Service de maturation d'affinité des anticorps

Alpha Lifetech Inc.Nous proposons un service de maturation d'affinité des anticorps grâce à des technologies de mutation et de sélection. Nous utilisons généralement le format scFv et un système de phagemide monovalent pour réduire les effets d'avidité lors du criblage de la liaison à l'antigène. Notre équipe d'experts peut également réaliser la maturation d'affinité des anticorps à domaine unique.

Alpha Lifetech Inc.Nous sommes fiers d'offrir des services complets répondant aux besoins variés de nos clients internationaux. Notre objectif est de comprendre et de satisfaire les exigences de chaque client et de les accompagner face aux difficultés rencontrées dans leurs travaux de recherche.

Qu'est-ce que la maturation d'affinité ?

La maturation d'affinité est le processus par lequel les anticorps subissent des mutations et une sélection répétées afin d'améliorer leur affinité pour des antigènes spécifiques. Se déroulant principalement dans le centre germinatif des organes lymphoïdes secondaires, les lymphocytes B subissent une hypermutation somatique et une sélection sous l'influence des lymphocytes T et des cellules dendritiques folliculaires.
Au cours du processus de maturation d'affinité, les lymphocytes B possédant des récepteurs d'immunoglobulines de surface de faible affinité sont activés par la rencontre avec l'antigène et subissent une prolifération et une différenciation. Par hypermutation somatique, des substitutions aléatoires de nucléotides se produisent dans la région variable des gènes d'immunoglobulines, entraînant la production de diverses variantes d'anticorps. Après hypermutation somatique, une sélection antigénique s'opère sur les lymphocytes B porteurs de récepteurs d'immunoglobulines mutés. Les lymphocytes B produisant des anticorps à affinité antigénique accrue sont préférentiellement conservés et autorisés à proliférer, tandis que ceux dont l'affinité est diminuée ou inchangée subissent l'apoptose. Ce processus itératif de mutation et de sélection conduit à la production de clones de lymphocytes B, produisant des anticorps dont l'affinité pour l'antigène augmente progressivement.

Service de maturation d'affinité des anticorps

Les principaux avantages des méthodes basées sur la PCR sont le ciblage précis des mutations sur le fragment amplifié, un taux d'erreur facilement maîtrisable, une mise en œuvre rapide et simple, et l'absence de produits chimiques dangereux. Il est bien connu que la Taq polymérase duplique l'ADN avec une faible fidélité, principalement en raison de l'absence d'activité de relecture 3'→5'.Alpha LifetechLa plateforme d'ingénierie d'anticorps utilise une approche de PCR sujette aux erreurs pour muter principalement les régions CDR lors de la construction de sous-bibliothèques. Des mutations sont fréquemment introduites à des positions totalement aléatoires sur l'ensemble des fragments VH et VL, afin d'accroître la diversité génétique de la sous-bibliothèque. Après la construction d'une bibliothèque de gènes d'anticorps mutés par PCR sujette aux erreurs, la sélection des variants à haute affinité (l'affinité des anticorps scFv peut atteindre 10⁸ à 10¹⁰ M) est réalisée soit par criblage en solution, soit sur antigène immobilisé, avec des conditions de lavage optimisées pour une sélection dépendante de la vitesse de dissociation.
  
Des scientifiques dansAlpha Lifetech Inc.L'utilisation de souches mutatrices d'Escherichia coli mutAD5TM constitue l'une des stratégies de mutation permettant d'introduire des mutations aléatoires et, par conséquent, de modifier l'affinité et l'expression de fragments d'anticorps recombinants. Les conditions de sélection peuvent être optimisées pour obtenir des fragments d'anticorps produits en plus grande quantité. Les conditions de croissance des cellules mutatrices d'Escherichia coli peuvent être ajustées afin d'introduire une mutation ponctuelle aléatoire par kilobase d'ADN, ce qui équivaut quasiment à un changement de codon par fragment scFv. Après plusieurs cycles de mutation, d'affichage et de sélection, la constante d'affinité peut être améliorée de 10⁵-10⁶ M à 10⁸-10¹⁰ M.

Améliorer les stratégies de maturation d'affinité

Certaines positions des anticorps peuvent être randomisées selon une diversité définie (par exemple, une randomisation complète des 20 acides aminés ou une randomisation partielle d'acides aminés sélectionnés à des pourcentages fixes) afin d'améliorer leur affinité. Nous disposons de deux stratégies pour améliorer l'affinité des anticorps : premièrement, l'introduction de mutations à des positions restreintes dans les régions déterminant la complémentarité (CDR) par mutagenèse dirigée ; deuxièmement, l'introduction de mutations dans l'ensemble des régions codantes V par mutagenèse aléatoire. Grâce à ces deux méthodes, les séquences d'acides aminés conservées ou la région charpente entière de l'anticorps sont substituées par d'autres acides aminés, ce qui, combiné à nos technologies de criblage de banques de peptides, permet d'accroître considérablement l'affinité des anticorps d'intérêt.

Affinité des anticorps pour la présentation de phages

Une fois la banque de mutants scFv construite, deux stratégies de criblage sont possibles : le biopanning et le tri sur antigène solide. Le premier consiste à isoler l’anticorps à haute affinité par soustraction de concentration du substrat, les mutants à faible affinité étant éliminés par lavage, ne laissant que les particules phagiques à haute avidité. La seconde stratégie utilise un antigène marqué en solution, une sélection basée sur la constante d’équilibre (Kd) et une autre sur la cinétique de liaison. Cette approche permet d’isoler les variants d’anticorps présentant une Kd améliorée.

Si vous avez des questions, n'hésitez pas à nous contacter à tout moment.