L'anticorps VHH est un anticorps naturel dépourvu de chaîne légère (VL), présent dans le sérum des chameaux. Sa structure est simple et ne comprend que deux chaînes lourdes (VH). Les nanocorps sont constitués d'une région variable de chaîne lourde (VHH) d'un poids moléculaire d'environ 15 kDa. L'anticorps VHH possède une capacité normale de reconnaissance des antigènes et présente une excellente affinité, une excellente spécificité, une excellente stabilité et une excellente pénétration. Des anticorps dirigés contre cette structure ont depuis été découverts chez d'autres animaux, tels que les alpagas et les requins. Les nanocorps, qui ne contiennent qu'une seule région variable de chaîne lourde et deux régions conventionnelles CH2 et CH3, malgré l'absence de domaine VL, sont des anticorps monodomaines très stables et les plus petites unités de liaison connues possédant une activité anticorps. Alpha Lifetech propose à ses clients une gamme complète de services, incluant la préparation de nanocorps, la construction et le criblage de banques de nanocorps, l'expression de nanocorps VHH, ainsi qu'une série d'autres services. Grâce à sa plateforme de synthèse de nanocorps et de développement de phages display, Alpha Lifetech est en mesure de construire et de cribler efficacement différents types de banques d'anticorps de phages, et de fournir à ses clients des solutions d'anticorps spécifiques et hautement spécifiques. Nous pouvons également développer pour nos clients des stratégies professionnelles d'humanisation des anticorps, qui peuvent être humanisées pour les nanocorps, et notre entreprise est quasiment équivalente aux anticorps humains.

Tout d'abord, l'alpaga sain permet aux immunogènes de stimuler son système immunitaire et de produire une réponse immunitaire. Ces animaux sont alors capables de produire des anticorps à domaine unique. Ensuite, nous avons isolé des lymphocytes B individuels à partir de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) d'alpaga, puis extrait leur ARN et l'avons transcrit en ADNc. Ce dernier a servi de matrice pour sélectionner notre séquence VHH cible par électrophorèse. Nous avons ensuite réalisé un séquençage de la séquence d'anticorps VHH sélectionnée, ce qui permet d'améliorer la stabilité et l'affinité de l'anticorps VHH préparé. Parallèlement, nous avons également effectué une mutagénèse dirigée et un criblage de stabilité des anticorps VHH. Nous avons ainsi pu obtenir des mutants d'anticorps VHH plus stables en introduisant des mutations spécifiques lors du criblage. L'ingénieur a ensuite inséré la séquence VHH résultante dans un vecteur d'expression approprié (plasmide, virus, etc.) pour l'expression de l'anticorps VHH. Enfin, grâce aux technologies de présentation sur phage ou sur levure, les anticorps VHH sont exprimés à la surface de l'hôte. Les nanoanticorps capables de se lier spécifiquement à l'antigène cible sont ensuite sélectionnés à l'aide d'antigènes de revêtement et d'un test ELISA. Alpha Lifetech a également séquencé et vérifié les nanocorps sélectionnés afin de garantir l'exactitude et l'activité fonctionnelle des séquences de nanocorps livrées aux clients.

La technologie VHH tire parti des avancées du génie génétique pour permettre le réépissage et le réarrangement du gène cible dans des conditions normales. Ceci offre un outil à forte affinité pour d'autres technologies, pouvant contenir divers marqueurs. Les anticorps produits par la technologie VHH sont faciles à purifier. Grâce à des techniques de criblage à haut débit, Alpha Lifetech peut sélectionner rapidement, parmi un grand nombre d'anticorps, ceux qui présentent les fonctions spécifiques requises par ses clients. Par ailleurs, les anticorps VHH peuvent être produits de manière illimitée et économique, même exposés à de hautes températures et à divers solvants. Ils peuvent être génétiquement modifiés pour d'autres applications, comme servir d'échafaudages, être marqués ou présenter des modifications d'acides aminés spécifiques. Les anticorps VHH sont compatibles avec toutes les plateformes utilisant des anticorps conventionnels, telles que les plaques de microtitration, les biocapteurs électrochimiques et les dispositifs à flux latéral. Leur petite taille permet une densité plus élevée dans le domaine de liaison, ce qui confère aux anticorps VHH un signal accru et, par conséquent, une sensibilité supérieure. Parallèlement, les anticorps VHH trouvent de nombreuses applications dans le diagnostic et le traitement des tumeurs, le diagnostic des inflammations, le traitement des maladies du système nerveux central et d'autres domaines. Ils sont particulièrement utiles pour la surveillance des mycotoxines dans les aliments pour animaux et les denrées alimentaires, car ils sont faciles à modifier génétiquement et présentent une excellente stabilité.

