Service de développement d'anticorps monoclonaux

Alpha Lifetech Inc.peut fournir la prédiction d'épitopes, la synthèse de peptides, l'expression de protéines, la production d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux ainsi que la purification d'anticorps à partir de cultures cellulaires, de liquide d'ascite ou de sérum entier.

Alpha Lifetech Inc.Nous proposons à nos clients une gamme complète de services de lignées cellulaires stables, incluant les hybridomes, les lignées cellulaires pour l'édition du génome, les lignées cellulaires à extinction génique et les lignées cellulaires à surexpression. Nous nous efforçons d'offrir à chaque client des services personnalisés et performants, dont la fiabilité et la qualité sont éprouvées.

Stratégie de développement des anticorps

1. Conception et préparation de l'antigène
Ces antigènes peuvent être des protéines, des peptides ou d'autres molécules. La conception d'immunogènes exige une approche globale intégrant les connaissances en structure antigénique, en immunologie et en systèmes d'administration. Alpha Lifetech dispose d'une technologie de conception d'antigènes permettant de concevoir des immunogènes adaptés aux besoins de ses clients.
Alpha Lifetech propose une gamme de protéines recombinantes. Nous disposons de divers systèmes d'expression protéique, tels que le système d'expression d'E. coli, le système d'expression de levure, le système d'expression baculovirus-insecte, le système d'expression de cellules de mammifères, etc., afin de produire les protéines recombinantes nécessaires à vos recherches.

2. Immunisation animale
Alpha Lifetech peut fournir des immunogènes à ses clients, et des animaux immunisés tels que des souris, des lapins, des moutons, des alpagas, des cobayes, des hamsters, etc. sont disponibles parmi lesquels vous pouvez choisir.

3. Méthodes de production d'anticorps monoclonaux

●Production d'anticorps monoclonaux par la technologie Hybridoma
Un hybridome est une cellule hybride issue de la fusion de deux types cellulaires : une lignée de cellules de myélome murin et des plasmocytes (lymphocytes B). La cellule hétérozygote ainsi obtenue produit des anticorps continus contre l’antigène d’intérêt in vitro. La production d’une lignée cellulaire d’hybridome comprend trois étapes : la conception de l’antigène (haptènes, petites molécules et peptides), l’immunisation animale, la fusion cellulaire et le criblage des clones positifs. Grâce à des méthodes d’immunisation uniques, nous obtenons des taux de fusion cellulaire exceptionnellement élevés (1 à 10 hybridomes pour mille lymphocytes B) et des titres d’anticorps élevés, ce qui optimise nos chances de succès lors des analyses ultérieures, notamment le criblage biochimique, les tests cellulaires in vitro et les études animales.

●Production d'anticorps monoclonaux par la technologie du phage display
Le phage display offre une autre méthode de production d'anticorps monoclonaux. Les lymphocytes B sont isolés du sang animal et leur ARN messager (ARNm) est extrait. Par PCR, cet ARNm est converti en ADNc, qui amplifie tous les segments VH et VL. Ces segments sont ensuite clonés dans un vecteur, généralement sous forme de fragments variables à chaîne unique (scFv), en association avec la protéine PIII d'un bactériophage. Ce vecteur est ensuite utilisé pour infecter E. coli, ce qui permet la création d'une banque contenant environ 10^10 cellules par inoculation avec un phage auxiliaire. E. coli est alors capable de sécréter le bactériophage portant les segments VH et VL dans sa capside. Par la suite, des segments VH et VL spécifiques ciblant l'antigène d'intérêt peuvent être sélectionnés et utilisés pour réinoculer E. coli avec le bactériophage. Les cellules contenant le plasmide sont alors isolées et séquencées.

4. Criblage par fusion

●Fusion et sélection cellulaires
Les lymphocytes B prélevés sont ensuite fusionnés avec des cellules de myélome, des cellules cancéreuses capables de proliférer indéfiniment en culture. Cette fusion est généralement réalisée à l'aide d'une technique telle que la fusion au polyéthylène glycol (PEG).
Après fusion, les cellules de l'hybridome sont cultivées dans un milieu sélectif qui ne permet la survie que des hybridomes. Ce milieu contient généralement de l'aminoptérine, qui empêche la croissance des cellules de myélome non fusionnées.

●Dépistage et clonage
Les cellules d'hybridome obtenues sont analysées afin de vérifier la production d'anticorps spécifiques à l'antigène cible. Cette analyse est généralement réalisée à l'aide de techniques telles que le test immuno-enzymatique (ELISA), le Western blot, l'immunoprécipitation et la cytométrie en flux.

Une fois les cellules d'hybridome produisant l'anticorps identifiées, elles sont clonées afin de générer une population de cellules identiques. Ceci garantit que l'anticorps produit par chaque cellule d'hybridome est identique.

5. Vérification fonctionnelle des anticorps
Alpha Lifetech propose une validation fonctionnelle des anticorps, telle que le Western blot, l'immunohistochimie ou les tests fonctionnels, afin de caractériser les anticorps monoclonaux et de confirmer leur spécificité, leur affinité et leur fonctionnalité.

6. Optimisation des anticorps
La purification des anticorps à partir du surnageant de culture utilise des techniques telles que la chromatographie d'affinité sur protéine A ou protéine G, et Alpha Lifetech peut également fournir des méthodes de modification des anticorps pour améliorer leur affinité.

7. Production d'anticorps
Alpha Lifetech peut évaluer les anticorps candidats pour des applications de criblage à haut débit et une production à grande échelle.