Service de construction de lignes cellulaires stables

Alpha Lifetech est spécialisée depuis de nombreuses années dans le développement de procédés de construction de lignées cellulaires stables. Elle a mis au point une plateforme performante de construction de lignées cellulaires stables, comprenant plus de 300 types de cellules tumorales et primaires. Cette plateforme permet de fournir des lignées cellulaires stables, optimisant ainsi le temps consacré à la recherche scientifique et aux projets de développement, et facilitant la production ultérieure. Alpha Lifetech propose également à ses clients des services tels que le développement de procédés de production de lignées, le criblage et la construction de lignées, ainsi que la production de protéines recombinantes et d'anticorps, fournissant ainsi une base solide pour la recherche de nouveaux médicaments.

Alpha Lifetech dispose d'une plateforme cellulaire infectée par un lentivirus, permettant de personnaliser le protocole expérimental pour différents types de lignées cellulaires transmutées stables. Nous avons utilisé la technologie d'inactivation génique pour construire des lignées cellulaires CRISPR/Cas9 KO. Des techniques de surexpression et d'inhibition géniques ont été employées pour stabiliser les lignées transmutées. L'intégration génique ciblée complète nos services de construction de lignées cellulaires par intégration de vertex.

Introduction à la construction de lignées cellulaires stables

Une lignée cellulaire stable est une lignée cellulaire qui intègre des gènes étrangers dans le génome de la cellule hôte, permettant ainsi l'expression stable et prolongée de ces gènes. Le principe consiste à insérer le gène étranger dans un vecteur présentant une certaine résistance, à transfecter les cellules hôtes, à intégrer le gène étranger dans leur chromosome, puis à sélectionner les gènes de résistance présents dans le vecteur afin d'obtenir des lignées cellulaires stables exprimant fortement la protéine cible ou présentant une inhibition stable du gène cible, répondant ainsi aux exigences de l'expérience.

Alpha Lifetech dispose d'un atelier de stockage indépendant, d'un système de congélation et de gestion du stockage cellulaire optimal, et de plus de 300 types de cellules tumorales et de cellules primaires parmi lesquels choisir, dédiés à vos recherches scientifiques.

Processus de construction de lignées cellulaires stables

Lignée cellulaire stable - Alpha Lifetech

Méthode de construction de lignées cellulaires stables

Les méthodes de construction de lignées cellulaires stables comprennent les méthodes utilisant des lentivirus, des transposons, CRISPR/Cas9 et le criblage plasmidique.

La transfection par lentivirus est l'une des méthodes les plus couramment utilisées pour construire des lignées cellulaires stables. Cette approche présente l'avantage d'infecter presque tous les types de cellules et d'intégrer du matériel génétique dans le génome de la cellule hôte pour une expression stable sur une longue période. Cependant, ce système a certaines limitations : la capacité d'encapsidation des lentivirus étant limitée, il n'est pas adapté à la transcription de gènes possédant de longues régions de transcription.

Comparativement à la transfection par lentivirus, la transfection par transposon ne présente aucune restriction quant à la taille du gène et, grâce à l'optimisation continue de la technologie, l'efficacité d'insertion des transposons a été considérablement améliorée. Son inconvénient réside dans certaines limitations liées aux cellules primaires et dans la difficulté de transfecter ces cellules.

La technologie CRISPR/Cas9 comprend l'inactivation et l'insertion de gènes CRISPR. L'inactivation d'un gène CRISPR consiste à introduire une coupure double brin d'ADN, entraînant la perte de fonction du gène cible. L'insertion d'un gène CRISPR consiste à insérer des fragments d'ADN étrangers dans des gènes spécifiques, ce qui peut servir à réparer des gènes défectueux ou à introduire de nouveaux gènes fonctionnels.

Le criblage plasmidique est la méthode la plus simple de construction de lignées cellulaires. Elle consiste simplement à transfecter avec succès le plasmide cible dans la cellule et à exploiter la résistance correspondante lors d'un criblage à long terme. On obtient ainsi, avec une certaine probabilité, des lignées cellulaires stables.

Méthodes de construction de différentes lignées cellulaires stables

Méthode de médiation	Système lentivirus	Système de transposon	Médiation CRISP/Cas9	Dépistage des plasmides
Capacité du transporteur	5 ko	10 ko	5 ko	10 ko
Efficacité médiatisée	Haut	Normale	Normale	Faible
Chronologie	1 à 2 semaines	3 à 4 semaines	3 à 4 semaines	4 à 6 semaines
Avantage	Rapide et efficace	Sécurité et stabilité	Intégration à virgule fixe	coût inférieur
Défaut	Risque de biosécurité	Abondance d'expression normale	La transduction CAS9 est difficile et coûteuse.	Faible efficacité et instabilité

Difficultés techniques liées à la construction de lignées cellulaires stables

Avant de passer à l'échelle supérieure, un bioréacteur de petite taille est utilisé pour déterminer des paramètres tels que le gaz, le milieu de culture, la contrainte hydrodynamique minimale appliquée aux cellules, etc., afin de garantir la transposition à l'échelle industrielle. Cependant, même avec ces paramètres déterminés, l'environnement des grands bioréacteurs chez le producteur reste hétérogène, augmentant ainsi le risque d'échec. Forte de nombreuses années d'expérience dans la transposition de procédés de culture à grande échelle, Alpha Lifetech permet de limiter les erreurs, de réduire les risques et d'améliorer considérablement le taux de réussite. Par ailleurs, Alpha Lifetech garantit la constance des lots de matières premières et de milieux de culture utilisés, réduisant ainsi le taux d'échec lors de la transposition à l'échelle industrielle.

Alpha Lifetech dispose d'une plateforme complète de développement de lignées cellulaires stables afin de garantir leur stabilité durant la production. Nous proposons également des services personnalisés pour répondre à vos besoins.

Contenu du service de construction de lignes cellulaires stables

Contenu	Chronologie
Lignée cellulaire HEK293 fournie par le client.	3-5 mois
Construction du plasmide sgRNA-Cas9 (avec le gène de criblage G418).
Le sgRNA-Cas9 et la matrice d'ADN de réparation ont été co-transférés à la lignée cellulaire HEK293.
Criblage de lignées cellulaires monoclonales (gène GFP) clone positif knock-in).
Livraison : Vecteur, souche génétiquement modifiée par insertion du gène GFP, résultats de séquençage, toutes les données brutes, rapport de laboratoire

Les cellules peuvent être suivies

Les cellules sont achetées auprès d'organisations professionnelles telles que l'ATCC et peuvent fournir la preuve nécessaire pour répondre à vos besoins en matière d'enregistrement.

Avantage de production

Alpha Lifetech bénéficie de nombreuses années d'expérience pour répondre à divers besoins de développement ; nous disposons d'une variété de cellules, d'un atelier de stockage indépendant, d'une congélation cellulaire parfaite et d'un système de gestion du stockage.

Contrôle qualité du projet

Chaque projet est soumis à des processus de contrôle qualité rigoureux afin de garantir la livraison de lignées cellulaires répondant à des normes élevées aux clients.

Avantage technique

Outre des ingénieurs possédant une vaste expérience en matière de cellules, nous disposons d'algorithmes évolutifs technologiques avancés pour améliorer les conditions du réacteur et modifier les paramètres du processus.

Si vous avez des questions, n'hésitez pas à nous contacter à tout moment.

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