Lors de la vaccination, nous utilisons divers immunogènes. Selon leurs propriétés, on distingue les antigènes naturels, les antigènes recombinants, les antigènes synthétiques et les antigènes de petites molécules. Les antigènes naturels comprennent les immunogènes viraux. Leur purification est complexe et plus difficile que celle des autres immunogènes, ce qui engendre également un coût plus élevé. Les immunogènes viraux se divisent en vaccins à virus entier inactivé, vaccins sous-unitaires, vaccins à vecteur viral et vaccins à ARNm. Les vaccins à virus entier inactivé stimulent la réponse immunitaire, mais nécessitent une inactivation complète du virus et leur préparation est plus complexe. Les vaccins sous-unitaires utilisent uniquement la protéine de surface virale comme antigène, ce qui leur confère une grande sécurité. Toutefois, l'ajout d'un adjuvant est nécessaire pour renforcer leur efficacité. Après modification génétique, les adénovirus et les lentivirus servent de vecteurs pour induire une réponse immunitaire par réplication et expression virales. L'effet immunitaire est efficace et durable, mais le processus de préparation est complexe, ce qui exige un contrôle strict de la biosécurité. Bien que l'ARNm puisse être directement importé dans les cellules, permettant ainsi l'expression de l'antigène et la stimulation de la réponse immunitaire, ce processus est plus complexe et nécessite de garantir la stabilité et l'efficacité de la délivrance de l'ARNm. Malgré leur conformation différente des antigènes naturels, les antigènes recombinants peuvent être produits à l'échelle industrielle. Les antigènes protéiques ou polypeptidiques de petite taille peuvent être préparés par synthèse in vitro. Leur structure est contrôlable, mais leur conception peut s'avérer complexe. Les antigènes de petite taille sont principalement des composés tels que des peptides et des nucléotides, car ils ne sont pas immunogènes en eux-mêmes ; ils ne peuvent donc être utilisés comme immunogènes qu'après avoir été liés à des vecteurs macromoléculaires.

Le poids moléculaire des nanoanticorps est très faible, généralement de l'ordre de 12 à 15 kDa, soit seulement un dixième de celui des anticorps IgG classiques. Leur structure cristalline, de forme sphérique, mesure environ 2,5 nm de diamètre et 4,2 nm de long. Cette structure moléculaire unique leur confère une bonne pénétration tissulaire, une demi-vie plus courte et une clairance rénale accrue, grâce à leur capacité à traverser la barrière hémato-encéphalique. Les nanoanticorps sont constitués de régions déterminant la complémentarité (CDR) et d'un squelette. Les régions CDR comprennent les CDR 1, CDR 2 et CDR 3. La longueur de la région CDR 3, comprise entre 3 et 28 acides aminés, assure la capacité de stockage de la bibliothèque de nanoanticorps. Contrairement à la région CDR 3 des anticorps classiques, qui ne compte que 8 à 15 acides aminés, certaines régions CDR 3 plus longues nous ont permis d'identifier des épitopes cachés à la surface de l'antigène. La région centrale des nanocorps comprend les domaines FR1, FR2, FR3 et FR4. Le domaine FR2 présente quatre mutations d'acides aminés hydrophiles, ce qui améliore la solubilité de l'anticorps dans l'eau. La liaison disulfure spécifique entre les domaines CDR1 et CDR3 renforce la stabilité des anticorps sous haute pression, haute température, en présence d'agents dénaturants et dans d'autres conditions, ce qui facilite la production et la conservation des nanocorps et ouvre la voie à de nouvelles méthodes d'administration.