Platfoarm foar dierimmunisaasje

De dierlike boarnen fan Alpha Lifetech binne dúdlik, mei ynspeksje- en karantênefergunningen, dúdlike genetyske eftergrûnen, dúdlike immunisaasjefrekwinsje en detaillearre records fan immunisaasje-yntervallen, wêrtroch handige tsjinsten wurde levere foar de produksje fan antistoffen. It immunisearret benammen Camelidae-bisten (Alpaca Liama en Kamelen), en leit de basis foar de produksje fan nanobody's. Derneist kin it ek gewoane bisten (lykas Nij-Seelânske wite kninen, mûzen en oare bisten) immunisearje neffens de fereaske immunisaasjefrekwinsje en immunogeniteitseasken fan klanten, se ekstrahearje en isolearje yn PBMC's, en se brûke foar folgjende eksperiminten (lykas monoklonale antistoffen, ûntwikkeling fan polyklonale antistoffen, ensfh.). Klanten kinne har eigen immunogenen leverje, en wy sille strange kwaliteitskontrôle derop útfiere. As klanten firale immunogenen leverje, moatte se ynaktivearre wurde en sille wy ynaktivaasjetests útfiere om feiligens te garandearjen. Tagelyk kinne wy ek oerienkommende immunogenen oanpasse neffens de behoeften fan 'e klant.

Ynlieding ta dierimmunisaasje

By it produsearjen fan antistoffen ôflaat fan dieren lykas monoklonale antistoffen, polyklonale antistoffen en nanobodies, is de earste stap it immunisearjen fan 'e bisten en it krijen fan oerienkommende B-sellen, antistoffen of PBMC's om ta te rieden op fierdere antistofproduksje, basiswittenskiplik ûndersyk te befoarderjen, klinyske diagnostykynstruminten te ûntwikkeljen en de ûntdekking en ûntwikkeling fan nije medisinen te fasilitearjen. Kamelen, alpaca's, Liama en oare kamelen yn Camelidae kinne nanobody-bibleteken (iendomein-antistoffen) produsearje troch ymmúnbloed te sammeljen en PBMC's te ekstrahearjen. Kninen en oare bisten kinne immunisearre wurde en antistoffen kinne út har lichems ekstrahearre wurde. Nei suvering kinne se brûkt wurde om polyklonale antistoffen te produsearjen. Mûzen, rotten, ensfh. kinne brûkt wurde om monoklonale antistoffen te produsearjen troch ymmún-ekstrahearre B-sellen te fusearjen mei myelomasellen. Foar immunisaasje moat omtinken jûn wurde oan 'e 3R-prinsipes (ferfanging, reduksje, ferfining), dy't it oantal brûkte bisten signifikant kinne ferminderje ta it needsaaklike minimum, eksperimintele prosedueres kinne ferbetterje en it lijen fan dieren minimalisearje. Goed eksperiminteel ûntwerp, seleksje fan passende antistoffen en strange falidaasjeprosedueres moatte ek folge wurde.

