Aptamer-kehitysalusta

Aptameerit ovat yksijuosteisia oligonukleotideja (DNA, RNA tai XNA), joilla on korkea affiniteetti ja korkea spesifisyys ja jotka sitoutuvat spesifisesti kohdemolekyyleihin, kuten vasta-aineisiin, ja niitä käytetään laajasti biosensorien kehittämiseen, diagnoosiin ja hoitoon.

Alpha Lifetechin tarjoama aptameerialusta sisältää kaksi luokkaa: aptameerisynteesialusta, joka sisältää pääasiassa SELEX-aptameerikirjaston synteesipalvelun ja aptameerin (DNA, RNA tai XNA) kehityspalvelun, ja aptameeriseulonta-alustan, joka sisältää SELEX-teknologiaan perustuvat seulontapalvelut proteiineille, peptideille, soluille, pienille molekyyleille, metalli-ioneille, sekä kohde- ja loppuvaiheen analyysi- ja analyysipalveluina.

Aptamer-synteesialusta

SELEX aptamer -kirjaston synteesipalvelu

SELEX-aptameerikirjaston synteesipalveluun kuuluu pääasiassa suuren määrän satunnaisia yksijuosteisia oligonukleotidisekvenssejä sisältävän kirjaston rakentaminen in vitro -kemiallisella synteesillä kohdemolekyylien mukaisesti. Kirjaston rakentaminen on SELEX-teknologian lähtökohta, joka tarjoaa runsaasti ehdokassekvenssejä myöhempään seulontaprosessiin rakentamalla valtavia satunnaisia kirjastoja ja lisää mahdollisuutta seuloa korkean affiniteetin aptameerejä.

Kirjaston synteesi on jaettu pääasiassa seuraaviin vaiheisiin:

Vaiheet	Tekniikan yksityiskohdat
Tunnista kohdemolekyylit	Tunnista kohdemolekyylit, jotka on seulottava aptameerien varalta. Ne voivat olla proteiineja, nukleiinihappoja, pienmolekyylisiä, metalli-ioneja jne.
Satunnainen sekvenssisuunnittelu	Satunnaissekvenssin pituus, emäskoostumus ja muut parametrit suunniteltiin kohdemolekyylien ominaisuuksien ja seulontavaatimusten mukaan. Tyypillisesti satunnaiset sekvenssit ovat pituudeltaan kymmeniä ja satoja emäksiä.
Kiinteiden sekvenssien synteesi	Oligonukleotidifragmentit, joissa on kiinteät sekvenssit (kuten PCR-alukesekvenssit) molemmissa päissä, suunnitellaan ja syntetisoidaan, joita käytetään myöhemmässä monistus- ja seulontaprosessissa.

Syntetisoitua kirjastoa on vielä prosessoitava laadunvalvontaa varten. Kirjaston pitoisuus määritettiin sen sovellettavuuden varmistamiseksi myöhemmässä seulontaprosessissa. Kirjaston satunnaisten sekvenssien monimuotoisuus ja tarkkuus varmistettiin sekvensoinnilla ja muilla menetelmillä sen varmistamiseksi, että kirjaston laatu täytti seulontavaatimukset.

Yllä olevien vaiheiden avulla voidaan syntetisoida korkealaatuinen ja erittäin monipuolinen SELEX-aptameerikirjasto, joka voi tarjota runsaasti ehdokassekvenssejä myöhempää seulontaprosessia varten.

Aptamer-kehityspalvelut (DNA, RNA tai XNA)

Aptameerit viittaavat yleensä nukleiinihappoaptameereihin. Nukleiinihappoaptameerit sisältävät DNA-aptameerit, RNA-aptameerit ja XNA-aptameerit, jotka ovat kemiallisesti modifioituja nukleiinihappoaptameerejä. SELEX-tekniikkaa käytetään laajalti aptameerien kehittämiseen. Aptamer-kehityspalveluiden perustyönkulku sisältää kirjaston rakentamisen, kohteen sitomisen, eristämisen ja puhdistamisen, monistamisen, useat seulontakierrokset ja sekvenssin tunnistamisen. Olemme useiden vuosien ajan keskittyneet kirjaston rakentamiseen ja rikkaaseen kokemukseen aptamer-kehityksestä. Olemme sitoutuneet tarjoamaan asiakkaille parempia palveluita.

SELEX-teknologiaprosessi

SELEX-prosessi koostuu useista kierroksista, joista jokainen koostuu seuraavista avainvaiheista:

Kirjasto ja kohdesidonta

Muodostettu nukleiinihappokirjasto sekoitetaan spesifisiin kohdemolekyyleihin (kuten proteiineihin, pienimolekyylisiin yhdisteisiin jne.), jotta kirjaston nukleiinihapposekvensseillä on mahdollisuus sitoutua kohdemolekyyleihin.

