Plateforme de développement d'anticorps pour l'affichage de phages

Fort de sa vaste expérience en matière de découverte d'anticorps, Alpha Lifetech propose des services personnalisés de production d'anticorps monoclonaux et polyclonaux pour de multiples espèces, ainsi que des services de construction et de criblage de bibliothèques d'anticorps. Alpha Lifetech propose à ses clients des anticorps et des anticorps recombinants de qualité garantie, ainsi que les services correspondants, pour la préparation d'anticorps efficaces, hautement spécifiques et stables. Grâce à des plateformes d'anticorps complètes et à l'ingénierie des anticorps, nous proposons des services couvrant l'amont et l'aval de la production d'anticorps, incluant des services techniques tels que la préparation, la purification, le séquençage et la validation des anticorps.

Alpha Lifetech dispose d'une plateforme de découverte d'anticorps mature qui offre à ses clients une gamme de services incluant l'immunité animale, la construction et le criblage de bibliothèques d'anticorps pour phage display, le séquençage, l'expression, la purification, la validation et le marquage d'anticorps basés sur les technologies des hybridomes, des cellules B uniques et des phages display, entre autres. Alpha Lifetech dispose d'une ligne de production standard et, outre les services de préparation d'anticorps, propose également des services d'assistance tels que l'humanisation, la maturation de l'affinité des anticorps, la conception et le développement de médicaments ADC et la conception de séquences CAR-T. Parallèlement, Alpha Lifetech a construit une bibliothèque d'anticorps basée sur les plateformes de phage display M13, T4 et T7, avec une capacité de stockage allant jusqu'à 10^8-10^9. Le taux de positivité, le taux d'insertion et la diversité de la bibliothèque peuvent atteindre plus de 90 %.

Technologie d'affichage de phages

La production d'anticorps monoclonaux a été initialement préparée grâce à la technologie des anticorps monoclonaux d'hybridome pour produire des anticorps monoclonaux d'hybridome de souris. Plus précisément, la fusion de cellules spléniques de souris immunisées avec des cellules de myélome d'humains ou de souris produit des cellules d'hybridome qui sécrètent des anticorps monoclonaux spécifiques d'hybridome. La modification humanisée des anticorps monoclonaux de souris et leur modification par génie génétique pour leur conférer une région d'immunoglobuline humaine constante permettent de réduire leur immunogénicité. La technologie des anticorps monoclonaux est largement utilisée dans les applications biomédicales et cliniques.

Alpha Lifetech propose des services complets d'ingénierie des anticorps, de la conception de protocoles de recherche préclinique à la découverte de conjugués anticorps-médicaments (CAM) et à leur validation animale. Ces conjugués permettent d'administrer des médicaments de chimiothérapie aux cellules cancéreuses. Après s'être liés à des cibles spécifiques exprimées sur les cellules cancéreuses, les CAM libèrent des médicaments cytotoxiques dans les cellules cancéreuses. Alpha Lifetech propose également à ses clients des services complets de maturation d'affinité des anticorps. Grâce à une optimisation avancée des mutations et à une technologie de criblage par phage display à haut débit, les anticorps présentant une certaine affinité sont d'abord criblés, puis des mutations d'acides aminés sont introduites pour générer divers variants. Les anticorps de haute affinité ont ensuite été évalués et criblés à l'aide de techniques de criblage. Après plusieurs cycles d'optimisation et d'analyses structurales, des anticorps présentant une affinité et une spécificité plus élevées ont été obtenus.

Alpha Lifetech peut construire différents types de bibliothèques d'anticorps pour phage display, notamment des bibliothèques immunitaires, natives, semi-synthétiques et synthétiques. Grâce à la grande capacité de ces bibliothèques, des anticorps hautement spécifiques peuvent être obtenus. Plusieurs vecteurs phagémides, tels que pMECS, pComb3X et pCANTAB 5E, ainsi que des souches telles que TG1 E. coli, XL1 Blue et ER2738, sont disponibles. Outre une capacité de bibliothèque allant jusqu'à 10^9, le taux d'insertion de fragments cibles est également élevé, créant ainsi des conditions suffisantes pour le criblage d'anticorps satisfaisant les clients. Le schéma du service de préparation d'anticorps d'Alpha Lifetech basé sur la technologie phage display est présenté à la figure 1.