Klassifikaasje fan immunogenen - produksje fan nanobody's

Soarten immunogenen	Foarbyld	Immunogen tarieding	Notysjes
Proteïne-immunogenen	Enzymen, aaiwiten, baktearjele gifstoffen en oare stoffen	Kies ferskate proteïne-ekspresjesystemen: E. coli, gist, ynsektensellen, sûchdiersellen en seldrije systemen	Jou omtinken oan faktoaren lykas temperatuer, tiid, pH en ynklúzjelichems dy't ynfloed hawwe op proteïne-ekspresje
Nukleïnezuur-immunogenen	DNA, RNA	DNA-immunogen: Konstruearje plasmid-DNA, kloon geskikte ekspresjefektoaren foar doelgenen, kweek sellen om plasmid-DNA te amplifisearjen, en ekstrahearje plasmid-DNA mei hege suverens RNA-immunogen: Moatstruktuer en PolyA-sturt tafoegje om degradaasje te foarkommen	By it tarieden fan DNA-immunogenen moat omtinken wurde bestege oan 'e passende gasthearsellen, en by it tarieden fan RNA-immunogenen moat omtinken wurde bestege oan it foarkommen fan RNA-degradaasje.
Virale immunogenen	Faksin mei ynaktivearre firus, subunitfaksin, firale fektorfaksin (adenovirus, lentivirus, ensfh.), mRAN-faksin.	By it tarieden fan in faksin dat troch in folslein firus ynaktivearre is, wurdt it firus earst ynaktivearre om de feiligens te fergrutsjen. Toksisiteitstests wurde brûkt om te bepalen oft de ynaktivaasje foltôge is. Subunit-faksinen hawwe allinich firusoerflakproteïnen nedich as antigenen en moatte rekken hâlde mei ymmúneffektiviteit.	Adjuvanten moatte tafoege wurde om ymmúneffekten te jaan, omtinken moat bestege wurde oan it firus dat ynaktivearre wurde moat, passende firustiters binne nedich om ymmúneffekten te garandearjen, en de feiligens fan it tariedingsproses moat strang kontroleare wurde.

Proses of tiidline foar dierimmunisaasje

Diereseleksje en antigen tarieding

Diereseleksje: Selektearje alpaca's fan 'e juste leeftyd en sûne fysika út sûne groepen, en doch bloedûndersyk en syktescreening om te soargjen dat d'r gjin ynfeksjesykten of oare sûnensproblemen binne.

Immunogentarieding: Immunogenen binne de kaai ta it opwekken fan ymmúnreaksjes en fereaskje de seleksje fan passende aaiwiten, peptiden of oare geskikte stoffen op basis fan 'e easken fan it doelantistof.

In alpaca kin tagelyk immunisearre wurde mei 1-3 antigenen, mei in totale antigenhoeveelheid fan 1-2 mg per immunisaasje en in folume fan minder as 2 ml. Foar immunisaasje wurde it antigen en adjuvant emulgearre yn in ferhâlding fan 1:1 om in unifoarm mingsel te foarmjen, dat bewarre wurdt by 4 ℃.

Immunologyske alpaca

Registrearje it lege alpaca-earnûmer en begjin it immunisaasje-eksperimint. Ynjeksje yn 'e lymfeklieren tichtby de nekke fan' e alpaca oan beide kanten, mei 2 punten oan elke kant en sawat 0,4 ml emulgearre antigen ynjeksje op elk punt. Observearje nei immunisaasje in heal oere om te befestigjen dat de alpaca gjin ûngemaksymptomen hat. Immunisaasje moat elke 2 wiken wurde jûn, mei teminsten 4 immunisaasjes.

Bloedkolleksje

Nei 4 ymmunisaasjes fan 5-7 dagen, sammelje 50 ml bloed út 'e nekader fan' e alpaca.

Serumskieding

Bloedmonsters wurde sammele foar ymmúnevaluaasje foar elke antigeenimmunisaasje, wêrby't elke kear 5 ml bloed ôfnommen wurdt; Op deselde dei waard it bloed 30 minuten sintrifugearre by 400 xg mei in foarôfkuolle sintrifuge fan 25 ℃. De boppeste laach serum waard skieden en opslein foar folgjende antistoftitertests.

