خدمات توسعه آنتی‌بادی مونوکلونال

شرکت آلفا لایف‌تکمی‌تواند پیش‌بینی اپی‌توپ، سنتز پپتید، بیان پروتئین، تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال یا مونوکلونال و همچنین خالص‌سازی آنتی‌بادی از کشت سلولی، مایع آسیت یا سرم کامل را فراهم کند.

شرکت آلفا لایف‌تکدر ارائه خدمات مختلف رده سلولی پایدار به مشتریان، از جمله سلول‌های هیبریدوما، رده‌های سلولی ویرایش ژنوم، رده‌های سلولی غیرفعال و رده‌های سلولی با بیان بیش از حد، تجربه دارد. ما سعی می‌کنیم خدمات پیشرفته رده سلولی سفارشی را به هر مشتری ارائه دهیم و خدمات ما اثبات شده و قابل اعتماد است.

استراتژی توسعه آنتی‌بادی

۱. طراحی و آماده‌سازی آنتی‌ژن
این آنتی‌ژن‌ها می‌توانند پروتئین، پپتید یا سایر مولکول‌ها باشند. طراحی ایمونوژن‌ها نیازمند رویکردی جامع است که دانش ساختار آنتی‌ژن، ایمونولوژی و سیستم‌های دارورسانی را ادغام کند. آلفا لایف‌تک دارای فناوری طراحی آنتی‌ژن است که می‌تواند ایمونوژن‌ها را برای مشتریان نیازمند طراحی کند.
شرکت آلفا لایف‌تک محصولات پروتئین نوترکیب را برای انتخاب مشتریان ارائه می‌دهد. ما سیستم‌های بیان پروتئین متنوعی مانند سیستم بیان E. coli، سیستم بیان مخمر، سیستم بیان باکولوویروس-حشره، سیستم بیان پستانداران و غیره را برای تولید پروتئین‌های نوترکیب مورد نیاز شما برای تحقیقات در اختیار داریم.

۲. ایمن‌سازی حیوانات
آلفا لایف‌تک می‌تواند ایمونوژن‌ها را در اختیار مشتریان قرار دهد و حیوانات ایمن مانند موش، خرگوش، گوسفند، آلپاکا، خوکچه هندی، همستر و غیره برای انتخاب شما در دسترس هستند.

۳. روش‌های تولید آنتی‌بادی مونوکلونال

●تولید ماب‌ها با استفاده از فناوری هیبریدوما
هیبریدوما یک سلول هیبریدی است که از ادغام دو نوع سلول، یعنی رده سلولی میلوما موش و سلول‌های پلاسما (لنفوسیت B) تولید می‌شود، که در آن سلول هتروزیگوت می‌تواند آنتی‌بادی‌های مداوم علیه آنتی‌ژن مورد نظر را در شرایط آزمایشگاهی (in vitro) تولید کند. تولید یک رده سلولی هیبریدوما شامل سه بخش است: طراحی آنتی‌ژن (هاپتن‌ها، مولکول‌های کوچک و پپتیدها)، ایمن‌سازی حیوانات، ادغام سلولی و غربالگری کلون مثبت. با استفاده از روش‌های منحصر به فرد ایمن‌سازی، ما به راندمان ادغام سلولی فوق‌العاده بالایی (1 تا 10 هیبریدوما در هر هزار سلول B) و تیترهای آنتی‌بادی بالا دست می‌یابیم که میزان موفقیت ما را در آزمایش‌های تحلیلی بعدی که شامل غربالگری بیوشیمیایی، سنجش‌های مبتنی بر سلول در شرایط آزمایشگاهی (in-vitro) و مطالعات حیوانی است، به حداکثر می‌رساند.

●تولید آنتی‌بادی‌های مونوکلونال با استفاده از فناوری نمایش فاژ
نمایش فاژ روش دیگری برای تولید آنتی‌بادی‌های مونوکلونال ارائه می‌دهد. لنفوسیت‌های B از خون حیوانات جدا شده و mRNA آنها استخراج می‌شود. از طریق PCR، این mRNA به cDNA تبدیل می‌شود که تمام قطعات VH و VL را تکثیر می‌کند. سپس این قطعات در یک وکتور، معمولاً به صورت قطعات متغیر تک زنجیره‌ای (scFv)، در کنار پروتئین PIII یک باکتریوفاژ، کلون می‌شوند. متعاقباً، از این ساختار برای آلوده کردن E. coli استفاده می‌شود که منجر به ایجاد کتابخانه‌ای حاوی تقریباً 10^10 سلول از طریق تلقیح با یک فاژ کمکی می‌شود. سپس E. coli قادر است باکتریوفاژ حاوی قطعات VH و VL را به عنوان بخشی از پوشش خود ترشح کند. پس از این، می‌توان قطعات خاص VH و VL را که آنتی‌ژن مورد نظر را هدف قرار می‌دهند، انتخاب و برای تلقیح مجدد E. coli با باکتریوفاژ استفاده کرد. سپس سلول‌های حاوی پلاسمید جدا و توالی‌یابی می‌شوند.

غربالگری فیوژن

●همجوشی و انتخاب سلولی
سلول‌های B برداشت‌شده سپس با سلول‌های میلوما، که سلول‌های سرطانی هستند و می‌توانند در محیط کشت به‌طور نامحدود تکثیر شوند، ادغام می‌شوند. این ادغام معمولاً با استفاده از تکنیکی مانند ادغام پلی‌اتیلن گلیکول (PEG) انجام می‌شود.
پس از ادغام، سلول‌های هیبریدوما در یک محیط کشت انتخابی کشت داده می‌شوند که فقط به هیبریدوماها اجازه زنده ماندن می‌دهد. این محیط کشت معمولاً حاوی آمینوپترین است که از رشد سلول‌های میلوما ادغام نشده جلوگیری می‌کند.

●غربالگری و کلونینگ
سلول‌های هیبریدومای حاصل از نظر تولید آنتی‌بادی‌های اختصاصی برای آنتی‌ژن هدف غربالگری می‌شوند. این کار معمولاً با استفاده از تکنیک‌هایی مانند سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA)، وسترن بلات، ایمونوپرسیپیتاسیون و فلوسیتومتری انجام می‌شود.

پس از شناسایی سلول‌های هیبریدومای تولیدکننده آنتی‌بادی، آنها برای تولید جمعیتی از سلول‌های یکسان، کلون می‌شوند. این امر تضمین می‌کند که آنتی‌بادی تولید شده توسط هر سلول هیبریدوما یکسان باشد.

۵. تأیید عملکرد آنتی‌بادی
آلفا لایف‌تک، اعتبارسنجی عملکردی آنتی‌بادی، مانند وسترن بلات، ایمونوهیستوشیمی یا سنجش‌های عملکردی، را برای توصیف آنتی‌بادی‌های مونوکلونال و تأیید اختصاصیت، میل ترکیبی و عملکرد آنتی‌بادی ارائه می‌دهد.

۶. بهینه‌سازی آنتی‌بادی
خالص‌سازی آنتی‌بادی‌ها از مایع رویی کشت با استفاده از تکنیک‌هایی مانند کروماتوگرافی میل ترکیبی پروتئین A یا پروتئین G، و Alpha Lifetech همچنین می‌تواند روش‌های اصلاح آنتی‌بادی را برای بهبود میل ترکیبی آنتی‌بادی ارائه دهد.

۷. تولید آنتی‌بادی
آلفا لایف‌تک می‌تواند آنتی‌بادی‌های کاندید را برای کاربردهای غربالگری با توان عملیاتی بالا و تولید در مقیاس بزرگ ارزیابی کند.