Bispesifisen vasta-aineen kehitysalusta
Alpha Lifetech tarjoaa asiakkaille laadukkaita vasta-aineiden löytö- ja rekombinanttiproteiinituotteita ja -palveluita. Pystymme valmistamaan vasta-aineita, joilla on korkea tehokkuus, vahva spesifisyys ja hyvä stabiilius. Alpha Lifetechillä on laaja valikoima vasta-aineiden puhdistuslaitteita ja -instrumentteja, jotka tarjoavat vasta-aineiden puhdistuspalveluita eri lähteistä, kuten kanin, lampaan, kanan ja hiiren monoklonaalisista vasta-aineista, sekä proteiini A/G -affiniteettipuhdistuspalveluita ja vasta-aineiden erotus- ja puhdistuspalveluita. Kattavan vasta-aineiden löytöalustan, proteiinialustan jne. alustajärjestelmän ansiosta katamme vasta-aineiden tuotannon ylä- ja alavirran palvelut ja voimme tarjota teknisiä palveluita vasta-aineiden valmistuksesta, bispesifisen vasta-aineen puhdistuksesta ja erottelusta ja puhdistuksesta, vasta-aineiden sekvensoinnista, vasta-aineiden validoinnista jne., joita voidaan käyttää bispesifisen vasta-aineen terapiassa.
Monoklonaalisilla vasta-aineilla tarkoitetaan yhden B-solun tuottamia immunoglobuliineja, joilla on korkea spesifisyys antigeeneille tai epitoopeille. Monoklonaalisten vasta-aineiden tuotantoa valmisteltiin alun perin hybridoomatekniikalla hiiren vasta-aineiden tuottamiseksi. Tarkemmin sanottuna yhdistämällä immunisoitujen hiirten pernasoluja ihmisen tai hiiren myeloomasoluihin muodostuu hybridoomasoluja, jotka erittävät spesifisiä vasta-aineita. Tuotettuja hiiren monoklonaalisia vasta-aineita käytetään pääasiassa eläintutkimuksessa ja tautien diagnosoinnissa puhdistuspalveluiden jälkeen. Ihmiskeho tuottaa kuitenkin immuunivasteen vieraille hiiren proteiineille, joten hiiren monoklonaalisten vasta-aineiden tuotannon kliinisessä käytössä on merkittäviä rajoituksia. Myöhemmin ihmiset käyttivät "humanisointia" monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi hiiristä ja geenitekniikan tekniikkaa hiiren vasta-aineiden modifioimiseksi siten, että niissä on vakio ihmisen immunoglobuliinin alue niiden immunogeenisuuden vähentämiseksi. Tämän tyyppistä vasta-ainetta kutsutaan myös humanisoiduksi monoklonaaliseksi vasta-aineeksi. Lisäksi ihmissolujen käyttöä monoklonaalisten vasta-aineiden tuottamiseen kutsutaan kokonaisten ihmisen monoklonaalisten vasta-aineiden valmistukseksi. Monoklonaalisia vasta-aineita käytetään laajalti biolääketieteellisissä ja kliinisissä sovelluksissa. Lääketieteellisessä tutkimuksessa monoklonaalisia vasta-aineita voidaan käyttää immunomodulaattoreina, terapeuttisia monoklonaalisia vasta-aineita voidaan käyttää syövän kemoterapiaan ja virusinfektioiden hoitoon, ja monoklonaalisten vasta-aineiden konjugaattien kehittämistä käytetään pääasiassa syövän hoitoon.
Johdatus bispesifiseen vasta-aineeseen
Vuonna 1960 esitettiin bispesifisten vasta-aineiden käsite. Bispesifiset vasta-aineet, jotka tunnetaan myös bispesifisinä monoklonaalisina vasta-aineina, ovat keinotekoisesti syntetisoituja vasta-aineita, jotka on valmistettu geenitekniikan avulla. Keinotekoisina vasta-aineina bispesifiset vasta-aineet kuuluvat yleensä IgG-alaluokkaan ja sisältävät antigeeniä sitovan fragmentin, joka kohdistuu CD3-alayksikköön. Bispesifisillä vasta-aineilla on kaksi spesifistä antigeeniä sitovaa kohtaa, jotka voivat samanaikaisesti sitoutua ja tunnistaa kaksi eri antigeeniä tai kaksi eri antigeenin epitooppia. Monoklonaalisiin vasta-aineisiin verrattuna bispesifisillä vasta-aineilla on yksi ylimääräinen spesifinen antigeeniä sitova kohta, joten niillä on vahvempi spesifisyys ja kohdistuskyky, mikä voi kohdistaa kohdennuksen tarkemmin kasvainsoluihin ja vähentää kohteen ulkopuolista toksisuutta. Bispesifiset vasta-aineet voivat samanaikaisesti suorittaa useita biologisia toimintoja, kuten rekrytoida immuunisoluja, estää signalointireittejä ja tappaa kasvainsoluja suoraan. Varhaiset bispesifiset vasta-aineet valmistettiin pääasiassa kemiallisella konjugaatiolla tai solufuusiolla, mutta tämä menetelmä on saattanut edetä hitaasti satunnaisen yhdistelmän ja kohdeyhdistelmän eristämisen vaikeuden vuoksi. Geenitekniikan jatkuvan kehityksen myötä on kehitetty monia uusia teknologia-alustoja, kuten knots in holes (KIH), CrossMab, DVD Ig jne. Nämä alustat ratkaisevat tehokkaasti ongelmia, kuten raskas- ja kevytketjujen yhteensopimattomuudet, ja parantavat bispesifisten vasta-aineiden tasalaatuisuutta ja saantoa.