Aparte lymfocyten

Foegje earst 15 ml selskiedingsoplossing ta, en dan stadich 15 ml bloed ta oan in sintrifugearbuis fan 50 ml. Wês foarsichtich en stadich by it tafoegjen fan bloed om minging fan bloed en skiedingsoplossing te foarkommen. Foarôfkuolle sintrifugearje by 25 ℃, sintrifugearje by 400 xg foar 30 minuten, en bewarje it boppeste serum yn in nije sintrifugearbuis by -80 ℃; Brûk in pipette om de middelste katoenfoarmige boppeste laach ymmúnsellen yn in nije sintrifugearbuis fan 50 ml op te sûgjen. Foegje 10 ml PBS-buffer by keamertemperatuer ta oan elke buis, sintrifugearje by 25 ℃ en 400 xg foar 20 minuten. Ferwiderje de supernatant, foegje 5 ml PBS-buffer by keamertemperatuer ta oan elke buis, mingje goed foarsichtich, berekkenje it oantal sellen mei in hemocytometer, en sintrifugearje dan by 25 ℃ en 400 xg foar 20 minuten. Ferwiderje de supernatant en los de lymfocyten op dy't krigen binne mei RNAiso Plus op basis fan it oantal sellen om 10 ^ 7/mL sellysaat te krijen, dat opslein wurdt by -80 ℃.

Fig. 1: Skematyske werjefte fan ferskate strategyen foar it ûntdekken fan antistoffen en de eksperimintele stadia dy't derby belutsen binne. (Boarne fan de ôfbylding: Laustsen, Andreas H. et al.)

Klanten leverje immunogenen - strange kwaliteitskontrôle

Soarten immunogenen	Eask	Kwaliteitskontrôlemetoade
Peptide / Lytse molekule-samples	Oplossingsbetingsten (benammen ôfhinklik fan oft se fagen ynaktivearje sille), molekulêre struktuer/peptidesekwinsje, syntezerapport (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS-deteksje
Proteïnemonsters	SDS-PAGE/WB, rekonstitúsjebetingsten, buffer, etiketynformaasje, totale hoemannichte (20-50 ug), konsintraasje, suverens, ensfh.	SDS-PAGE/WB
Selmonsters	Seltype (primêre sellen/genbewurke sellen), selfoarm (farsk/beferzen ûntdooid), groeitype (oanhingjend/suspendearre), easken foar kweekmedium, oantal levere sellen, oantal levere sellen, genbewurke sellen om stabile ekspresje fan screeningdoelen te garandearjen (klant-oerienkommende primêre antistof), beferzen ûntdooide sellen om herstelpersintaazje te bepalen	Benammen rjochte op gen-bewurke sellen, mei help fan primêre antistoffen levere troch de klant foar ELISA-identifikaasje fan doelwitekspresje (ús bedriuw leveret sekundêre HRP-antistoffen), flowcytometry-deteksje (ús bedriuw kin fluorescerende sekundêre antistoffen leverje).

Wat binne de tapassingen fan dierimmuniteit?

+

Polyklonale antistoffen kinne produsearre wurde troch immunisaasje fan bisten, monoklonale antistoffen kinne produsearre wurde troch B-sellen te fusearjen mei myelomasellen, en PBMC's kinne ekstrahearre wurde út kamielboarnen (alpaca, kamiel, alpaca, ensfh.) om ferskate antistoffragmentfoarmen te produsearjen lykas nanobodies, Fab-fragminen, scFv-antistoffragminen, ensfh.
Wat binne de foarsoarchsmaatregels foar ymmuniteit fan bisten?

+

Om nano-antistoffen te produsearjen foar bisten dy't fan kamielen ôfkomstich binne, binne 5-6 ymmunisaasjes nedich. Bloedmonsters moatte as kontrôle sammele wurde foar ymmunisaasje, mei in ynterval fan 2 wiken tusken elke ymmunisaasje. Nei de fjirde ymmunisaasje moat posityf bloed en net-ymmunisearre negatyf bloed sammele wurde foar ELISA om de titer te bepalen. As de titer ûnder 10 ^ 6 is, moat it oantal ymmunisaasjes ferhege wurde oant de titer in passend nivo berikt. Foar oare dierimmunisaasjes lykas knineimmunisaasje (it optimale of mienskiplike proteïneantigeennivo foar knineimmunisaasje is 50-1000 ug), mûsimmunisaasje (it optimale of mienskiplike proteïneantigeennivo foar mûsimmunisaasje is 5-50 ug, wat 10 ^ 6 sellen fereasket as it in sel is, en 10-50 ug foar nukleïnezuur of koalhydraten), geiteimmunisaasje (it optimale of mienskiplike proteïneantigeennivo foar geiteimmunisaasje is 250-5000 ug), ensfh., moat omtinken wurde bestege oan de dosaasje, feiligens en effektiviteit fan immunogenen.
Hoe kieze jo ymmúne bisten?

