Plateforme de développement d'anticorps par phage display

Forte de son expérience approfondie en matière de découverte d'anticorps, Alpha Lifetech propose des services personnalisés de production d'anticorps monoclonaux et polyclonaux pour de nombreuses espèces, ainsi que des services de construction et de criblage de banques d'anticorps. Alpha Lifetech fournit à ses clients des anticorps et des anticorps recombinants de qualité garantie, ainsi que les services associés, pour la préparation d'anticorps efficaces, hautement spécifiques et stables. Grâce à des plateformes complètes et à l'ingénierie des anticorps, nous offrons des services couvrant l'ensemble de la chaîne de production, de la préparation à la validation, en passant par la purification et le séquençage.

Alpha Lifetech dispose d'une plateforme mature de découverte d'anticorps offrant à ses clients une gamme complète de services, incluant l'immunité animale, la construction et le criblage de banques d'anticorps par phage display, le séquençage, l'expression, la purification, la validation et le marquage d'anticorps, grâce à des technologies telles que l'hybridome, les cellules B uniques et le phage display. Alpha Lifetech possède une ligne de production standard et propose, outre la préparation d'anticorps, des services complémentaires comme l'humanisation et la maturation d'affinité, la conception et le développement de conjugués anticorps-médicament (ADC) et la conception de séquences CAR-T. Par ailleurs, Alpha Lifetech a constitué une banque d'anticorps basée sur les plateformes technologiques de phage display M13, T4 et T7, avec une capacité de stockage de 10⁸ à 10⁹. Les taux de positivité, d'insertion et de diversité de cette banque dépassent tous 90 %.

Technologie d'affichage des phages

La production d'anticorps monoclonaux a initialement été réalisée grâce à la technologie des hybridomes, permettant de produire des anticorps monoclonaux d'hybridomes murins. Concrètement, la fusion de cellules spléniques de souris immunisées avec des cellules de myélome humain ou murin permet la formation de cellules d'hybridomes sécrétant des anticorps monoclonaux spécifiques. L'immunogénicité de ces anticorps monoclonaux murins peut être réduite par humanisation et par modification génétique visant à leur conférer une région d'immunoglobuline humaine constante. L'ingénierie des anticorps monoclonaux trouve de nombreuses applications biomédicales et cliniques.

Alpha Lifetech propose des services complets d'ingénierie des anticorps, depuis la conception des protocoles de recherche préclinique jusqu'à la découverte et la validation animale des conjugués anticorps-médicament (ADC). Les ADC permettent d'acheminer des chimiothérapies jusqu'aux cellules cancéreuses. Après fixation à des cibles spécifiques exprimées à la surface des cellules cancéreuses, l'ADC libère des agents cytotoxiques. Alpha Lifetech offre également à ses clients des services complets de maturation d'affinité des anticorps. Grâce à une optimisation avancée des mutations et à une technologie de criblage à haut débit par phage display, les anticorps présentant une affinité donnée sont d'abord sélectionnés, puis des mutations d'acides aminés sont introduites pour générer diverses variantes. Les anticorps à haute affinité sont ensuite évalués et sélectionnés par des techniques de criblage. Après plusieurs cycles d'optimisation et d'analyse structurale, des anticorps à l'affinité et à la spécificité accrues sont finalement obtenus.

Alpha Lifetech est capable de construire différents types de banques de phages pour la présentation d'anticorps, notamment des banques immunitaires, des banques natives, des banques semi-synthétiques et des banques synthétiques. Grâce à la grande capacité de ces banques, il est possible d'obtenir des anticorps hautement spécifiques. Plusieurs vecteurs phagémidiques, tels que pMECS, pComb3X et pCANTAB 5E, sont disponibles, ainsi que des souches comme TG1 E. coli, XL1 Blue et ER2738. Outre une capacité pouvant atteindre 10⁹, le taux d'insertion élevé des fragments cibles dans les banques garantit des conditions optimales pour le criblage d'anticorps répondant aux besoins des clients. Le schéma du service de préparation d'anticorps d'Alpha Lifetech basé sur la technologie de présentation de phages est présenté dans la figure 1.

Fig.1 Schéma du processus de préparation d'anticorps monoclonaux basé sur la technologie du phage display.

