Plateforme d'immunisation animale

Les sources animales d'Alpha Lifetech sont transparentes, avec des permis d'inspection et de quarantaine, des profils génétiques clairs, une fréquence de vaccination clairement définie et des enregistrements détaillés des intervalles de vaccination, offrant ainsi des services pratiques pour la production d'anticorps. L'entreprise vaccine principalement des camélidés (alpagas, limaces et chameaux), jetant les bases de la production de nanocorps. Elle peut également vacciner des animaux communs (comme les lapins blancs de Nouvelle-Zélande, les souris et autres) selon les exigences de fréquence de vaccination et d'immunogénicité des clients, extraire et isoler les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) et les utiliser pour des expériences ultérieures (développement d'anticorps monoclonaux et polyclonaux, etc.). Les clients peuvent fournir leurs propres immunogènes, qui feront l'objet d'un contrôle qualité rigoureux. Si les immunogènes fournis sont viraux, ils doivent être inactivés et nous effectuons des tests d'inactivation pour garantir leur innocuité. Par ailleurs, nous pouvons également personnaliser les immunogènes en fonction des besoins des clients.

Introduction à la vaccination animale

Lors de la production d'anticorps d'origine animale, tels que les anticorps monoclonaux, polyclonaux et les nanocorps, la première étape consiste à immuniser les animaux afin d'obtenir les lymphocytes B, les anticorps ou les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) correspondants. Cette étape prépare la production d'anticorps, favorise la recherche fondamentale, développe des outils de diagnostic clinique et facilite la découverte et le développement de nouveaux médicaments. Les chameaux, les alpagas, les liamas et autres camélidés peuvent servir à la production de banques de nanocorps (anticorps à domaine unique) par prélèvement sanguin et extraction de PBMC. Les lapins et autres animaux peuvent être immunisés et les anticorps extraits de leur organisme. Après purification, ces anticorps permettent de produire des anticorps polyclonaux. Les souris, les rats, etc., peuvent être utilisés pour produire des anticorps monoclonaux par fusion de lymphocytes B extraits après immunisation avec des cellules de myélome. Avant l'immunisation, il convient d'appliquer les principes des 3R (remplacement, réduction, raffinement), qui permettent de réduire considérablement le nombre d'animaux utilisés au minimum nécessaire, d'améliorer les protocoles expérimentaux et de minimiser la souffrance animale. Une conception expérimentale rigoureuse, la sélection d'anticorps appropriés et des procédures de validation strictes sont également indispensables.

Classification des immunogènes - production de nanocorps

Types d'immunogènes	Exemple	Préparation d'immunogène	Notes
Immunogènes protéiques	Enzymes, protéines, toxines bactériennes et autres substances	Choisissez différents systèmes d'expression protéique : E. coli, levure, cellules d'insectes, cellules de mammifères et système acellulaire	Soyez attentif aux facteurs tels que la température, le temps, le pH et les corps d'inclusion qui affectent l'expression des protéines.
Immunogènes d'acides nucléiques	ADN, ARN	Immunogène d'ADN : Construire l'ADN plasmidique, cloner des vecteurs d'expression adaptés aux gènes cibles, cultiver des cellules pour amplifier l'ADN plasmidique et extraire un ADN plasmidique de haute pureté. Immunogène ARN : il est nécessaire d’ajouter une structure en chapeau et une queue polyA pour prévenir la dégradation.	Lors de la préparation d'immunogènes d'ADN, il convient de veiller au choix des cellules hôtes appropriées, et lors de la préparation d'immunogènes d'ARN, il convient de veiller à prévenir la dégradation de l'ARN.
Immunogènes viraux	Vaccin inactivé à virus entier, vaccin sous-unitaire, vaccin à vecteur viral (adénovirus, lentivirus, etc.), vaccin mRAN.	Lors de la préparation d'un vaccin à virus entier inactivé, le virus est d'abord inactivé afin d'en accroître la sécurité. Des tests de toxicité permettent de vérifier que l'inactivation est complète. Les vaccins sous-unitaires, quant à eux, n'utilisent que les protéines de surface du virus comme antigènes et doivent prendre en compte leur efficacité immunitaire.	Des adjuvants doivent être ajoutés pour induire des effets immunitaires, une attention particulière doit être portée au virus à inactiver, des titres viraux appropriés sont nécessaires pour garantir les effets immunitaires, et la sécurité du processus de préparation doit être strictement contrôlée.

Processus ou calendrier de vaccination animale

Sélection des animaux et préparation des antigènes

Sélection des animaux : Sélectionner des alpagas d’âge approprié et de constitution saine au sein de groupes sains, et effectuer un examen sanguin et un dépistage des maladies afin de s’assurer de l’absence de maladies infectieuses ou d’autres problèmes de santé.

