En 1960, le concept d'anticorps bispécifiques a été proposé. Ces anticorps, également appelés anticorps monoclonaux bispécifiques, sont des anticorps de synthèse obtenus par génie génétique. Appartenant généralement à la sous-classe des IgG, ils possèdent un fragment de liaison à l'antigène ciblant la sous-unité CD3. Les anticorps bispécifiques disposent de deux sites de liaison spécifiques capables de reconnaître simultanément deux antigènes différents, ou deux épitopes différents d'un même antigène. Comparés aux anticorps monoclonaux, ils possèdent un site de liaison supplémentaire, ce qui leur confère une spécificité et une capacité de ciblage accrues. Ils peuvent ainsi cibler plus précisément les cellules tumorales et réduire la toxicité hors cible. Les anticorps bispécifiques peuvent exercer simultanément plusieurs fonctions biologiques, telles que le recrutement de cellules immunitaires, le blocage de voies de signalisation et la destruction directe des cellules tumorales. Les premiers anticorps bispécifiques étaient principalement préparés par conjugaison chimique ou fusion cellulaire, mais cette méthode a progressé lentement en raison de la combinaison aléatoire et de la difficulté à isoler la combinaison cible. Avec le développement continu des technologies de génie génétique, de nombreuses nouvelles plateformes technologiques ont été mises au point, telles que les nœuds dans les trous (KIH), CrossMab, DVD Ig, etc. Ces plateformes résolvent efficacement les problèmes tels que les mésappariements de chaînes lourdes et de chaînes légères, et améliorent l'uniformité et le rendement des anticorps bispécifiques.

Les principales méthodes de production d'anticorps bispécifiques comprennent le couplage chimique, la méthode des hybridomes à quatre sources et la préparation d'anticorps par génie génétique. Parmi celles-ci, la méthode de couplage chimique consiste à coupler deux IgG intactes ou deux fragments d'anticorps F(ab')₂ en anticorps bispécifiques à l'aide d'agents de couplage chimiques tels que le phtalimide et l'acide dithioacylbenzoïque. Cette méthode est simple et facile à mettre en œuvre, mais elle peut endommager le site de liaison à l'antigène, réduire l'activité de l'anticorps et l'agent de couplage lui-même présente un certain potentiel cancérogène. La méthode des hybridomes à quatre sources repose sur la fusion de cellules somatiques issues de deux lignées cellulaires d'hybridomes différentes afin d'exprimer l'IgG murine correspondante. Grâce au génie génétique, les anticorps peuvent être modifiés génétiquement pour former des anticorps bispécifiques. Deux anticorps monoclonaux différents sont construits, puis les fragments Fab ou les régions variables des chaînes lourdes et légères des deux anticorps sont clivés séparément. Par une réaction de réticulation ou une technique de recombinaison de chaînes, les deux fragments sont combinés pour former un anticorps bispécifique. Bien que la complexité des techniques de génie génétique soit relativement élevée, elles constituent actuellement la méthode la plus couramment utilisée pour la production d'anticorps bispécifiques, permettant d'ajuster leur structure et leur fonction. Lors de la conception d'anticorps bispécifiques, le principe de réactivité croisée peut être exploité. Cependant, cette réactivité croisée pouvant engendrer des réactions non spécifiques, elle doit être prise en compte avec la plus grande attention lors des applications pratiques, notamment en immunothérapie.

La purification d'anticorps bispécifiques est le processus d'isolement et de purification d'anticorps cibles de haute pureté. Deux méthodes, la centrifugation et la filtration poussée, sont utilisées pour éliminer certaines impuretés solubles. L'anticorps bispécifique cible est initialement capturé par chromatographie d'affinité. Pour les anticorps bispécifiques de type IgG, on utilise la chromatographie d'affinité sur protéine A, tandis que pour les anticorps bispécifiques de type non-IgG, on peut utiliser la chromatographie d'affinité sur chaîne légère. L'anticorps est ensuite incubé à pH faible pendant une durée déterminée, ce qui provoque la désorganisation de la structure protéique de l'enveloppe virale et, par conséquent, la perte de sa capacité à infecter les cellules. Une filtration poussée intermédiaire est réalisée pour éliminer les impuretés supplémentaires telles que les protéines de la cellule hôte (PCH). La pureté des anticorps est améliorée par des méthodes telles que la chromatographie d'échange d'ions, et tout virus résiduel est éliminé par nanofiltration ou ultrafiltration. Enfin, l'échantillon est concentré et remplacé par un tampon de formulation approprié.