Sitoutumattomien molekyylien eristäminen

Nukleiinihapposekvenssit, jotka eivät ole sitoutuneet kohdemolekyyliin, erotetaan seoksesta erityisillä menetelmillä, kuten affiniteettikromatografialla, magneettihelmien erotuksella jne.

Sitovien molekyylien monistaminen

Kohdemolekyyliin sitoutunut nukleiinihapposekvenssi monistetaan tavallisesti käyttämällä polymeraasiketjureaktiotekniikkaa (PCR). Seuraavaa seulontavaihetta varten monistettuja sekvenssejä käytetään aloituskirjastona.

Kuva 1: SELEX-seulontaprosessi

Aptamer-seulontaalusta

Aptamer seulontapalvelu

Alpha Lifetech tarjoaa laajan valikoiman erikoistuneita aptameeriseulontapalveluita, joissa käytetään erilaisia SELEX-menetelmiä erityyppisille molekyyleille:

Kohdetyypit	Tekniset tiedot
SELEXin proteiini-aptameeriseulonta	Proteiiniaptameeriseulonnan päätarkoitus on seuloa aptameerit, jotka voivat sitoutua spesifisesti kohdeproteiinimolekyyleihin. Nämä aptameerit ovat yksinkertaisemmin syntetisoitavia, vakaampia ja vähemmän herkkiä ympäristötekijöille.
SELEXin peptidiaptameeriseulonta	Peptidiaptameerit ovat luokka lyhyitä peptidisekvenssejä, joilla on korkea spesifisyys ja affiniteetti ja jotka voivat sitoutua spesifisesti kohdeaineisiin ja joilla on laaja käyttöpotentiaali biolääketieteen alalla. Spesifisen seulontaprosessin avulla peptidiaptameerit, jotka voivat sitoutua spesifisesti kohdemolekyyleihin, seulotaan suuresta määrästä satunnaisia peptidisekvenssikirjastoja.
Solukohtainen aptameeriseulonta (Cell-SELEX)	Kohdesolut tai solun pinnalla olevat spesifiset molekyylit valmistetaan kohteiksi. Kohteet voivat olla kokonaisia soluja, solukalvon reseptoreita, proteiineja tai muita pieniä molekyylejä.
Capture SELEXin Small Molecule Aptamer -seulonta	Capture SELEX on in vitro -seulontatekniikka pienimolekyylisten aptameerien seulomiseen, joka on SELEXin muunnos. Capture SELEX sopii erityisen hyvin pienimolekyylisten kohteiden aptameeriseulomiseen, joissa on tyypillisesti vähemmän funktionaalisia ryhmiä ja joita on vaikea immobilisoida suoraan kiinteän faasin alustalle.
Eläviin eläimiin perustuvat SELEX-palvelut	Eläviin eläimiin perustuva seulontapalvelu on biotieteen, lääketieteen ja biotekniikan aloilla laajalti käytetty kokeellinen tekniikka, jossa eläviä eläimiä käytetään kokeellisina malleina tiettyjen molekyylien, lääketieteen, terapeuttisten tai biologisten prosessien seulomiseen ja arvioimiseen. Palvelut on suunniteltu simuloimaan ihmiskehon fysiologista ympäristöä, jotta voidaan tarkemmin ennustaa ja arvioida koetulosten tehokkuutta ja turvallisuutta ihmiskehossa.

Aptamer-optimointipalvelu

Hydrofiilisyys, korkea affiniteettihäviö tuotannon aikana ja aptameerien nopea erittyminen rajoittavat niiden käyttöä. Tällä hetkellä on tutkittu erilaisia optimointimenetelmiä aptameerien suorituskyvyn parantamiseksi.

Meillä on myös useita tapoja optimoida aptameeri, joka koostuu katkaisusta, modifikaatioista, konjugoinnista sopivaan ryhmään (tioli, karboksi, amiini, fluorofori jne.).

Aptamer karakterisointianalyysipalvelu

Aptamer karakterisointianalyysipalvelulla tarkoitetaan ammattimaista palvelua suorituskyvyn arvioinnin rakenneresoluutioon ja saadun aptameerin toiminnallisuuteen sen varmistamiseksi, että aptameeri täyttää tietyt sitoutumiskyky-, stabiilisuus- ja spesifisyysvaatimukset. Se sisältää pääasiassa affiniteetti- ja spesifisyysanalyysin, stabiilisuuden arvioinnin ja biologisen toiminnan todentamisen.