Préparation des immunogènes : Les immunogènes sont essentiels pour induire des réponses immunitaires et nécessitent la sélection de protéines, de peptides ou d’autres substances appropriées en fonction des besoins de l’anticorps cible.

Un alpaga peut être immunisé simultanément avec 1 à 3 antigènes, la quantité totale d'antigène étant de 1 à 2 mg par immunisation et le volume inférieur à 2 mL. Avant l'immunisation, l'antigène et l'adjuvant sont émulsifiés à parts égales (1:1) pour former un mélange homogène, qui est conservé à 4 °C.

Alpaga immunologique

Notez le numéro de l'oreille vierge de l'alpaga et commencez l'expérience d'immunisation. Injectez environ 0,4 ml d'antigène émulsionné dans les ganglions lymphatiques situés près du cou, des deux côtés, en deux points de chaque côté. Après l'immunisation, observez l'alpaga pendant une demi-heure afin de vérifier l'absence de symptômes. L'immunisation doit être administrée toutes les deux semaines, pour un minimum de quatre injections.

Prélèvement sanguin

Après 4 immunisations sur 5 à 7 jours, prélever 50 ml de sang dans la veine jugulaire de l'alpaga.

Séparation du sérum

Des échantillons de sang sont prélevés pour évaluation immunitaire avant chaque immunisation antigénique, à raison de 5 mL par prélèvement. Le même jour, le sang est centrifugé à 400 g pendant 30 minutes dans une centrifugeuse pré-refroidie à 25 °C. Le sérum surnageant est séparé et conservé pour le dosage ultérieur des anticorps.

Lymphocytes séparés

Ajouter d'abord 15 mL de solution de séparation cellulaire, puis 15 mL de sang dans un tube à centrifuger de 50 mL. Verser le sang lentement et avec précaution afin d'éviter tout mélange avec la solution de séparation. Centrifuger à 25 °C, puis centrifuger à 400 g pendant 30 minutes. Conserver le sérum surnageant dans un nouveau tube à centrifuger à -80 °C. Prélever, à l'aide d'une pipette, la couche supérieure de cellules immunitaires (aspect cotonneux) et la transférer dans un nouveau tube à centrifuger de 50 mL. Ajouter 10 mL de tampon PBS à température ambiante dans chaque tube, puis centrifuger à 25 °C et 400 g pendant 20 minutes. Éliminer le surnageant, ajouter 5 mL de tampon PBS à température ambiante dans chaque tube, bien mélanger délicatement, compter les cellules à l'aide d'une cellule de Malassez, puis centrifuger à 25 °C et 400 g pendant 20 minutes. Éliminer le surnageant et dissoudre les lymphocytes obtenus par RNAiso Plus en fonction du nombre de cellules pour obtenir 10 ^ 7/mL de lysat cellulaire, qui est stocké à -80 ℃.

Figure 1 : Représentation schématique des différentes stratégies de découverte d’anticorps et des étapes expérimentales associées. (Source de la figure : Laustsen, Andreas H. et al.)

Les clients fournissent des immunogènes – contrôle qualité strict

Types d'immunogènes	Exigence	Méthode de contrôle de la qualité
Échantillons de peptides / petites molécules	Conditions de dissolution (dépendant principalement de leur capacité à inactiver les phages), structure moléculaire/séquence peptidique, rapport de synthèse (HPLC/MS/HNMR)	Détection par HPLC/MS
Échantillons de protéines	SDS-PAGE/WB, conditions de reconstitution, tampon, informations d'étiquetage, quantité totale (20-50 µg), concentration, pureté, etc.	SDS-PAGE/WB
Échantillons cellulaires	Type cellulaire (cellules primaires/cellules génétiquement modifiées), forme cellulaire (fraîches/congelées-décongelées), mode de croissance (adhérentes/en suspension), exigences du milieu de culture, nombre de cellules fournies, cellules génétiquement modifiées pour assurer une expression stable des cibles de criblage (anticorps primaire correspondant du client), cellules congelées-décongelées pour déterminer le taux de récupération	Ciblant principalement les cellules génétiquement modifiées, utilisant des anticorps primaires fournis par le client pour l'identification ELISA de l'expression cible (notre société fournit des anticorps secondaires HRP), détection par cytométrie de flux (notre société peut fournir des anticorps secondaires fluorescents).

Quelles sont les applications de l'immunité animale ?

