سرویس غربالگری کتابخانه نمایش فاژ
آلفا لایفتک سالهاست که عمیقاً در فناوری نمایش فاژ فعالیت دارد. این شرکت یک پلتفرم فناوری نمایش فاژ کاملاً پایدار ساخته است که در زمان تحقیقات علمی یا تحقیقات پروژه صرفهجویی کرده و تولید بعدی را تسهیل میکند. آلفا لایفتک همچنین میتواند خدماتی مانند تولید آنتیبادی vhh، تولید آنتیبادی scFv و تولید آنتیبادی Fab را به مشتریان ارائه دهد.
آلفا لایفتک دارای یک پلتفرم جامع نمایش فاژ M13/T7 است تا ساخت و تولید کتابخانههای آنتیبادی را تضمین کند. ما همچنین میتوانیم خدمات سفارشی مانند تولید آنتیبادی scFv و غربالگری آنتیبادی با توان عملیاتی بالا را برای رفع نیازهای شما ارائه دهیم.
فرآیند ساخت کتابخانه نمایش فاژ
فرآیند ساخت کتابخانه فاژ به شرح زیر است: پرایمرهای اختصاصی برای تکثیر PCR طراحی میشوند که محصولات را به دست میآورند، که با ناقل فاژ T7/M13 آنزیمی میشوند و پلاسمید فاژ نوترکیب با موفقیت ساخته میشود. پلاسمید فاژ نوترکیب به سلولهای گیرنده TG1 تبدیل شد، سپس روی محیطی حاوی آنتیبیوتیکهای مناسب پوشش داده شد و پس از غربالگری ترانسفورمرها، کشت گسترده انجام شد. پس از چندین دور کشت، فاژ زمانهای تکثیر را در باکتریها تکرار میکند و پروتئین یا پلیپپتید هدف را با موفقیت بیان میکند. سپس کتابخانه فاژ برای حذف برخی از ناخالصیها و فاژهای متصل نشده خالصسازی میشود.
روشهای غربالگری کتابخانه نمایش فاژ
موفقیت تولید آنتیبادی نمایش فاژ عمدتاً به کتابخانههای نمایش فاژ آنتیبادی بستگی دارد و روشهای رایج غربالگری فاژ، غربالگری فاز جامد و فاز مایع است. غربالگری آنتیژن فاز جامد، آنتیبادیهای اختصاصی را از طریق ۳ تا ۴ دور شستشو غنی میکند تا کتابخانههای نمایش فاژ آنتیبادی به دست آید. غربالگری آنتیژن فاز مایع با انکوباسیون کتابخانههای نمایش فاژ هدف و آنتیبادی نشاندار شده با بیوتین و گرفتن فاژهای متصل با استفاده از مهرههای مغناطیسی انجام میشود. غربالگری فاز جامد آنتیژن بیشتری مصرف میکند و برخی از اپیتوپهای آنتیژن از بین میروند. غربالگری فاز مایع با راندمان و غنیسازی بالا مشخص میشود، اما آنتیبادیهای بهدستآمده اختصاصیت کمتری دارند. روش غربالگری فاژ به نیازهای آزمایشی بستگی دارد که همه اینها تأثیر خاصی بر تأثیر تولید آنتیبادی نمایش فاژ خواهند داشت.
غربالگری آنتیبادی با بازدهی بالا
توسعه آنتیبادی در پزشکی مدرن به سرعت در حال پیشرفت است. روشهای مختلف توسعه آنتیبادی وجود دارد، اما غربالگری آنتیبادی با توان عملیاتی بالا بیشتر در علم پزشکی استفاده میشود. این فرآیند میتواند مقدار زیادی از تنوع مجموعه آنتیبادی را به دست آورد. ترکیب آن با روشهای سنتی غربالگری کتابخانه آنتیبادی میتواند کیفیت غربالگری کتابخانههای نمایش فاژ را بهبود بخشد. پس از غربالگری بیولوژیکی، آنتیبادیها را میتوان با ELISA با توان عملیاتی پایین یا غربالگری آنتیبادی با توان عملیاتی بالا مشخص کرد.

