسته علیه آنتی‌ژن مورد نظر را در شرایط آزمایشگاهی تولید کند. تولید رده سلولی هیبریدوما از سه بخش تشکیل شده است: طراحی آنتی ژن (هاپتن ها، مولکول های کوچک و پپتیدها)، ایمن سازی حیوانات، همجوشی سلولی و غربالگری کلون مثبت. با استفاده از روش‌های ایمن‌سازی منحصربه‌فرد، راندمان همجوشی سلولی فوق‌العاده بالایی (1-10 هیبریدوم در هزار سلول B) و تیتر آنتی‌بادی بالا را به دست می‌آوریم و میزان موفقیت خود را در آزمایش‌های تحلیلی بعدی که شامل غربالگری بیوشیمیایی، سنجش‌های مبتنی بر سلول‌های آزمایشگاهی و مطالعات حیوانی می‌شود، به حداکثر می‌رسانیم.

●Mabs تولید با فناوری نمایش فاژ
نمایش فاژ روش دیگری برای تولید آنتی بادی های مونوکلونال ارائه می دهد. لنفوسیت های B از خون حیوانات جدا شده و mRNA آنها استخراج می شود. از طریق PCR، این mRNA به cDNA تبدیل می شود که تمام بخش های VH و VL را تقویت می کند. سپس این بخش‌ها در کنار پروتئین PIII یک باکتریوفاژ در یک ناقل، معمولاً به‌عنوان قطعات متغیر تک زنجیره‌ای (scFv) کلون می‌شوند. متعاقبا، از این ساختار برای آلوده کردن E. coli استفاده می‌شود و در نتیجه یک کتابخانه حاوی تقریباً 10^10 سلول از طریق تلقیح با فاژ کمکی ایجاد می‌شود. E. coli سپس قادر به ترشح باکتریوفاژی است که بخش های VH و VL را به عنوان بخشی از پوشش خود نگه می دارد. به دنبال این، بخش‌های خاص VH و VL که آنتی ژن مورد نظر را هدف قرار می‌دهند، می‌توانند انتخاب و برای تلقیح مجدد E. coli با باکتریوفاژ استفاده شوند. سپس سلول های حاوی پلاسمید جدا شده و توالی یابی می شوند.

4. غربالگری فیوژن

●ترکیب و انتخاب سلولی
سپس سلول‌های B جمع‌آوری‌شده با سلول‌های میلوما، که سلول‌های سرطانی هستند که می‌توانند به طور نامحدود در کشت تکثیر شوند، ترکیب می‌شوند. همجوشی معمولاً با استفاده از تکنیکی مانند همجوشی پلی اتیلن گلیکول (PEG) انجام می شود.
پس از ادغام، سلول‌های هیبریدوما در محیطی انتخابی کشت می‌شوند که فقط به هیبریدوم‌ها اجازه زنده ماندن می‌دهد. این محیط معمولاً حاوی آمینوپترین است که از رشد سلول‌های میلومای ذوب نشده جلوگیری می‌کند.

●غربالگری و کلنگینگ
سلول های هیبریدومای حاصل از نظر تولید آنتی بادی های مخصوص آنتی ژن هدف غربالگری می شوند. این معمولاً با استفاده از تکنیک‌هایی مانند سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA)، وسترن بلات، رسوب ایمنی و فلوسیتومتری انجام می‌شود.

هنگامی که سلول های هیبریدوما تولید کننده آنتی بادی شناسایی می شوند، برای تولید جمعیتی از سلول های یکسان، کلون می شوند. این تضمین می کند که آنتی بادی تولید شده توسط هر سلول هیبریدوما یکسان است.

5. تأیید عملکرد آنتی بادی
آلفا لایف‌تک اعتبار عملکردی آنتی‌بادی، مانند وسترن بلات، ایمونوهیستوشیمی، یا سنجش‌های عملکردی را برای مشخص کردن آنتی‌بادی‌های مونوکلونال و تأیید ویژگی، میل ترکیبی و عملکرد آنتی‌بادی فراهم می‌کند.

6. بهینه سازی آنتی بادی
خالص‌سازی آنتی‌بادی‌ها از رویی کشت با استفاده از تکنیک‌هایی مانند کروماتوگرافی میل ترکیبی پروتئین A یا پروتئین G، و Alpha Lifetech همچنین می‌تواند روش‌های اصلاح آنتی‌بادی را برای بهبود میل آنتی‌بادی ارائه دهد.

7. تولید آنتی بادی
آلفا لایف‌تک می‌تواند آنتی‌بادی‌های کاندید را برای کاربردهای غربالگری با کارایی بالا و تولید در مقیاس بزرگ ارزیابی کند.