خدمات ساخت کتابخانه نمایش Phage

Alpha Lifetech دارای یک پلت فرم نمایش فاژ M13/T7 برای اطمینان از ساخت و تولید کتابخانه های آنتی بادی است. ما همچنین می توانیم خدمات سفارشی مانند تولید آنتی بادی scFv را برای رفع نیازهای شما ارائه دهیم.

با ما تماس بگیرید

خدمات ساخت کتابخانه نمایش Phage

آلفا لایف‌تک سال‌هاست که عمیقاً در فناوری نمایشگر فاژ مشغول است. این یک پلتفرم فناوری نمایشگر فاژ با ثبات کامل ساخته است که در زمان برای تحقیقات علمی یا تحقیقات پروژه صرفه جویی می کند و تولید بعدی را تسهیل می کند. Alpha Lifetech همچنین می تواند خدماتی مانند تولید آنتی بادی vhh، تولید آنتی بادی scFv، تولید آنتی بادی Fab را به مشتریان ارائه دهد.

Alpha Lifetech دارای یک پلت فرم نمایش فاژ M13/T7 برای اطمینان از ساخت و تولید کتابخانه های آنتی بادی است. ما همچنین می‌توانیم خدمات سفارشی مانند تولید آنتی‌بادی scFv و غربالگری آنتی‌بادی با کارایی بالا را برای رفع نیازهای شما ارائه دهیم.

مقدمه ای بر نمایشگر فاژ

فناوری نمایش فاژ تکنیکی است که از فاژها (ویروسی که باکتری ها را آلوده می کند) برای جستجوی مولکول های اتصال عملکردی پروتئین ها یا پپتیدهای خاص استفاده می کند. تکنیک های ساخت کتابخانه آنتی بادی فاژ شامل ساخت کتابخانه آنتی بادی Fab، ساخت کتابخانه آنتی بادی scFv، ساخت کتابخانه نانوبادی و ... می باشد که با توجه به انواع باکتریوفاژها می توان آنها را به M13، T7، T4، λ و سیستم های دیگر تقسیم کرد. با توجه به نوع کتابخانه، می توان آن را به کتابخانه پپتید تصادفی، کتابخانه cDNA، کتابخانه آنتی بادی و کتابخانه پروتئین تقسیم کرد. استفاده از فناوری نمایش فاژ ساده و ارزان است. با این حال، این تکنیک تنوع ژنتیک مولکولی را در کتابخانه که نمی تواند توالی های خیلی طولانی را بیان کند، محدود می کند.

در حال حاضر، فناوری نمایش فاژ به طور گسترده ای استفاده می شود. در میان آنها، دستاوردهای قابل توجهی در تحقیق و توسعه واکسن های جدید (واکسن های مصنوعی ارزان قیمت و کارآمد)، توسعه داروهای آنتی بادی (مهارکننده های آنزیم غربالگری)، انتقال سیگنال سلولی (غربالگری اپی توپ های شبیه سازی شده)، و تحقیق در مورد اپی توپ های آنتی ژن (تهیه آنتی بادی های مونوکلونال) وجود دارد.

مقدمه ای بر باکتریوفاژ T7

باکتریوفاژ T7 یک DNA دو رشته ای است، طول DNA 40 کیلوبایت است و در یک کپسید با قطر 60 نانومتر پیچیده شده است. رابط بین سر و دم یک ساختار حلقه ای است که از چندین نسخه از gp8 تشکیل شده است. سر و هسته باکتریوفاژ t7 یک ساختار استوانه ای شکل می دهد که به gp8 متصل می شود و می تواند سر و دم را به هم متصل کند.

شکل 1 نمایش شماتیک باکتریوفاژ T7.(مرجع:پیشرفت در سیستم نمایش فاژ T7 (بازبینی))

آشنایی با باکتریوفاژ M13

باکتریوفاژ M13 متعلق به گروهی از فاژهای رشته ای است که مجموعاً فاژهای Ff نامیده می شوند. طول آن 900 نانومتر و عرض آن 6.5 نانومتر است. حاوی ژنومی از DNA تک رشته ای (ssDNA) با طول 6407 جفت باز است که از 9 ژن کد کننده 11 پروتئین مختلف تشکیل شده است. در میان آنها، پنج پروتئین پروتئین پوششی هستند و شش پروتئین در همانندسازی و مونتاژ فاژ نقش دارند. بالاترین غلظت پروتئین پوششی پروتئین کپسید G8P است که از حدود 2700 واحد پروتئین تشکیل شده و پوششی در اطراف کروموزوم ایجاد می کند.

شکل 2 نمایش شماتیک باکتریوفاژ M13.(مرجع:مبانی فناوری نمایش آنتی بادی فاژ)

مقدمه ای بر کتابخانه آنتی بادی نمایش فاژ

کشف آنتی بادی در پزشکی مدرن اهمیت فزاینده ای پیدا کرده است. روش های مختلف کشف آنتی بادی وجود دارد، اما کتابخانه آنتی بادی نمایش فاژ بیشتر در علم پزشکی استفاده می شود.