شکل 1 نمودار جریانی که توالی وقایع را از ساخت کتابخانههای آنتیبادی فاژ تا تولید آنتیبادیهای مونوکلونال با میل ترکیبی بالا برای آنتیژنها و ایمنیزایی پایین نشان میدهد.(منبع مرجع: فناوری نمایش فاژ به عنوان بستری قدرتمند برای کشف داروهای آنتیبادی - پی ام سی (nih.gov)
اقدامات احتیاطی برای غربالگری فاژ آنتیبادیموارد احتیاط
ملاحظات بافر
انتخاب بافرها باید پایداری هدف، ریزمحیط اتصال و حداقل اتصال غیر اختصاصی در سناریوی کاربرد واقعی را در نظر بگیرد. پروتئینهای غیرمرتبط، شویندههای غیر یونی و غلظت نمک فیزیولوژیکی برای کاهش پسزمینه مفید است. شرایط دیگری نیز وجود دارد، مانند اینکه برخی از اهداف ممکن است نیاز به افزودن کاتیونهای دو ظرفیتی یا سایر کوفاکتورها به بافر داشته باشند، کوفاکتورهای پروتئینی میتوانند با هدف تثبیت شوند، میتوانند به بافر مرتبسازی اضافه شوند و حتی میتوانند به عنوان وسیلهای برای گرفتن هدف استفاده شوند.
ملاحظات فشار
ملاحظات رایج فشار انتخاب شامل غلظت مولکولهای هدف، زمان اتصال، شدت شستشو و غیره است. سایر تکنیکها برای افزایش فشار انتخاب شامل استفاده از دناتورهکنندهها (مانند اسیدها، اوره و گوانیدین)، حلالهای آلی، افزایش دما یا افزایش غلظت لیگاندها یا اهداف رقیب در بافر شستشو است.
در میان آنها، دور اول غربالگری مهم است. دور اول غربالگری، به دام انداختن هرچه بیشتر کلونهای مثبت از کتابخانه ساخته شده و در عین حال حذف کلونهای غیر اختصاصی است. باید از اهداف پوشش داده شده با متخلخل یا تعداد زیادی از اهداف محلول استفاده شود تا اطمینان حاصل شود که تعداد زیادی از فاژهای متصل به منظور حفظ تنوع کتابخانه به دام افتادهاند. در دورهای بعدی غربالگری، فشار انتخاب باید با افزایش غنیسازی، شستشوی مکرر و افزایش زمان شستشو افزایش یابد، کلونهایی با میل ترکیبی بالا میتوانند غربالگری شوند.
در میان آنها، دور اول غربالگری مهم است. دور اول غربالگری، به دام انداختن هرچه بیشتر کلونهای مثبت از کتابخانه ساخته شده و در عین حال حذف کلونهای غیر اختصاصی است. باید از اهداف پوشش داده شده با متخلخل یا تعداد زیادی از اهداف محلول استفاده شود تا اطمینان حاصل شود که تعداد زیادی از فاژهای متصل به منظور حفظ تنوع کتابخانه به دام افتادهاند. در دورهای بعدی غربالگری، فشار انتخاب باید با افزایش غنیسازی، شستشوی مکرر و افزایش زمان شستشو افزایش یابد، کلونهایی با میل ترکیبی بالا میتوانند غربالگری شوند.
استراتژی غربالگری منفی
برچسبهای آنتیژن و مواد حامل. فرآیند غربالگری شامل غربالگری تمام مواد موجود در ترکیبات آنتیژن، مانند برچسبها، پروتئینهای فیوژن و سوبستراهای پشتیبان است. غربالگری منفی موارد غیر هدف میتواند غنیسازی آنتیبادیهایی غیر از آنتیژن هدف را محدود کند.
سلولهای کامل، لیپوزومها، دیسکهای نانوفسفولیپید و VLPها را میتوان با استفاده از سلولهای ترانسفکتشده شبیهسازیشده یا سلولهای ترانسفکتنشده هنگام غربالگری ردههای سلولی ترانسفکتشده، به صورت منفی غربالگری کرد.
حذف مخلوطهای پیچیده آنتیژن غربالگری منفی دقیق میتواند برای مولکولهای هدف ناشناخته یا پیچیده، مانند سلولهای کامل یا پروتئینهای ناخالص، انجام شود.
