Service d'analyse et de caractérisation des aptamères

Alpha Lifetech fournit des services liés aux aptamères depuis de nombreuses années et propose actuellement des solutions complètes de développement d'aptamères, incluant la synthèse, le criblage SELEX, le séquençage à haut débit, ainsi que l'optimisation et la caractérisation. Forte des avantages de la méthode SELEX pour le criblage d'aptamères, Alpha Lifetech a développé d'autres méthodes de criblage.

Introduction à l'analyse de caractérisation des aptamères

vérification d'affinité

L'affinité optimisée de l'aptamère a été vérifiée par des techniques appropriées de dosage de liaison d'aptamères. Parmi celles-ci figurent la calorimétrie de titration isotherme (ITC), la cytométrie en flux (FCM), la résonance plasmonique de surface (SPR) et la microfluidique. L'affinité de l'aptamère est généralement exprimée par la constante de dissociation (KD), une grandeur physique permettant de quantifier le degré de dissociation moléculaire lors d'une réaction réversible. Plus la valeur de KD est faible, plus le complexe est stable, c'est-à-dire plus l'affinité est forte ; inversement, plus la valeur de KD est élevée, plus le complexe est instable et plus l'affinité est faible. Cette étape est cruciale pour évaluer les performances de l'aptamère, garantir la maturation de son affinité et sa capacité à se lier à la molécule cible avec une forte affinité et une sélectivité élevée pour des applications pratiques.

Fig. 1 Processus de maturation d'affinité des aptamères. Source de référence :Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Vérification fonctionnelle

Outre la vérification de l'affinité, la fonction de l'aptamère doit être validée. Cela inclut la vérification de sa stabilité, de sa spécificité et de ses interactions avec d'autres molécules dans un environnement donné. Les résultats de cette validation fonctionnelle auront un impact direct sur l'intérêt des aptamères pour la recherche scientifique et les applications industrielles.

Vérification spécifique

Expérience compétitive : la capacité de l’aptamère à se lier à une cible spécifique est évaluée en présence d’autres cibles similaires. Si l’aptamère peut se lier spécifiquement à la molécule cible sans interférence d’autres molécules, cela indique qu’il possède une spécificité élevée.

Expérience de réaction croisée : l’aptamère est lié à une série de cibles apparentées ou non apparentées afin de déterminer s’il se lie uniquement à une cible spécifique, et ainsi vérifier sa spécificité.

Vérification de la stabilité

Expérience de dégradation par nucléase : Les aptamères ont été exposés à différentes concentrations de nucléases et leur dégradation a été observée. La comparaison du degré de dégradation à différents moments permet d’évaluer la résistance des aptamères à la dégradation par les nucléases.

Expérience de stabilité en fonction de la température et du temps : L’aptamère a été placé dans différentes conditions de température et de durée afin d’observer sa stabilité structurale et fonctionnelle. Ceci permet de déterminer les conditions optimales de stockage et d’utilisation des aptamères.

Identification de l'activité biologique

La méthode appropriée est généralement sélectionnée en fonction de l'objectif d'application spécifique de l'aptamère d'acide nucléique.

(1) Tests au niveau moléculaire : Utilisation de techniques de biologie moléculaire, telles que l'électrophorèse sur gel, le Western blot, etc., pour détecter les complexes formés après que l'aptamère se soit combiné avec la molécule cible, ou pour détecter les changements dans le niveau d'expression de la molécule cible causés par l'aptamère.

(2) Tests au niveau cellulaire : En utilisant la technologie de culture cellulaire, les aptamères sont incubés avec des cellules cibles pour observer les changements biologiques tels que la morphologie cellulaire, la prolifération et l'apoptose, et évaluer l'activité biologique des aptamères.

(3) Tests sur modèles animaux : Dans des modèles animaux appropriés, des aptamères d'acides nucléiques sont administrés par injection ou par administration de médicaments, et les indicateurs physiologiques et les changements pathologiques des animaux sont observés pour évaluer l'activité biologique et la sécurité des aptamères in vivo.