از سال 1990، فرمت های آنتی بادی مختلف برای ساخت کتابخانه های فاژ استفاده شده است، از جمله VHs، VHHs، scFvs، diabodies و آنتی بادی های Fab. scFv متشکل از حوزه های ساختاری VH و VL آنتی بادی های تک زنجیره ای هستند که برای ساخت کتابخانه های آنتی بادی scFv استفاده می شوند. scFv با نیمه عمر کوتاه و ایمنی زایی کم مشخص می شود. کتابخانه آنتی بادی Fab شامل VH، VL، CL و CH1 است که می تواند به سرعت آنتی بادی های ایده آل را با میل ترکیبی بالا بررسی کند. کوچکترین واحدی که می تواند آنتی ژن-VHH هدف را متصل کند، کتابخانه نانو جسم در حال حاضر را تشکیل می دهد، VHH دارای مزایای ساختار ساده، حجم کم، حلالیت بالا، پایداری خوب و آماده سازی و بیان آسان است. کتابخانه‌های نانوبادی مصنوعی (Nb) به عنوان جایگزینی جذاب برای ایمن‌سازی حیوانات برای نانوبادی مصنوعی با میل ترکیبی بالا در حال ظهور هستند. به طور کلی، این قطعات آنتی بادی با G3P فاژ M13 ترکیب می‌شوند و با شبیه‌سازی تعداد زیادی از ژن‌های کدکننده یک قطعه آنتی‌بادی، می‌توان کتابخانه‌های آنتی‌بادی بزرگی برای نمایش فاژ تولید کرد که از آن‌ها می‌توان آنتی‌بادی‌های متنوع زیادی را انتخاب کرد.

فرآیند ساخت کتابخانه فاژ

فرآیند ساخت کتابخانه فاژ به شرح زیر است: پرایمرهای خاصی برای تقویت PCR طراحی شده اند که محصولاتی را به دست می آورند که با وکتور فاژ T7/M13 با آنزیم پیوند می شوند و پلاسمید فاژ نوترکیب با موفقیت ساخته می شود. پلاسمید فاژ نوترکیب به سلول‌های گیرنده TG1 تبدیل شد، سپس روی محیطی حاوی آنتی‌بیوتیک مناسب پوشانده شد و پس از غربالگری ترانسفورماتورها کشت گسترش یافت. پس از چندین دور کشت، فاژ زمان‌های تکثیر را در باکتری تکرار می‌کند و با موفقیت پروتئین یا پلی پپتید هدف را بیان می‌کند. سپس کتابخانه فاژ برای از بین بردن برخی ناخالصی ها و فاژهای غیر متصل خالص سازی می شود.

نواحی متغیر (VH و VL) با تنوع آنتی بادی در ارتباط بودند، و VH و VL همراه با دنباله ای که پروتئین فاژ PIII را کد می کند، به ناقل فاژ وارد شدند. پس از مونتاژ، ذره فاژ در معرض دید قرار می گیرد و با ترمینال N پروتئین پوششی جزئی III ترکیب می شود تا یک قطعه آنتی بادی عملکردی تشکیل شود و یک کتابخانه حاوی توالی DNA آنتی بادی به دست آید.

پس از پایان ایمن سازی، تیتر تشخیص داده شد و پس از تعیین تیتر خون حیوان گرفته شد. لنفوسیت ها از خون جدا می شوند، RNA استخراج می شود، RT-PCR قطعه هدف را تکثیر می کند و قطعه ژن ناحیه V به دست می آید. ژن V با استفاده از یک پرایمر خاص تقویت می شود.

کتابخانه های طبیعی ایجاد شده شامل آنتی بادی های ایمنی زا ضعیف در حیوانات است که می تواند هر هدفی را هدف قرار دهد. آنتی بادی های فاژ که به طور خاص به آنتی ژن متصل می شوند را می توان با استفاده از تکنیک های غربالگری که آنتی ژن را ثابت یا برچسب گذاری می کند جمع آوری کرد.

آنتی ژن هدف به یک حامل جامد، مانند سوراخ میکروپلیت، یا به یک مهره مغناطیسی متصل می شود. سپس کتابخانه آنتی بادی فاژ برای اتصال آن به آنتی ژن اضافه می شود. پس از شستشوی چندگانه، فاژهای کم میل ترکیبی یا غیر اختصاصی شسته می شوند و آنهایی که آنتی بادی های خاص را نشان می دهند، باقی می مانند.

کاربرد Phage Display

*کشف آنتی بادی در پزشکی مدرن اهمیت فزاینده ای پیدا کرده است. روش های مختلف کشف آنتی بادی وجود دارد، اما فناوری نمایش فاژ بیشتر در علم پزشکی استفاده می شود. از سال 1990، فرمت های آنتی بادی مختلف برای ساخت کتابخانه های فاژ استفاده شده است، از جمله VHs، VHHs، scFvs، diabodies و آنتی بادی های Fab.
*کتابخانه های پپتید فاژ امکان تعیین سریع توالی اپی توپ های پروتئینی را فراهم می کند و به ابزاری قدرتمند برای بررسی تعامل بین اپی توپ ها و گیرنده های آنتی ژن تبدیل شده است.
*قطعات آنتی بادی با G3P فاژ M13 ذوب می شوند و با شبیه سازی تعداد زیادی از ژن های کد کننده یک قطعه آنتی بادی، کتابخانه های بزرگ آنتی بادی نمایش فاژ می تواند تولید شود که از بین آنها آنتی بادی های متنوع زیادی می توان انتخاب کرد.
*سیستم نمایش فاژ T7 دارای مزایای بسیاری از جمله سادگی، ایمنی بالا، پایداری، ذخیره سازی و حمل و نقل آسان است، بنابراین از این سیستم در واکسن های پیشگیرانه و درمانی استفاده می شود.
*سیستم نمایش فاژ T7 می تواند آنتی ژن های مختلف مانند آنتی ژن های سطحی میکروارگانیسم های بیماری زا و آنتی ژن های سرطانی را تشخیص دهد.

فاژ