استراتژی آنتیبادیها علیه جایگاههای خاص آنتیژنها، یکی شستشوی آنتیبادی است که میتواند با لیگاند رقابت کند، با افزودن غلظت بالایی از لیگاندها، و دیگری مسدود کردن آنتیبادی است.
سلولهای کامل، لیپوزومها، دیسکهای نانوفسفولیپید و VLPها را میتوان با استفاده از سلولهای ترانسفکتشده شبیهسازیشده یا سلولهای ترانسفکتنشده هنگام غربالگری ردههای سلولی ترانسفکتشده، به صورت منفی غربالگری کرد.
حذف مخلوطهای پیچیده آنتیژن غربالگری منفی دقیق میتواند برای مولکولهای هدف ناشناخته یا پیچیده، مانند سلولهای کامل یا پروتئینهای ناخالص، انجام شود.
استراتژی آنتیبادیها علیه جایگاههای خاص آنتیژنها، یکی شستشوی آنتیبادی است که میتواند با لیگاند رقابت کند، با افزودن غلظت بالایی از لیگاندها، و دیگری مسدود کردن آنتیبادی است.
کاربرد نمایش فاژ
*کشف آنتیبادی در پزشکی مدرن به طور فزایندهای اهمیت یافته است. رویکردهای مختلفی برای کشف آنتیبادی وجود دارد، اما فناوری نمایش فاژ بیشتر در علم پزشکی استفاده میشود. از سال ۱۹۹۰، از قالبهای مختلف آنتیبادی برای ساخت کتابخانههای فاژ، از جمله VHها، VHHها، scFvها، دیابادیها و آنتیبادیهای Fab استفاده شده است.
کتابخانههای پپتید فاژ امکان تعیین سریع توالی اپیتوپهای پروتئین را فراهم میکنند و به ابزاری قدرتمند برای بررسی برهمکنش بین اپیتوپها و گیرندههای آنتیژن تبدیل شدهاند.
قطعات آنتیبادی به G3P فاژ M13 متصل میشوند و با کلون کردن تعداد زیادی از ژنهای کدکننده یک قطعه آنتیبادی، میتوان کتابخانههای آنتیبادی نمایش فاژ بزرگی تولید کرد که از بین آنها میتوان آنتیبادیهای متنوع زیادی را انتخاب کرد.
*سیستم نمایش فاژ T7 مزایای زیادی از جمله سادگی، ایمنی بالا، پایداری، ذخیرهسازی و حملونقل آسان دارد، بنابراین از این سیستم در واکسنهای پیشگیرانه و درمانی استفاده میشود.
*سیستم نمایش فاژ T7 میتواند آنتیژنهای مختلفی مانند آنتیژنهای سطحی میکروارگانیسمهای بیماریزا و آنتیژنهای سرطانی را شناسایی کند.
کتابخانههای پپتید فاژ امکان تعیین سریع توالی اپیتوپهای پروتئین را فراهم میکنند و به ابزاری قدرتمند برای بررسی برهمکنش بین اپیتوپها و گیرندههای آنتیژن تبدیل شدهاند.
قطعات آنتیبادی به G3P فاژ M13 متصل میشوند و با کلون کردن تعداد زیادی از ژنهای کدکننده یک قطعه آنتیبادی، میتوان کتابخانههای آنتیبادی نمایش فاژ بزرگی تولید کرد که از بین آنها میتوان آنتیبادیهای متنوع زیادی را انتخاب کرد.
*سیستم نمایش فاژ T7 مزایای زیادی از جمله سادگی، ایمنی بالا، پایداری، ذخیرهسازی و حملونقل آسان دارد، بنابراین از این سیستم در واکسنهای پیشگیرانه و درمانی استفاده میشود.
*سیستم نمایش فاژ T7 میتواند آنتیژنهای مختلفی مانند آنتیژنهای سطحی میکروارگانیسمهای بیماریزا و آنتیژنهای سرطانی را شناسایی کند.
فاژ
0102۰۳04
0102۰۳04۰۵
0102۰۳
If you have any questions, please feel free to contact us at any time.
Leave Your Message
0102















2018-07-16 

