Service de développement d'anticorps monoclonaux

Alpha Lifetech Inc.peut fournir la prédiction d'épitopes, la synthèse de peptides, l'expression de protéines, la production d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux ainsi que la purification d'anticorps à partir de culture cellulaire, de liquide d'ascite ou de sérum entier.

Alpha Lifetech Inc.Nous proposons à nos clients une gamme variée de services de lignées cellulaires stables, notamment des cellules d'hybridome, des lignées cellulaires d'édition génomique, des lignées cellulaires knock-down et des lignées cellulaires de surexpression. Nous nous efforçons d'offrir à chaque client des services de lignées cellulaires personnalisées et avancées, et nos services sont éprouvés et fiables.

Stratégie de développement d'anticorps

1. Conception et préparation de l'antigène
Ces antigènes peuvent être des protéines, des peptides ou d'autres molécules. La conception d'immunogènes nécessite une approche globale intégrant la connaissance de la structure des antigènes, de l'immunologie et des systèmes d'administration. Alpha Lifetech dispose d'une technologie de conception d'antigènes permettant de concevoir des immunogènes pour les clients qui en ont besoin.
Alpha Lifetech propose à ses clients un large choix de protéines recombinantes. Nous disposons d'une variété de systèmes d'expression protéique, tels que les systèmes d'expression E. coli, levure, baculovirus-insecte, mammifère, etc., pour produire les protéines recombinantes dont ils ont besoin pour leurs recherches.

2. Immunisation des animaux
Alpha Lifetech peut fournir des immunogènes aux clients, et des animaux immunisés tels que des souris, des lapins, des moutons, des alpagas, des cobayes, des hamsters, etc. sont disponibles parmi lesquels vous pouvez choisir.

3. Méthodes de production d'anticorps monoclonaux

●Production de Mabs par la technologie des hybridomes
L'hybridome est une cellule hybride issue de la fusion de deux types de cellules, à savoir une lignée cellulaire de myélome murin et des plasmocytes (lymphocytes B). La cellule hétérozygote peut ainsi produire in vitro des anticorps continus contre l'antigène d'intérêt. La production d'une lignée cellulaire d'hybridome comprend trois étapes : la conception de l'antigène (haptènes, petites molécules et peptides), l'immunisation animale, la fusion cellulaire et le criblage de clones positifs. Grâce à des méthodes d'immunisation uniques, nous obtenons des taux de fusion cellulaire exceptionnellement élevés (1 à 10 hybridomes pour mille lymphocytes B) et des titres d'anticorps élevés, maximisant ainsi notre taux de réussite lors des analyses ultérieures, notamment le criblage biochimique, les tests cellulaires in vitro et les études animales.

●Production de Mabs par technologie d'affichage de phages
Le phage display offre une autre méthode de production d'anticorps monoclonaux. Les lymphocytes B sont isolés du sang animal et leur ARNm est extrait. Par PCR, cet ARNm est converti en ADNc, qui amplifie tous les segments VH et VL. Ces segments sont ensuite clonés dans un vecteur, généralement sous forme de fragments variables à chaîne unique (scFv), avec la protéine PIII d'un bactériophage. Cette construction est ensuite utilisée pour infecter E. coli, ce qui permet de créer une banque contenant environ 10^10 cellules par inoculation avec un phage auxiliaire. E. coli est alors capable de sécréter le bactériophage contenant les segments VH et VL dans son enveloppe. Ensuite, des segments VH et VL spécifiques ciblant l'antigène d'intérêt peuvent être sélectionnés et utilisés pour réinoculer E. coli avec le bactériophage. Les cellules contenant le plasmide sont ensuite isolées et séquencées.

4. Criblage par fusion

●Fusion et sélection cellulaires
Les lymphocytes B prélevés sont ensuite fusionnés avec des cellules myélomateuses, des cellules cancéreuses capables de proliférer indéfiniment en culture. La fusion est généralement réalisée grâce à une technique telle que la fusion au polyéthylène glycol (PEG).
Après la fusion, les cellules d'hybridome sont cultivées dans un milieu sélectif qui ne permet qu'à ces derniers de survivre. Ce milieu contient généralement de l'aminoptérine, qui empêche la croissance des cellules myélomateuses non fusionnées.

●Criblage et clonage
Les cellules d'hybridome obtenues sont criblées pour détecter la production d'anticorps spécifiques à l'antigène cible. Cette analyse est généralement réalisée à l'aide de techniques telles que le dosage immuno-enzymatique (ELISA), le Western blot, l'immunoprécipitation et la cytométrie de flux.

Une fois les cellules d'hybridome productrices d'anticorps identifiées, elles sont clonées pour générer une population de cellules identiques. Cela garantit que l'anticorps produit par chaque cellule d'hybridome est identique.

5. Vérification fonctionnelle des anticorps
Alpha Lifetech fournit une validation fonctionnelle des anticorps, telle que le Western blot, l'immunohistochimie ou les tests fonctionnels, pour caractériser les anticorps monoclonaux et confirmer la spécificité, l'affinité et la fonctionnalité des anticorps.

6. Optimisation des anticorps
Purification des anticorps à partir du surnageant de culture à l'aide de techniques telles que la chromatographie d'affinité sur protéine A ou protéine G, et Alpha Lifetech peut également fournir des méthodes de modification des anticorps pour améliorer l'affinité des anticorps.

7. Production d'anticorps
Alpha Lifetech peut évaluer les anticorps candidats pour les applications de criblage à haut débit et la production à grande échelle.