Flux de travail de production d'anticorps par phage display

Mesures	Contenu du service	Chronologie
Étape 1 : Immunisation des animaux	(1) Immunisation animale 4 fois, immunisation de rappel 1 dose, un total de 5 doses immunisées. (2) Un sérum négatif avant l'immunisation a été collecté, et un test ELISA a été réalisé sur la quatrième dose pour détecter le titre sérique. (3) Si le titre d'anticorps sériques de la quatrième dose est conforme aux exigences, une dose supplémentaire de vaccin sera administrée 7 jours avant le prélèvement sanguin. Dans le cas contraire, la vaccination de routine se poursuivra. (4) Puissance qualifiée, prélèvement sanguin et séparation des monocytes	10 semaines
Étape 2 : Préparation de l'ADNc	(1) Extraction d'ARN total des PBMC (kit d'extraction d'ARN) (2) Préparation de cDNA par RT-PCR haute fidélité (kit de transcription inverse)	1 jour
Étape 3 : Construction d’une banque d’anticorps	(1) En utilisant l'ADNc comme matrice, les gènes ont été amplifiés par deux cycles de PCR. (2) Construction et transformation de phages : vecteur phagemide d'épissage de gènes, transformation par électroporation de bactéries hôtes TG1, construction d'une bibliothèque d'anticorps. (3) Identification : Sélectionner au hasard 24 clones, taux de positivité de l'identification PCR + taux d'insertion. (4) Préparation assistée des phages : amplification et purification du phage M13. (5) Sauvetage de la bibliothèque de phages display	3 à 4 semaines
Étape 4 : Criblage de la bibliothèque d'anticorps (3 cycles)	(1) Dépistage par défaut en 3 étapes (dépistage en phase solide) : dépistage sous pression pour éliminer les anticorps non spécifiques dans toute la mesure du possible. (2) Amplification de clone unique, bactériophage sélectionné + expression induite par IPTG + détection ELISA des clones positifs. (3) Tous les clones positifs ont été sélectionnés pour le séquençage génétique.	4 à 5 semaines

Avantages de la technologie d'affichage des phages

Alpha Lifetech possède une vaste expérience dans le domaine du développement d'anticorps. Au fil des ans, Alpha Lifetech a mis en place une plateforme complète de développement d'anticorps.

Services de soutien

Nous proposons différents services de construction de banques d'immuno-anticorps d'origine animale et des services de criblage de banques d'anticorps naturels, selon les besoins du client.

Cibles multiples

Plusieurs services de découverte d'anticorps à cibles multiples sont disponibles : protéines, peptides, petites molécules, virus, protéines membranaires, ARNm, etc.

Vecteurs multiples

Service de construction de bibliothèques personnalisées : nous pouvons fournir divers vecteurs de bactériophages, notamment PMECS, pComb3X et pCANTAB 5E, et les modifier selon les besoins du client.

Plateforme mature

La capacité de stockage peut atteindre 10⁸ à 10⁹, les taux d'insertion sont tous supérieurs à 90 % et l'affinité des anticorps obtenus par criblage est généralement de l'ordre du nM ou du pM.

SERVICE ASSOCIÉ

Stratégies de développement d'anticorps multiples

Service de développement d'anticorps monoclonaux

Plateforme technologique Hybridome

Plateforme de tri de cellules B uniques

Plateforme de développement d'anticorps par phage display

Développement d'anticorps monoclonaux - Alpha Lifetech

Service de développement d'anticorps monoclonaux

Nous proposons des services de développement d'anticorps monoclonaux de haute qualité, de haute pureté et de haute spécificité, notamment la production d'anticorps monoclonaux de souris et d'anticorps monoclonaux de lapin.

Plateforme technologique Hybridome

Cela inclut les programmes de vaccination, les services de préparation d'anticorps, la purification d'anticorps, le séquençage à haut débit d'anticorps, la validation d'anticorps, etc.

Dépistage des lymphocytes B - Alpha Lifetech

Plateforme de tri de cellules B uniques

Alpha Lifetech présente des avantages en termes de rapidité de criblage et d'obtention d'anticorps de haute qualité. Elle propose la conception, la synthèse et la modification d'antigènes, l'immunodéficience animale, le criblage d'enrichissement de cellules B uniques et le séquençage de cellules uniques.