Kuva 1. Yksinkertaistettu kaaviokuva ehdotetuista bispesifisten vasta-aineiden (bsAb) vaikutusmekanismeista onkologisissa kliinisissä tutkimuksissa.(Kuvan lähde: Katsaus bispesifisiin vasta-aineisiin ja vasta-ainerakenteisiin onkologiassa ja kliinisissä haasteissa - ScienceDirect)
Bispesifisten vasta-aineiden tuotantotekniikka
Bispesifisen vasta-aineen tuotantoon käytetään pääasiassa kemiallista kytkentää, neljän lähteen hybridoomaa ja geenitekniikan vasta-aineiden valmistusta. Kemiallisessa kytkentämenetelmässä kaksi ehjää IgG:tä tai kaksi F(ab')2-vasta-ainefragmenttia kytketään bispesifisiksi vasta-aineiksi käyttämällä kemiallisia kytkentäaineita, kuten ftalimidiä ja ditioasyylibentsoehappoa. Tämä menetelmä on yksinkertainen ja helppokäyttöinen, mutta se voi vahingoittaa antigeenin sitoutumiskohtaa, vähentää vasta-aineen aktiivisuutta ja itse kytkentäaineella on myös tietty karsinogeenisuusaste. Neljän lähteen hybridoomamenetelmä perustuu kahden eri hybridoomasolulinjan somaattisten solujen fuusioon vastaavan hiiren IgG:n ilmentämiseksi. Geenitekniikan avulla vasta-aineita voidaan geneettisesti muokata bispesifisten vasta-aineiden muodostamiseksi. Kaksi erilaista monoklonaalista vasta-ainetta konstruoitiin, ja molempien vasta-aineiden Fab-fragmentit tai raskas- ja kevytketjujen vaihtelevat alueet pilkottiin erikseen. Ristisilloitusreaktion tai ketjurekombinaatiotekniikan avulla nämä kaksi fragmenttia yhdistettiin bispesifisen vasta-aineen muodostamiseksi. Vaikka geenitekniikan monimutkaisuus on suhteellisen korkea, se on tällä hetkellä yleisimmin käytetty menetelmä bispesifisen vasta-aineen tuotantoon vasta-aineiden rakenteen ja toiminnan säätämiseksi. Bispesifisen vasta-aineen suunnittelussa voidaan hyödyntää vasta-aineiden ristireaktiivisuuden periaatetta, mutta vasta-aineiden ristireaktiivisuus voi aiheuttaa epäspesifisiä reaktioita, joten sitä harkitaan huolellisesti bispesifisen vasta-aineen suunnittelun käytännön sovelluksissa, kuten bispesifisessä vasta-aineterapiassa.
Bispesifisten vasta-aineiden puhdistus
Bispesifisen vasta-aineen puhdistus on prosessi, jossa eristetään ja puhdistetaan erittäin puhtaita kohdevasta-aineita. Joidenkin liukoisten epäpuhtauksien poistamiseen käytetään kahta menetelmää, sentrifugointia ja syväsuodatusta. Kohdebispesifinen vasta-aine otetaan aluksi talteen affiniteettikromatografialla. IgG:n kaltaisille bispesifisille vasta-aineille käytetään proteiini A:n affiniteettikromatografiaa, kun taas ei-IgG:n kaltaisille bispesifisille vasta-aineille voidaan käyttää kevytketjupohjaista affiniteettikromatografiaa. Tämän jälkeen vasta-ainetta inkuboidaan alhaisessa pH:ssa tietyn ajan, jolloin viruskuoren pinnalla oleva proteiinirakenne häiriintyy ja se menettää kyvyn infektoida soluja. Välivaiheen syväsuodatus suoritetaan epäpuhtauksien, kuten isäntäsoluproteiinien (HCP), poistamiseksi edelleen. Vasta-aineiden puhtautta parannetaan menetelmillä, kuten ioninvaihtokromatografialla, ja mahdolliset jäännösvirukset poistetaan nanosuodatus- tai ultrasuodatustekniikoilla. Lopuksi näyte konsentroidaan ja korvataan sopivalla formulaatiopuskurilla.
Bispesifisten vasta-aineiden tuotantopalvelun työnkulku
| Askeleet | Palvelun sisältö | Aikajana |
|---|---|---|
| Geenisynteesi | Jopa kolmen erilaisen sekvenssisuunnittelujärjestelmän luominen, rekombinanttien vasta-aine-DNA-plasmidien de novo -luonti | 2–3 viikkoa |
| Pienimuotoinen testi | Bispesifisten vasta-aineproteiinien tuotanto → Pienimuotoinen ilmentyminen nisäkässolulinjoissa → Validointi SDS-PAGE:lla → Sitoutumisanalyysi rekombinanttiproteiiniantigeeneilla ELISA:lla → Kloonien vertailu vanhempien vasta-aineiden kanssa | 5–6 viikkoa |
| Tunnistaa | Kahden ensimmäisen täyspitkän bispesifisen vasta-aineen ilmentyminen → Sitoutumisanalyysi ELISA:lla → Hiirivasta-aineiden tunnistamien vasta-aineiden ELISA-arviointi | 1 viikko |
| Vasta-aineiden tuotanto | Laajamittainen vasta-aineiden tuotanto | 3–4 viikkoa |
Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä milloin tahansa.
Leave Your Message
0102






2018-07-16 

