Service de construction de bibliothèques d'affichage de phages

Alpha Lifetech dispose d'une plateforme complète de phage display M13/T7 pour la construction et la production de banques d'anticorps. Nous proposons également des services personnalisés, comme la production d'anticorps scFv, pour répondre à vos besoins.

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Service de construction de bibliothèques d'affichage de phages

Alpha Lifetech est spécialisée depuis de nombreuses années dans la technologie du phage display. Elle a développé une plateforme technologique de phage display stable et performante, permettant un gain de temps considérable pour la recherche scientifique et les projets, et facilitant la production ultérieure. Alpha Lifetech propose également à ses clients des services tels que la production d'anticorps VHH, d'anticorps scFv et d'anticorps Fab.

Alpha Lifetech dispose d'une plateforme complète de phage display M13/T7 pour la construction et la production de banques d'anticorps. Nous proposons également des services personnalisés, tels que la production d'anticorps scFv et le criblage à haut débit d'anticorps, afin de répondre à vos besoins spécifiques.

Introduction au phage display

La technologie du phage display est une technique qui utilise des phages (virus infectant les bactéries) pour rechercher des molécules de liaison fonctionnelles à des protéines ou des peptides spécifiques. Les techniques de construction de banques d'anticorps de phages comprennent la construction de banques d'anticorps Fab, de banques d'anticorps scFv, de banques de nanocorps, etc. Selon le type de bactériophage, on distingue les systèmes M13, T7, T4, λ et autres. Selon le type de banque, on distingue les banques de peptides aléatoires, les banques d'ADNc, les banques d'anticorps et les banques de protéines. La technologie du phage display est simple et peu coûteuse. Cependant, elle limite la diversité génétique moléculaire des banques, car elle ne permet pas l'expression de séquences trop longues.

Actuellement, la technologie du phage display est largement utilisée. Elle a notamment permis des avancées significatives dans la recherche et le développement de nouveaux vaccins (vaccins synthétiques peu coûteux et efficaces), le développement de médicaments à base d'anticorps (criblage d'inhibiteurs enzymatiques), la transduction du signal cellulaire (criblage d'épitopes simulés) et la recherche sur les épitopes antigéniques (préparation d'anticorps monoclonaux).

Introduction au bactériophage T7

Le bactériophage T7 est un ADN double brin de 40 kb, enveloppé dans une capside de 60 nm de diamètre. Le connecteur entre la tête et la queue est une structure annulaire composée de multiples copies de gp8. La tête et le noyau du bactériophage T7 forment une structure cylindrique qui se lie à gp8 et permet la connexion entre la tête et la queue.

Fig. 1 Représentation schématique du bactériophage T7.(Référence: Progrès du système d'affichage de phages T7 (Revue))

Introduction au bactériophage M13

Le bactériophage M13 appartient au groupe des phages filamenteux appelés phages Ff. Il mesure 900 nm de long et 6,5 nm de large. Son génome, constitué d'ADN simple brin (ADNsb) de 6 407 paires de bases, comprend neuf gènes codant pour onze protéines différentes. Parmi celles-ci, cinq sont des protéines de capside, et six sont impliquées dans la réplication et l'assemblage du phage. La protéine de capside la plus abondante est la protéine G8P, composée d'environ 2 700 unités protéiques et formant une enveloppe autour du chromosome.

Fig. 2 Représentation schématique du bactériophage M13.(Référence: Principes de base de la technologie de présentation des phages d'anticorps)

Introduction à la technique du phage display pour les anticorps

La découverte d'anticorps est devenue de plus en plus importante en médecine moderne. Différentes approches existent pour découvrir des anticorps, mais la technique du phage display est la plus utilisée en sciences médicales.