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Les anticorps polyclonaux peuvent être produits par immunisation d'animaux, les anticorps monoclonaux peuvent être produits par fusion de cellules B avec des cellules de myélome, et les PBMC peuvent être extraits de sources camelines (alpaga, chameau, alpaga, etc.) pour produire diverses formes de fragments d'anticorps tels que des nanocorps, des fragments Fab, des fragments d'anticorps scFv, etc.
Quelles sont les précautions à prendre pour l'immunité animale ?

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Pour produire des nanoanticorps chez les animaux d'origine cameline, 5 à 6 immunisations sont nécessaires. Des échantillons de sang doivent être prélevés comme témoin avant chaque immunisation, à deux semaines d'intervalle. Après la quatrième immunisation, des échantillons de sang positifs et négatifs (non immunisés) doivent être prélevés pour un dosage ELISA afin de déterminer le titre. Si le titre est inférieur à 10⁶, le nombre d'immunisations doit être augmenté jusqu'à ce que le titre atteigne un niveau approprié. Pour d'autres immunisations animales telles que l'immunisation du lapin (le niveau optimal ou courant d'antigène protéique pour l'immunisation du lapin est de 50 à 1000 µg), l'immunisation de la souris (le niveau optimal ou courant d'antigène protéique pour l'immunisation de la souris est de 5 à 50 µg, ce qui nécessite 10⁶ cellules s'il s'agit d'une cellule, et de 10 à 50 µg pour l'acide nucléique ou les glucides), l'immunisation de la chèvre (le niveau optimal ou courant d'antigène protéique pour l'immunisation de la chèvre est de 250 à 5000 µg), etc., il convient de prêter attention au dosage, à la sécurité et à l'efficacité des immunogènes.
Comment choisir les animaux immunisés ?

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Selon le type d'anticorps requis, si vous souhaitez produire des nanocorps ou d'autres fragments d'anticorps, vous pouvez opter pour des animaux dérivés du chameau (chameaux, alpagas) pour l'immunisation. Pour la production d'anticorps monoclonaux ou polyclonaux, le choix de l'espèce dépendra de la quantité de sérum, d'antigène et de sa source. La quantité maximale de sérum pour les lapins est de 500 ml, ce qui nécessite une faible quantité d'antigène et en fait le choix privilégié pour la production d'anticorps polyclonaux. La quantité maximale de sérum pour les souris est de 2 ml, et celle pour les rats de 20 ml, ce qui est généralement optimal pour les anticorps monoclonaux. Les anticorps produits par la chèvre présentent une forte affinité, et Alpha Lifetech peut élaborer pour vous un plan d'immunisation exclusif, adapté à vos besoins.
Les antigènes doivent-ils être utilisés conjointement avec des adjuvants ? Comment choisir ?

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Il existe deux types d'adjuvants : à base d'huile et à base d'eau. Un usage judicieux des adjuvants est essentiel pour induire une forte réponse immunitaire aux antigènes solubles. La libération prolongée des adjuvants permet de réduire les doses d'antigènes nécessaires et d'obtenir une réponse immunitaire plus durable. La première injection doit être administrée avec un adjuvant. L'adjuvant de Freund est généralement recommandé lorsque la quantité d'immunogène est faible.
Précautions à prendre pour la vaccination des alpagas ?

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(1) Le choix de l'alpaga et de l'antigène d'immunité est essentiel à la réussite de l'immunisation. Il est déconseillé de choisir un chameau aux proportions harmonieuses. La pureté et la conformation adéquate des antigènes immuns sont cruciales pour la sélection d'anticorps adaptés aux applications ultérieures après immunisation avec des alpagas. La pureté des antigènes protéiques est généralement d'au moins 90 %.

(2) Séparation des lymphocytes : Une séparation cellulaire opportune peut prévenir efficacement l'hémolyse après la collecte de sang pour obtenir le meilleur effet de séparation.

(3) Le cycle immunitaire peut affecter la réponse immunitaire : un intervalle immunitaire de 1 à 2 semaines permet aux alpagas d'avoir une bonne réponse immunitaire à la plupart des antigènes.

adjuvant développé indépendamment

Notre adjuvant à formule unique a été optimisé pour le système immunitaire de l'alpaga, offrant une puissance et une spécificité supérieures aux adjuvants traditionnels.

Administration des vaccins
standard

Nous nous engageons à réaliser la vaccination dans les délais impartis, à fournir un sérum à titre élevé et à consigner chaque étape par des rapports détaillés.

Contrôle qualité du projet

Chaque projet est soumis à des processus de contrôle qualité rigoureux afin de garantir la livraison d'anticorps répondant à des normes élevées aux clients.

clairementAlpagaArrière-plan

Nous disposons d'une population d'alpagas en bonne santé qui soutient divers programmes de vaccination.

Si vous avez des questions, n'hésitez pas à nous contacter à tout moment.

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