Plateforme de développement de l'humanisation des anticorps

Les anticorps humanisés induisent une réponse immunitaire humaine minimale, voire nulle. Selon Cognitive Market Research, le marché mondial de l'humanisation des anticorps représentait 92,5 millions de dollars en 2024 et devrait connaître une croissance annuelle composée (TCAC) de 13 % entre 2024 et 2031. Alpha Lifetech dispose d'une plateforme d'humanisation d'anticorps éprouvée, affichant un taux de réussite supérieur à 98 %. Nous proposons diverses stratégies d'humanisation, telles que le greffage de CDR et de SDR, le réarrangement de chaînes et le phage display, que vous pouvez sélectionner en fonction de vos besoins expérimentaux. Nous sommes en mesure d'humaniser des anticorps provenant de différentes espèces (souris, lapins, alpagas, chameaux, etc.) et sous diverses formes (scFv, Fab, nanocorps, etc.). Nous disposons d'une équipe technique spécialisée pour la production, la purification et la validation d'anticorps, incluant la production d'anticorps monoclonaux de souris, d'anticorps chimériques, l'expression et la purification d'anticorps humanisés, ainsi que leur caractérisation et leur analyse. Grâce à un taux de réussite élevé, une pureté optimale et une faible immunogénicité, nous garantissons une production d'anticorps humanisés de haute qualité.

Introduction à l'humanisation des anticorps

L'immunothérapie par anticorps monoclonaux peut être utilisée pour traiter les maladies auto-immunes, le cancer et d'autres pathologies. Les anticorps monoclonaux sont produits par immunisation de souris ou d'autres animaux. Lors du traitement de maladies, l'immunogénicité des anticorps non humains ne peut être négligée. Le principe de l'humanisation consiste à intégrer des résidus non humains, tels que les régions hypervariables déterminant la complémentarité (CDR), dans la structure humaine, afin d'obtenir des séquences qui conservent les caractéristiques de l'anticorps original tout en prévenant son immunogénicité. L'immunisation de souris et l'humanisation subséquente de la séquence murine restent deux des principales voies de découverte d'anticorps thérapeutiques. Ce processus comprend plusieurs étapes : production d'anticorps murins, chimérisation d'anticorps monoclonaux, obtention d'anticorps monoclonaux chimériques murins-humains et développement d'anticorps monoclonaux entièrement humanisés. À l'heure actuelle, la recherche porte principalement sur les souris transgéniques (transfert de gènes de cellules B humaines dans des souris), le criblage à haut débit utilisant la technologie d'affichage de levures ou de phages, la greffe de CDR (insertion de CDR parentales dans des séquences humaines), les résidus de détermination spécifiques à la transplantation (SDR), le brassage de la structure et d'autres méthodes.

Humanisation des anticorps - Alpha Lifetech

Figure 1 : Aperçu schématique de l'humanisation des anticorps, des anticorps murins (domaines verts) aux anticorps entièrement humains.

stratégie d'humanisation des anticorps

Greffe CDR

La greffe de CDR est réalisée grâce à un système d'expression mammalien basé sur la technologie de l'ADN recombinant, et ses principales étapes sont :

(1) Développer les anticorps correspondants chez la souris (ou à partir de sources non humaines), isoler l'ADN codant pour les anticorps et les cloner dans des vecteurs pour le séquençage (ou effectuer directement un séquençage unicellulaire).

(2) Déterminer la séquence d’ADN correspondant au CDR de l’anticorps et déterminer la spécificité de liaison à la cible ;

(3) Sélectionnez la région cadre humaine (FR) pour transplanter des CDR non humains et construire un nouveau gène d'anticorps.

(4) Effectuer une analyse tridimensionnelle des conflits entre les CDR non humains et les FR humains pour générer des mutations de récupération afin de stabiliser la boucle et d'empêcher la perte d'affinité ou d'intégrité structurelle de l'anticorps humanisé final.

Fig. 2 : Vue d'ensemble schématique de la greffe de la région déterminant la complémentarité (CDR).

Réorganisation des cadres

Le remaniement de la structure des chaînes lourdes d'anticorps repose sur la technologie du phage display et le criblage de banques de phages pour obtenir des anticorps à haute affinité. Des oligonucléotides codant pour la structure des chaînes lourdes d'anticorps humains servent de matrice, les régions CDR sont utilisées comme amorces, et une amplification PCR est réalisée pour dénaturer le produit PCR et obtenir de l'ADN simple brin. L'ADN simple brin des gènes VL et VH, purifié avec de la streptavidine, est répliqué sur des vecteurs à l'aide de la ligase T4 et d'enzymes de restriction, incubé avec des bactériophages, puis amplifié par ces derniers. Une banque de phages est ainsi construite. Trois cycles de criblage avec les antigènes correspondants sont effectués, et les clones positifs sont finalement validés par ELISA et d'autres méthodes.

Figure 3 : Illustration schématique des stratégies d’humanisation par greffage des régions déterminant la complémentarité (CDR) et par réarrangement des cadres (FR). (A) Procédure principale de greffage des CDR. (B) Processus principal de réarrangement des FR. (Source de référence : Wang Yongmei et al., Comparaison du « remaniement de la structure » et de la « greffe de CDR » dans l’humanisation d’un anticorps murin PD-1.)

Affichage de phages

La production d'anticorps humanisés repose sur la présentation d'anticorps spécifiques à la surface de bactériophages, principalement construits à partir de banques de phages d'anticorps humains. Ces banques sont constituées de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) isolées de cellules humaines, à partir desquelles des séquences correspondantes sont sélectionnées. Ces séquences possèdent la séquence humaine complète, mais les anticorps produits sont des fragments d'anticorps, tels que les scFv, les Fab et les nanocorps.

Flux de travail du service d'humanisation des anticorps

Escaliers de service	Norme de contrôle qualité	Chronologie
Isolement des anticorps	Pureté >95%	1 à 2 semaines
Analyse de séquences	Identification précise des séquences non humaines	1 semaine
Greffe de CDR et greffe de charpente	Intégration et expression réussies	2 à 3 semaines
Expression et purification	Rendement et pureté élevés	2 à 3 semaines
Validation fonctionnelle	Évaluation de l'affinité et de la spécificité	1 semaine