Depuis 1990, différents formats d'anticorps ont été utilisés pour construire des banques de phages, notamment les VH, les VHH, les scFv, les diabodies et les anticorps Fab. Les scFv, composés des domaines structuraux VH et VL, sont des anticorps monocaténaires utilisés pour construire des banques d'anticorps scFv. Les scFv sont caractérisés par une demi-vie courte et une faible immunogénicité. Les banques d'anticorps Fab sont constituées des domaines VH, VL, CL et CH1, permettant un criblage rapide des anticorps idéaux à haute affinité. Les VHH, plus petites unités capables de se lier à l'antigène cible, constituent actuellement les banques de nanocorps. Les VHH présentent l'avantage d'une structure simple, d'un faible volume, d'une solubilité élevée, d'une bonne stabilité et d'une préparation et expression aisées. Les banques de nanocorps synthétiques (Nb) émergent comme une alternative intéressante à l'immunisation animale grâce à la stabilité et à la haute affinité de ces nanocorps synthétiques. Généralement, ces fragments d'anticorps sont fusionnés au G3P du phage M13, et en clonant un grand nombre de gènes codant pour un fragment d'anticorps, de grandes banques d'anticorps de phage display peuvent être générées à partir desquelles de nombreux anticorps divers peuvent être sélectionnés.

Processus de construction d'une bibliothèque de phages

Le processus de construction d'une banque de phages est le suivant : des amorces spécifiques sont conçues pour l'amplification par PCR, permettant d'obtenir des produits qui sont ligaturés par une enzyme au vecteur phagique T7/M13. Le plasmide phagique recombinant est ainsi construit. Ce plasmide est ensuite transformé dans des cellules réceptrices TG1, puis déposé sur un milieu contenant les antibiotiques appropriés. Après sélection des transformants, la culture est amplifiée. Après plusieurs cycles de culture, le phage se réplique plusieurs fois dans la bactérie et exprime avec succès la protéine ou le polypeptide cible. La banque de phages est alors purifiée afin d'éliminer les impuretés et les phages non liés.

Les régions variables (VH et VL) sont corrélées à la diversité des anticorps et ont été insérées dans le vecteur phagique avec une séquence codant pour la protéine PIII du phage. Après assemblage, la particule phagique est exposée et fusionnée avec l'extrémité N-terminale de la protéine de capside mineure III pour former un fragment d'anticorps fonctionnel, permettant ainsi d'obtenir une banque contenant la séquence d'ADN de l'anticorps.

Après la fin de la vaccination, le titre d'anticorps a été déterminé, et du sang a été prélevé chez l'animal une fois le titre validé. Les lymphocytes ont été isolés du sang, l'ARN a été extrait, et une RT-PCR a permis d'amplifier le fragment cible, et le fragment du gène de la région V a été obtenu. Le gène V a ensuite été amplifié à l'aide d'une amorce spécifique.

Les banques naturelles ainsi créées contiennent des anticorps faiblement immunogènes chez les animaux, capables de cibler n'importe quelle antigène. Les anticorps de phages se liant spécifiquement à l'antigène peuvent être collectés grâce à des techniques de criblage fixant ou marquant l'antigène.

L'antigène cible est fixé sur un support solide, tel qu'un puits de microplaque, ou couplé à une bille magnétique. La banque d'anticorps phagiques est ensuite ajoutée pour se lier à l'antigène. Après plusieurs élutions, les phages de faible affinité ou non spécifiques sont éliminés par lavage, tandis que ceux présentant des anticorps spécifiques sont retenus.

Application du phage display

La découverte d'anticorps revêt une importance croissante en médecine moderne. Différentes approches existent, mais la technologie du phage display est de plus en plus utilisée en sciences médicales. Depuis 1990, différents formats d'anticorps ont été employés pour construire des banques de phages, notamment les VH, les VHH, les scFv, les diabodies et les anticorps Fab.
Les banques de peptides de phages permettent la détermination rapide de la séquence des épitopes protéiques et sont devenues un outil puissant pour étudier l'interaction entre les épitopes et les récepteurs d'antigènes.
*Les fragments d'anticorps sont fusionnés au G3P du phage M13, et en clonant un grand nombre de gènes codant pour un fragment d'anticorps, de grandes banques d'anticorps de phage display peuvent être générées à partir desquelles de nombreux anticorps divers peuvent être sélectionnés.
*Le système d'affichage de phages T7 présente de nombreux avantages, notamment sa simplicité, sa grande sécurité, sa stabilité, sa facilité de stockage et de transport ; c'est pourquoi il est utilisé dans les vaccins préventifs et thérapeutiques.
*Le système d'affichage de phages T7 peut détecter divers antigènes, tels que les antigènes de surface de micro-organismes pathogènes et les antigènes cancéreux.

Phage

POURQUOI NOUS CHOISIR

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