Platfoarm foar ûntwikkeling fan antistoffen foar humanisaasje

Humanisearre antistoffen triggerje minimale of gjin reaksje fan it minsklik ymmúnsysteem. Neffens Cognitive Market Research is de wrâldwide merk foar antistofhumanisaasje USD 92,5 miljoen yn 2024 en sil útwreidzje mei in gearstalde jierlikse groeisnelheid (CAGR) fan 13,00% fan 2024 oant 2031. Alpha Lifetech hat in folwoeksen platfoarm foar humanisaasje fan antistoffen, mei in súksespersintaazje fan mear as 98% foar humanisearre antistoffen. Wy hawwe meardere humanisaasjestrategyen, ynklusyf CDR-transplantaasje, SDR-transplantaasje, chain shuffling, phage display, ensfh., dy't selektearre wurde kinne neffens jo eksperimintele behoeften. Wy kinne net allinich de humanisaasje fan antistoffen fan meardere soarten leverje, lykas mûzen, kninen, alpaca's, kamelen, ensfh., mar ek de humanisaasje fan antistoffen yn ferskate foarmen, lykas scFv, Fab, en nanobodies. Wy hawwe profesjoneel technysk personiel om tsjinsten foar antistofproduksje, suvering en falidaasje te leverjen, ynklusyf produksje fan mûsmonoklonale antistoffen, produksje fan chimere antistoffen, ekspresje en suvering fan humanisearre antistoffen, en karakterisaasje en analyze fan humanisearre antistoffen. Mei in hege súksesrate, hege suverens en lege immunogeniteit garandearje wy de produksje fan humanisearre antistoffen.

Ynlieding ta antistofhumanisaasje

Monoklonale antistofterapy kin brûkt wurde foar de behanneling fan autoimmune sykten, kanker en oare sykten. Monoklonale antistoffen wurde produsearre troch mûzen of oare bisten te immunisearjen. As se brûkt wurde om sykten te behanneljen yn 'e lettere faze fan' e produksje fan monoklonale antistoffen, kin de immunogeniteit fan net-minsklike antistoffen net negearre wurde. It wichtichste prinsipe fan humanisaasje is it yntegrearjen fan net-minsklike raamwurkresten, lykas hypervariabele komplementariteitsbepalende regio's (CDR's), yn it minsklik raamwurk, wêrtroch sekwinsjes produsearre wurde dy't de orizjinele antistofkarakteristiken behâlde, wylst immunogeniteit foarkommen wurdt. Mûsimmunisaasje en de folgjende mûsekwinsje-humanisaasje bliuwe twa fan 'e wichtichste paden foar it ûntdekken fan terapeutyske antistoffen, dy't benammen troch ferskate stadia geane: produksje fan mûsantistoffen, chimerisaasje fan monoklonale antistoffen, chimere mûsminsklike monoklonale antistoffen, en it ûntwikkelingsproses fan folslein humanisearre monoklonale antistoffen. Op it stuit omfettet ûndersyk benammen transgene mûzen (it oerdragen fan minsklike B-selgenen yn mûzen), hege-trochput screening mei gist- of faagdisplaytechnology, CDR-transplantaasje (it ynfoegjen fan âlderlike CDR's yn minsklike sekwinsjes), transplantaasjespesifike bepalingsresiduen (SDR), framework shuffling, en oare metoaden.

Fig. 1: Skematysk oersjoch fan antistofhumanisaasje fan mûsantistoffen (griene domeinen) nei folslein minsklike antistoffen.

Strategy foar humanisaasje fan antistoffen

CDR-transplantaasje

CDR-transplantaasje wurdt berikt fia in sûchdierekspresjesysteem basearre op rekombinante DNA-technology, en de wichtichste stappen binne:

(1) Untwikkelje oerienkommende antistoffen yn mûzen (of net-minsklike boarnen), isolearje DNA-kodearjende antistoffen, en kloon se yn fektoren foar sekwinsjearring (of fier direkt iensellige sekwinsjearring út).

(2) Om de DNA-sekwinsje te bepalen dy't oerienkomt mei de antistof-CDR en om de spesifisiteit fan 'e doelbining te bepalen;

(3) Selektearje de minsklike raamwurkregio (FR) om net-minsklike CDR's te transplantearjen en in nij antistofgen te konstruearjen.

(4) Fier in trijediminsjonale analyze út fan konflikten tusken net-minsklike CDR's en minsklike FR's om herstelmutaasjes te generearjen om de lus te stabilisearjen en ferlies fan affiniteit of strukturele yntegriteit fan it definitive humanisearre antistof te foarkommen.

Fig. 2: Skematysk oersjoch fan 'e komplementariteitsbepalende regio (CDR) grafting.

Framework shuffling

Framework shuffling is basearre op faagdisplaytechnology en faagbibleteekscreeningtechnology om antistoffen mei hege affiniteit te krijen. Oligonukleotiden dy't kodearje foar swiere ketenraamwurken fan minsklike antistoffen wurde brûkt as sjabloanen, CDR-regio's wurde kodearre as primers, en PCR-amplifikaasje wurdt útfierd om it PCR-produkt te denaturearjen om ienstrengs DNA te krijen. Ienstrengs DNA fan VL- en VH-genen suvere mei streptavidine wurdt rekonstruearre op fektoren mei T4 DNA-ligase en restriksje-enzymen, ynkubearre mei bakteriofagen, en amplifisearre troch bakteriofagen, en in faagdisplaybibleteek wurdt konstruearre. Trije rûndes fan screening mei oerienkommende antigenen wurde útfierd, en positive klonen wurde úteinlik ferifiearre mei ELISA en oare metoaden.

Fig. 3: Skematyske yllustraasje fan 'e komplementariteitsbepalende regio (CDR) grafting en framework (FR) shuffling humanisaasjestrategyen. (A) De wichtichste proseduere fan CDR grafting. (B) It wichtichste proses fan 'e FR shuffling. (Referinsjeboarne: Wang Yongmei, et al., Ferliking fan "framework shuffling" en "CDR grafting" yn 'e humanisaasje fan in PD-1 murine antistof.)

Faagwerjefte

De produksje fan humanisearre antistoffen is basearre op 'e metoade fan it werjaan fan spesifike antistoffen op it oerflak fan bakteriofagen, benammen makke troch minsklike antistoffaagbibleteken. De boarne fan 'e bibleteek binne PBMC's isolearre út minsklik perifear bloed om faagbibleteken te bouwen, wêrfan oerienkommende sekwinsjes wurde screene. Dizze sekwinsje hat de folsleine minsklike sekwinsje, mar de produsearre antistoffen binne antistoffragminen, lykas scFv, Fab, en nanobody.

Workflow foar tsjinst foar humanisaasje fan antistoffen

Tsjinststappen	QC-standert	Tiidline
Isolaasje fan antistoffen	Suverens >95%	1-2 wiken
Sekwinsje-analyze	Krekte identifikaasje fan net-minsklike sekwinsjes	1 wike
CDR-transplantaasje en framework-transplantaasje	Súksesfolle yntegraasje en ekspresje	2-3 wiken
Ekspresje en suvering	Hege opbringst en suverens	2-3 wiken
Funksjonele falidaasje	Affiniteits- en spesifisiteitsbeoardieling	1 wike

Foardielen fan it platfoarm foar humanisaasje fan antistoffen

Alpha Lifetech hat in folwoeksen platfoarm foar humanisaasje fan antistoffen, mei in súksespersintaazje fan mear as 98% foar humanisearre antistoffen.