+

Ofhinklik fan it type antistof dat de klant nedich hat, kinne jo, as jo nanobodies of oare antistoffragminen produsearje moatte, kieze foar bisten dy't fan kamielen ôfkomstich binne (kamelen, alpaca's, alpaca's) foar immunisaasje. As jo monoklonale of polyklonale antistoffen produsearje moatte, moatte jo de oerienkommende soarte selektearje op basis fan 'e hoemannichte serum, antigen en antigenboarne. De maksimale serumhoemannichte foar kninen is 500 ml, wat in lege hoemannichte antigen fereasket en de primêre kar is foar it produsearjen fan polyklonale antistoffen. De maksimale serumhoemannichte foar mûzen is 2 ml, en de maksimale serumhoemannichte foar rotten is 20 ml, wat meastentiids de optimale kar is foar monoklonale antistoffen. Antistoffen produsearre troch geiten hawwe in hege affiniteit, en Alpha Lifetech kin in eksklusyf immunisaasjeplan foar jo oanpasse neffens jo easken.
Moatte antigenen tegearre mei adjuvanten brûkt wurde? Hoe kieze?

+

Der binne twa soarten adjuvanten: op oaljebasis en op wetterbasis. Redelik gebrûk fan adjuvanten is krúsjaal foar it opwekken fan sterke antistofreaksjes op oplosbere antigenen. De oanhâldende frijlitting fan adjuvanten betsjut dat minder doses antigenen brûkt wurde kinne, en antistofreaksjes binne langer duorjend. De earste ynjeksje moat brûkt wurde yn kombinaasje mei in adjuvant. It wurdt oer it algemien oanrikkemandearre om Freund's adjuvant te brûken as de hoemannichte immunogeen lyts is.
Foarsoarchsmaatregels foar it ymmunisearjen fan alpaca's?

+

(1) De seleksje fan alpaca en it antygen fan ymmúniteit binne de kaai ta suksesfolle ymmunisaasje. It kiezen fan in goed proporsjonearre kamiel is net oan te rieden. De suverens en juste konformaasje fan ymmúnantigenen binne krúsjaal foar it screenen fan geskikte antistoffen foar folgjende tapassingen nei ymmunisaasje mei alpaca's. De suverens fan proteïneantigenen is oer it algemien net minder as 90%.

(2) Skieding fan lymfocyten: Tydlike selskieding kin hemolyse effektyf foarkomme nei bloedôfname om it bêste skiedingseffekt te berikken.

(3) De ymmúnsyklus kin ynfloed hawwe op de ymmúnreaksje: in ymmúnynterval fan 1-2 wiken lit alpaca's in goede ymmúnreaksje hawwe op de measte antigenen.

ûnôfhinklik ûntwikkele adjuvans

Us unike formule-adjuvans is optimalisearre foar it ymmúnsysteem fan alpakka, en biedt hegere krêft en spesifisiteit as tradisjonele adjuvanten.

Levering fan ymmunisaasje
standert

Wy tasizze de immunisaasje binnen de oantsjutte tiid te foltôgjen, serum mei hege titer te leverjen, en elke stap te registrearjen fia detaillearre rapporten.

projekt Kwaliteitskontrôle

Elk projekt ûndergiet strange kwaliteitskontrôleprosessen om de levering fan antistoffen dy't foldogge oan hege noarmen oan klanten te garandearjen.

dúdlikAlpacaEftergrûn

Wy hawwe in sûne alpacapopulaasje dy't stipe biedt foar ferskate ymmunisaasjeprogramma's.

As jo fragen hawwe, nim dan gerêst kontakt mei ús op.

Leave Your Message

Featured Service

0102