Fig.1 Diagramme de processus de préparation d'anticorps monoclonaux basés sur la technologie d'affichage de phages.

Flux de travail de production d'anticorps pour phage display

Mesures	Contenu du service	Chronologie
Étape 1 : Immunisation des animaux	(1) Immunisation animale 4 fois, rappel 1 dose, soit un total de 5 doses immunisées. (2) Le sérum négatif avant l'immunisation a été collecté et un test ELISA a été réalisé sur la quatrième dose pour détecter le titre sérique. (3) Si le titre d'anticorps sériques de la quatrième dose est conforme aux exigences, une dose supplémentaire sera administrée 7 jours avant le prélèvement sanguin. Dans le cas contraire, la vaccination systématique sera poursuivie. (4) Puissance qualifiée, prélèvement sanguin et séparation des monocytes	10 semaines
Étape 2 : Préparation de l'ADNc	(1) Extraction d'ARN total PBMC (kit d'extraction d'ARN) (2) Préparation RT-PCR haute fidélité d'ADNc (kit de transcription inverse)	1 jour
Étape 3 : Construction d'une bibliothèque d'anticorps	(1) En utilisant l’ADNc comme modèle, les gènes ont été amplifiés par deux cycles de PCR. (2) Construction et transformation de phages : vecteur phagémide d'épissage de gènes, transformation par électroporation de bactéries hôtes TG1, construction d'une bibliothèque d'anticorps. (3) Identification : Sélectionner au hasard 24 clones, taux d'identification PCR positif + taux d'insertion. (4) Préparation assistée des phages : amplification et purification des phages M13. (5) Sauvetage de la bibliothèque d'affichage de phages	3-4 semaines
Étape 4 : Criblage de la bibliothèque d’anticorps (3 cycles)	(1) Criblage par défaut en 3 étapes (criblage en phase solide) : criblage sous pression pour éliminer les anticorps non spécifiques dans la mesure du possible. (2) Bactériophage d'amplification de clone unique sélectionné + expression induite par IPTG + détection ELISA des clones positifs. (3) Tous les clones positifs ont été sélectionnés pour le séquençage des gènes.	4 à 5 semaines

Avantage de la technologie d'affichage des phages

Alpha Lifetech possède une riche expérience dans le développement d'anticorps. Au fil des ans, elle a mis en place une plateforme complète de développement d'anticorps.

Services de soutien

Nous pouvons fournir différents services de construction de bibliothèques immunitaires à base d'animaux et des services de criblage de bibliothèques d'anticorps naturels en fonction des besoins du client.

Cibles multiples

Des services de découverte d'anticorps à cibles multiples sont disponibles : protéines, peptides, petites molécules, virus, protéines membranaires, ARNm, etc.

Vecteurs multiples

Service de construction de bibliothèque personnalisé, nous pouvons fournir divers vecteurs de bactériophages, notamment PMECS, pComb3X et pCANTAB 5E, et les modifier en fonction des besoins du client

Plateforme mature

La capacité de stockage peut atteindre 10 ^ 8-10 ^ 9, les taux d'insertion sont tous supérieurs à 90 % et l'affinité des anticorps obtenus par criblage est généralement de l'ordre du nM pM

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développement d'anticorps monoclonaux - Alpha Lifetech

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Nous pouvons fournir des services de développement d'anticorps monoclonaux de haute qualité, de haute pureté et hautement spécifiques, y compris la production d'anticorps monoclonaux de souris et d'anticorps monoclonaux de lapin.

Plateforme technologique d'hybridomes

Y compris le programme de vaccination, les services de préparation d'anticorps, la purification d'anticorps, le séquençage à haut débit d'anticorps, la validation d'anticorps, etc.

dépistage des cellules B - Alpha Lifetech

Plateforme de tri de cellules B uniques

Alpha Lifetech bénéficie d'avantages en termes de temps de criblage et d'obtention d'anticorps de haute qualité. Elle propose des services de conception, de synthèse et de modification d'antigènes, d'immunité animale, de criblage par enrichissement de cellules B individuelles et de séquençage de cellules individuelles.