Johdatus syntetisoituihin vasta-ainekirjastoihin

Syntetisoitu vasta-ainekirjasto, joka tunnetaan myös nimellä de novo -kirjasto, on synteettinen menetelmä, jossa käytetään tekniikoita, kuten DNA-synteesiä tai faaginäyttöä, vasta-aineiden täydellisten variaabelialueiden, mukaan lukien runkoalueet ja CDR:t, suunnitteluun ja syntetisointiin ilman, että tarvitaan naiivisia vasta-ainekirjastoja.

Puolisynteettinen vasta-ainekirjasto luodaan yhdistämällä luonnossa esiintyviä vasta-ainekirjastoja synteettiseen monimuotoisuuteen. Se sisältää yleensä DNA-oligonukleotidien syntetisoinnin, jolloin tuotetaan joukko erilaisia ​​komplementaarisia määrittäviä alueita (CDR), jotka sitten yhdistetään luonnollisista lähteistä, kuten ihmisen tai eläimen B-soluista, peräisin olevaan vakioon vasta-ainerunkoon. Syntetisoitu CDR tuo kirjastoon monimuotoisuutta, jolloin saadaan vasta-aineita, jotka kohdistuvat laajaan valikoimaan epitooppeja. Puolisynteettinen vasta-ainekirjasto tarjoaa kompromissin immuunijärjestelmän luonnollisen monimuotoisuuden ja synteettisillä menetelmillä saavutetun kontrolloidun monimuotoisuuden välillä.

Naiivien ja synteettisten vasta-ainekirjastojen välinen ero riippuu immunoglobuliinigeenien lähteestä. Puolisyntetisoidun ja syntetisoidun vasta-ainekirjaston välinen ero on siinä, että ensin mainittu koostuu osasta naiivisia vasta-ainesegmenttejä, kuten kevyttä tai raskasta ketjua, ja vain toinen niistä syntetisoidaan in vitro; kun taas syntetisoitu kirjasto on kokonaan peräisin keinotekoisesta PCR-synteesistä in vitro.

Alpha Lifetech voi tarjota

Alpha Lifetech Inc.Voimme tarjota puolisyntetisoituja/syntetisoituja vasta-ainekirjastoja eläimistä ja ihmisistä ammattimaisen vasta-aineiden löytöalustamme pohjalta. Vuosien kokemuksella geneettisestä muuntelusta ja kirjastojen rakentamisesta voimme rakentaa syntetisoituja kirjastoja, jotka pystyvät tuottamaan synteettisiä vasta-aineita, joiden affiniteetti ja spesifisyys ylittää luonnollisten vasta-aineiden kapasiteetin.Alpha LifetechinAsiantuntijat ovat ylpeitä voidessaan ilmoittaa, että voimme taata korkean onnistumisprosentin 10^8 – 10^10 itsenäistä kloonia sisältävän vasta-ainekirjaston rakentamisessa.

Alpha Lifetech Inc.on ylpeä voidessaan tarjota kattavia vasta-ainekirjastojen rakennuspalveluita vastatakseen maailmanlaajuisten tutkijoiden monipuolisiin tarpeisiin, mukaan lukien scFv-, Fab-, VHH-vasta-aine- ja räätälöidyt kirjastot. Tavoitteenamme on ymmärtää ja vastata erilaisten asiakkaiden tarpeisiin sekä auttaa tutkimustyön tulevissa ja esiin nousevissa ongelmissa.

Syntetisoitujen vasta-ainekirjastojen rakennuspalveluprosessi

Design
Suunnitteluvaiheeseen kuuluu vasta-aineiden runkojen ja komplementaarisuutta määrittävien alueiden (CDR) valinta olemassa olevien vasta-ainesekvenssien tai rakennetietojen perusteella. Synteettisiä CDR-vasta-aineita voidaan myös suunnitella lisäämään tiettyjä toiminnallisuuksia tai parantamaan sitoutumisominaisuuksia.

Synteesi
Suunniteltuja vasta-ainesekvenssejä koodaava synteettinen DNA, mukaan lukien sekä runkoalueet että CDR:t, syntetisoidaan kemiallisilla tai entsymaattisilla menetelmillä.

Kokoonpano
Syntetisoidut DNA-fragmentit kootaan vasta-aineiden ilmentämisvektoreiksi käyttämällä tekniikoita, kuten PCR:ää, ligaatiota tai Gibsonin kokoamista. Nämä vektorit voidaan sitten viedä ilmentämisjärjestelmiin, kuten bakteeri-, hiiva- tai nisäkässoluihin, vasta-aineiden tuotantoa varten.

Seulonta ja valinta
Rakennetuista vasta-ainekirjastoista seulotaan ja valitaan haluttujen ominaisuuksien omaavia vasta-aineita käyttämällä suuritehoisia seulontamenetelmiä. Tämä voi sisältää tekniikoita, kuten faaginäyttöä, hiivanäyttöä tai ribosominäyttöä kirjaston muodosta ja sovelluksesta riippuen.

Syntetisoitujen vasta-ainekirjastojen rakennuspalvelu

Alpha Lifetech Inc.tarjoaa asiakkaille kokonaisvaltaisen vasta-ainekirjastojen suunnittelu- ja syntetisointipalvelun ligatoimalla raskaan ja kevyen ketjun V-geenirepertuaarit faagivektoriin käyttämällä Cre-lox-kohtaspesifistä rekombinaatiojärjestelmää, jolloin luodaan faagilla esitettävien Fab-molekyylien repertuaari, joka käsittää 6,5 × 10^10 kloonia. Kirjasto tuotti vasta-aineita lukuisia antigeenejä vastaan, joista joillakin oli nanomolaarinen affiniteetti. Ihmisen vasta-ainekirjaston luominen perustuu M13-faaginäyttötekniikkaan (esitetty alla olevassa kuvassa).